結(jié)合計(jì)算機(jī)仿真與實(shí)驗(yàn)的響應(yīng)面法優(yōu)化抗耐藥結(jié)核菌藥物利奈唑胺脂質(zhì)體的處方組成及釋藥特性研究

楊紅月 黃偉

摘 ?要： 利用乙醇注入法制備抗結(jié)核藥利奈唑胺的脂質(zhì)體，并通過(guò)響應(yīng)面法分析得到最佳制備工藝和最優(yōu)處方。乙醇注入法制備所得的利奈唑胺脂質(zhì)體，包封率較高，其最佳工藝為膽固醇與卵磷脂的質(zhì)量比1∶3類脂注入緩沖液的速度1.2 ml/min、超聲時(shí)間3 min;包封率82.36%，RSD=1.32%。乙醇注入法制備利奈唑胺脂質(zhì)體具有較高的包封率以及緩控效果，Box-Behnken 響應(yīng)面法可以快速全面的選取最佳制備工藝，方便準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞： 抗結(jié)核;利奈唑胺脂質(zhì)體;乙醇注入法;響應(yīng)面法;包封率

中圖分類號(hào)： TP311.52 ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A ? ?DOI：10.3969/j.issn.1003-6970.2020.06.040

本文著錄格式：楊紅月，黃偉. 結(jié)合計(jì)算機(jī)仿真與實(shí)驗(yàn)的響應(yīng)面法優(yōu)化抗耐藥結(jié)核菌藥物利奈唑胺脂質(zhì)體的處方組成及釋藥特性研究[J]. 軟件，2020，41（06）：196203

【Abstract】： The liposomes of the antituberculous drug linezolid were prepared by ethanol injection， and the best preparation technology and prescription were obtained by response surface analysis. The results showed that the entrapment efficiency of linazolamide liposomes prepared by ethanol injection method was high. The best technology was： the mass ratio of cholesterol to lecithin： the speed of 1：3 lipid injection buffer was 1.2 ml/min， the ultrasound time was 3min; the entrapment efficiency was 82.36%， RSD = 1.32%. The preparation of linezolid liposomes by ethanol injection has high encapsulation efficiency and slow control effect. Box Behnken response surface method can quickly and comprehensively select the best preparation process， convenient and accurate.

【Key words】： Linezolid liposomes; Membrane dispersion method; The encapsulation rate; In vitro release; Response surface methodology

0 ?引言

結(jié)核病是一種慢性的由結(jié)核分枝桿菌感染引起的傳染病，結(jié)核分枝桿菌可導(dǎo)致全身器官感染患病，但主要為肺內(nèi)、外結(jié)核，由于結(jié)核桿菌寄生于肺泡深處，導(dǎo)致很多情況下用藥效果不好，不能徹底殺滅結(jié)核桿菌。近年來(lái)，利奈唑胺（linezolid）因其較好的抗菌活性和特有的作用機(jī)制而備受關(guān)注，利奈唑胺具有良好的抗結(jié)核分枝桿菌（MTB）的效果，并且對(duì)耐藥菌株也顯示出了很強(qiáng)的抗菌活性。目前利奈唑胺劑型多為口服片劑，雖然其具有許多優(yōu)勢(shì)，但其毒副作用也不容小覷，利奈唑胺有較多的輕度不良反應(yīng)包括胃腸道反應(yīng)（腹痛、嘔吐等）、頭痛和皮疹等，高發(fā)病率的的嚴(yán)重不良反應(yīng)為血小板減少癥等骨髓抑制反應(yīng)、神經(jīng)系統(tǒng)的不良反應(yīng)、心律失常和乳酸中毒癥。脂質(zhì)體是抗結(jié)核藥物的理想載體，可降低包封藥物的毒性，實(shí)現(xiàn)病灶部位直接給藥，而且脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)與細(xì)胞相似，二者之間具有相似相溶性可有效實(shí)現(xiàn)藥物傳遞，利奈唑胺為時(shí)間依賴性藥物與脂質(zhì)體的緩釋作用相輔相成。因此將利奈唑胺制備成脂質(zhì)體直接肺部給藥可使藥物直接作用于病變部位，減少原料藥在體內(nèi)其他組織的循環(huán)吸收，從而達(dá)到增加靶區(qū)血藥濃度，減少給藥劑量的目的。二者的融合將為結(jié)核患者帶來(lái)福音。本實(shí)驗(yàn)采用溶劑注入法將利奈唑胺制備成載藥脂質(zhì)體，并考察其最佳制備工藝和處方組成，為其進(jìn)行肺部霧化吸入直接給藥研究奠定基礎(chǔ)[1-6]。

1 ?儀器和材料

紫外分光光度計(jì)（UV-6000PC）鄭州寶京科技有限公司;臺(tái)式離心機(jī)（TG16-GWZ）成都喬越儀器有限公司;復(fù)合轉(zhuǎn)子離心機(jī)（Mnty-7KS）北京佑寧儀器有限公司; 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（QA-205B）濟(jì)寧瑞德儀器設(shè)備有限公司;醫(yī)用無(wú)菌注射器（7號(hào)）蘇州治宇醫(yī)療器材有限公司 ;循環(huán)水式多功能真空泵LY-E（II）鄭州紫拓工貿(mào)有限公司 ;數(shù)顯恒溫水浴鍋（JHH-4A）無(wú)錫馬瑞科技有限公司; 數(shù)控探頭超聲（SCQ-5211B）常州市超聲儀器有限公司;電子分析天平AUX200SHIMADZU CORPORATION JAPAN;磁力攪拌加熱板（MSH-R-B）上海越眾儀器有限公司;LS13320型激光粒度分析儀（江蘇 榮華儀器制造有限公司）;倒置熒光顯微鏡（U-LH100HG）OLYMPUS CORPORATION;恒溫水浴磁力攪拌器（SHJ-D60）無(wú)錫沃鑫儀器制造有限公司。

利奈唑胺（P09572）上海泰坦科技有限公司;磷酸二氫鈉（20170319）南通煜天化學(xué)品有限公司;甲醇（20181006）哈爾濱鑫達(dá)化工廠;卵磷脂（20180122）陜西澄明科技有限公司膽固醇（20180228）江蘇百得科技有限公司;二氯甲烷（20180315）濟(jì)南奧康化工股份有限公司;吐溫80（20180605）昆明遠(yuǎn)聯(lián)化工有限公司;磷脂膜熒光劑（20190310）SIGMAALDRICH;95%乙醇（20180121）哈爾濱鑫達(dá)化工廠。

2 ?方法

2.1 ?處方前研究

2.1.1 ?利奈唑胺原料藥理化性質(zhì)的考察

理化性質(zhì)：別名Renazzoli，白色或灰白色粉末，化學(xué)式為C16H20FN3O4，分子質(zhì)量為337.3461，熔點(diǎn)176-178℃，取過(guò)量利奈唑胺于10 ml試管中各加入6 ml乙醇、PH為6.7的PBS緩沖液、生理鹽水測(cè)定利奈唑胺在不同溶劑中溶解度，DMSO：>20 mg/ml[7-8]。

2.1.2 ?最大吸收波長(zhǎng)的確定

稱取定量磷酸二氫鈉用蒸餾水稀釋，用PH試紙測(cè)pH值。配制pH=6.7的磷酸鹽緩沖液（PBS）。

稱取25 mlpH為6.7的磷酸鹽緩沖液備用，精密稱取利奈唑胺0.5 mg溶解于緩沖液中，得到濃度為20 ?g/ml的利奈唑胺溶液，在處于200-400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)用紫外分光光度計(jì)每相隔10 nm測(cè)定吸光度，進(jìn)行曲線繪制，探索最大吸收波長(zhǎng)。

精密稱取卵磷脂和膽固醇適量制備空白脂質(zhì)體，于25 ml容量瓶中，用pH為6.7的PBS定容至25 ml，在處于200-400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)用紫外分光光度計(jì)每相隔10 nm測(cè)定吸光度，繪制曲線，探索最大吸收波長(zhǎng)。

2.2 ?方法學(xué)考察

2.2.1 ?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及線性回歸分析

稱取1mg利奈唑胺，用pH為6.7的PBS溶液充分溶解移至容量瓶中定容至25 ml，得到濃度為40 ?g/ml的備用液。精密移取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.12、0.24、0.48、0.96、1.46、1.96、2.46、2.96 ml于25 ml容量瓶中，對(duì)應(yīng)濃度為1、2、4、8、12、16、20、24 ?g/ml用pH為6.7的緩沖溶液定容至25 mL充分振蕩得到標(biāo)準(zhǔn)液。以pH為6.7的PBS溶液為空白對(duì)照，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以利奈唑胺濃度C（?g/ml）為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性分析。

2.2.2 ?精密度試驗(yàn)

分別取低、中、高（2、12、24 ?g/ml）三種濃度的線性范圍內(nèi)利奈唑胺PBS標(biāo)準(zhǔn)溶液，室溫放置，采用紫外分光光度計(jì)測(cè)定，一天內(nèi)測(cè)定5次，求算日內(nèi)精密度，每天測(cè)定1次，連續(xù)采集5天數(shù)據(jù)，求算每天之間的精密度。

2.2.3 ?回收率試驗(yàn)

按處方的比例精密稱取脂質(zhì)體適量于三支容量瓶中，分別加入濃度為2、12、24的利奈唑胺原料藥，加入甲醇溶解定容后，搖勻，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。計(jì)算平均回收率和RSD。

2.2.4 ?穩(wěn)定性試驗(yàn)

取適量利奈唑胺原料藥溶液（濃度12 ?g/ml），室溫下放置0、1、2、4、6、12 h于最大吸收波長(zhǎng)處用紫外分光光度計(jì)測(cè)定吸光度和RSD。

2.2.5 ?利奈唑胺脂質(zhì)體包封率測(cè)定方法的確立

脂質(zhì)體包封率為被包封在脂質(zhì)體囊中的藥量占脂質(zhì)體混懸液中總體藥量的比例，是本文中評(píng)價(jià)脂質(zhì)體的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)采用的分離游離藥物和載藥脂質(zhì)體的方法為離心法。

包封率測(cè)定方法：取兩支相同型號(hào)離心管，精密量取等質(zhì)量的利奈唑胺脂質(zhì)體，室溫下于2600 r/min離心機(jī)下離心30 min，取上清液0.2 ml至25 ml容量瓶中，用pH為6.7的緩沖溶液定容，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，代入回歸方程即得C上清;再取兩支同型號(hào)試管量取等質(zhì)量上述同一批的利奈唑胺脂質(zhì)體，分別加3ml甲醇實(shí)現(xiàn)破乳的目的，充分振蕩后轉(zhuǎn)到離心管中，之后操作與游離藥物量的測(cè)定相同，得到C總[9-11]。

計(jì)算包封率的公式：包封率=（C總C游離）/C總×100%

其中：C上清是上清液中游離藥物濃度;C總是破乳后利奈唑胺脂質(zhì)體的藥物濃度。

2.3 ?溶劑（乙醇）注入法制備利奈唑胺脂質(zhì)體

精密稱取處方考察量卵磷脂和膽固醇和10 mg利奈唑胺原料藥于燒杯中，加入95%乙醇5 ml，吐溫80 0.2 ml，在60℃恒溫水浴下攪拌至充分溶解形成類脂，同時(shí)量取pH=6.7的緩沖液（PBS）40 ml置于恒溫50℃水浴磁力攪拌器上預(yù)熱，用10 ml注射器抽取上述類脂溶液在考察量范圍內(nèi)注入50℃PBS溶液中，攪拌水化1 h，之后室溫下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇（也可不旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)），取出樣品在考察范圍內(nèi)進(jìn)行探頭超聲，超聲后置于40℃恒溫水浴鍋中放置0.5 h即得成品[12-15]。

2.4 ?利奈唑胺脂質(zhì)體制備工藝及處方因素考察

2.4.1 ?乙醇注入法制備利奈唑胺脂質(zhì)體單因素工藝考察

2.4.1.1 ?脂質(zhì)溶液注入PBS緩沖液速度

其他條件不變情況下，以注射速度分別為0.3、0.6、1.2、2.4、4.8 ml/min來(lái)考察利奈唑胺脂質(zhì)體包封率。

2.4.1.2 ?探頭超聲時(shí)間

其他條件不變情況下，以超聲時(shí)間為變量，分別以1、3、5、7 min來(lái)考察利奈唑胺脂質(zhì)體包封率。

2.4.1.3 ?水浴溫度

其他條件不變情況下，以水浴溫度為變量，在水浴溫度為20、30、40、50、60℃下進(jìn)行利奈唑胺脂質(zhì)體的制備并考察其包封率。

2.4.2 ?利奈唑胺脂質(zhì)體處方單因素考察—膽固醇與卵磷脂質(zhì)量比

其他條件不變情況下，以膽固醇與卵磷脂質(zhì)量比分別為1：2、1：3、1：4、1：5對(duì)利奈唑胺脂質(zhì)體包封率進(jìn)行考察。該法采用膽固醇質(zhì)量不變，增加卵磷脂質(zhì)量來(lái)改變二者比值。

2.5 ?Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化工藝

根據(jù)單因素考察結(jié)果，采用Box-Behnken 響應(yīng)面優(yōu)化工藝，選取上述四種單因素中對(duì)包封率影響較明顯且制備所得脂質(zhì)體包封率最高的三個(gè)因素，進(jìn)行3因素3水平試驗(yàn)方案如表6所示，以包封率為其響應(yīng)值，共17次試驗(yàn)[16]。

2.6 ?驗(yàn)證試驗(yàn)

根據(jù)響應(yīng)面法優(yōu)化分析，得到利奈唑胺脂質(zhì)體最佳制備工藝，按此工藝制備三批脂質(zhì)體，測(cè)定包封率和RSD，進(jìn)行處方和工藝的驗(yàn)證。

2.7 ?利奈唑胺脂質(zhì)體體外釋放度考察

精密稱取定量利奈唑胺脂質(zhì)體（含原料藥約為10 mg），裝入煮沸處理的透析袋中，將其兩端扎緊，固定在玻璃棒上，放于盛有200 mlpH為6.7的PSD緩沖液燒杯中。將燒杯放置于37℃，10 r/min恒溫水浴磁力攪拌器上，攪拌處理;同時(shí)做相同濃度的利奈唑胺原料藥的體外釋放度試驗(yàn)。分別于攪拌 ?0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h取定量（3 ml）透析液測(cè)定其吸光度并及時(shí)補(bǔ)充等量等溫PBS緩沖液。用所測(cè)吸光度轉(zhuǎn)換為濃度，計(jì)算累積釋藥率L。

Q=CnV0 + ? L=Q/W×100%

其中：Q為各時(shí)間點(diǎn)累積釋藥量;Cn為各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得藥物濃度;V0為釋藥介質(zhì)總體積;Vi為i時(shí)間每次取樣體積;Ci為i時(shí)間各取樣點(diǎn)實(shí)際藥物濃度;W為脂質(zhì)體中總藥物量。

2.8 ?脂質(zhì)體外觀形態(tài)觀察

按照最佳制備工藝和處方分別制備兩組利奈唑胺脂質(zhì)，第一組在藥脂溶解過(guò)程中加入5 ?l濃度為0.01 mg/?l NDB-PE進(jìn)行熒光染色便于觀察載藥脂質(zhì)體，第二組不做其他操作，取適量上述兩組利奈唑胺脂質(zhì)體溶液，用緩沖液適當(dāng)稀釋后在倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)及脂質(zhì)體分布情況觀察。

3 ?結(jié)果

3.1 ?測(cè)定波長(zhǎng)的確定結(jié)果

由圖1與圖2可知利奈唑胺的最大吸收波長(zhǎng)在289 nm處，而空白脂質(zhì)體的最大吸收波長(zhǎng)則處于232 nm，對(duì)于利奈唑胺的吸光度測(cè)定基本無(wú)干擾，證明利用紫外分光光度計(jì)測(cè)定數(shù)據(jù)是合理的。

3.2 ?方法學(xué)考察結(jié)果

3.2.1 ?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制和線性分析

如圖3所示得到標(biāo)準(zhǔn)曲線A=0.01C+0.0516，R2=0.9998。線性范圍為1～24 ?g/ml。

3.2.2 ?精密度試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果如表1所示，低、中、高三種濃度的日內(nèi)精密度RSD%小于0.39%，日間精密度RSD%小于0.95%，證明精密度良好。

3.2.3 ?回收率試驗(yàn)結(jié)果

由表2可見，三種濃度的回收率在99.78%左右，RSD小于0.66%，表明脂質(zhì)體對(duì)藥物含量測(cè)定無(wú)影響。

3.2.4 ?穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果如表 3所示6個(gè)時(shí)間點(diǎn)內(nèi)吸光度無(wú)明顯改變，RSD小于0.20%，表明利奈唑胺脂質(zhì)體的穩(wěn)定性在24小時(shí)內(nèi)良好。

3.3 ?乙醇注入法制備利奈唑胺脂質(zhì)體的制備工藝確定及處方因素考察

3.3.1 ?利奈唑胺脂質(zhì)體單因素工藝考察

3.3.1.1 ?脂質(zhì)溶液注入PBS緩沖液速度

按照2.4.1.1中條件操作，得到藥物包封率如圖4所示，可知在注射速度為1.2 ml/ml時(shí)，脂質(zhì)體包封率最大。

3.3.1.2 ?探頭超聲時(shí)間

按照2.4.1.2中條件進(jìn)行操作，得到藥物包封率如圖5所示，可知超聲時(shí)間在3 min時(shí)，脂質(zhì)體包封率最大。

3.3.1.3 ?水浴溫度

在2.4.1.3條件下，在溫度變量范圍內(nèi)制備利奈唑胺脂質(zhì)體，測(cè)定包封率如圖6所示，可知水浴溫度在三個(gè)工藝因素考察中對(duì)利奈唑胺脂質(zhì)體的包封率影響不顯著，故此因素不作為主要考察因素。

3.3.1.4 ?利奈唑胺脂質(zhì)體處方單因素考察—膽固醇與卵磷脂質(zhì)量比

按照2.4.2（1）中條件進(jìn)行試驗(yàn)，得到藥物包封率如圖7所示，可知在膽固醇與卵磷脂質(zhì)量比在1：3時(shí)，脂質(zhì)體包封率最大。

3.4 ?響應(yīng)面試驗(yàn)與結(jié)果

3.4.1 ?響應(yīng)面優(yōu)化

通過(guò)單因素考察后確定對(duì)脂質(zhì)體包封率影響較大且包封率為最大值時(shí)的三個(gè)主要因素，根據(jù)Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，采用響應(yīng)面法優(yōu)化設(shè)計(jì)，試驗(yàn)結(jié)果如表4所示。

對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行響應(yīng)面曲面分析，建立二元多次回歸方程進(jìn)行回歸分析，如表5。

采用Design Expert8.0.8對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，得到回歸方程如下：

Y=91.17+1.19A+0.45B+1.14AB–0.21AC–0.55BC–9.40A2–7.24B2–7.60C2

由表5可知，本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ途哂懈叨蕊@著性（P< 0.0001），失擬度P=0.0835>0.05為不顯著的，表明該模型無(wú)失擬因素而且模型中主要考察因素P值均小于0.05，模型決定系數(shù)R2=0.9950，R2Adj=0.9886，代表本次試驗(yàn)的預(yù)測(cè)值與真實(shí)值相差極小，綜上所述，表明該模型擬合度良好。

3.4.2 ?響應(yīng)曲面分析

響應(yīng)面曲線圖可直觀反應(yīng)包封率與試驗(yàn)因素的相互關(guān)系，圖8圖9為膽固醇與卵磷脂的質(zhì)量比與超聲時(shí)間、脂質(zhì)溶液注入PBS緩沖液的速度與超聲時(shí)間、超聲時(shí)間與膽固醇與卵磷脂的質(zhì)量比三組因素對(duì)脂質(zhì)體包封率的響應(yīng)面圖，圖8中響應(yīng)面曲面陡峭，跨度大;圖9中三組等高線為類橢圓形，反映出被考察因素之間相互作用顯著并且等高線與軸線的相交點(diǎn)較多表明考察因素對(duì)脂質(zhì)體包封率的影響均較大，通過(guò)Design Expert8.0.8軟件優(yōu)化得出最佳處方工藝為膽固醇與卵磷脂的質(zhì)量比：1∶3類脂注入緩沖液的速度1.2 ml/min、超聲時(shí)間3 min。

3.5 ?驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

按照最佳工藝方法制備脂質(zhì)體并進(jìn)行進(jìn)行包封率測(cè)定得到結(jié)果如表6所示，三批脂質(zhì)體的平均包封率為82.36%，RSD為1.32%，表明該方法制備的脂質(zhì)體質(zhì)量較好。

3.6 ?利奈唑胺脂質(zhì)體體外釋藥性考察結(jié)果

由圖10可知，利奈唑胺原料藥溶液釋放較快，4 h累計(jì)釋放量就達(dá)到了99.95%;利奈唑胺脂質(zhì)體在24 h時(shí)，藥物累計(jì)釋放度達(dá)到93.37%，利奈唑胺仍未釋放完全，體現(xiàn)了脂質(zhì)體的良好緩釋效果。

3.7 ?最佳工藝下所制脂質(zhì)體外觀形態(tài)觀察及平均粒徑檢測(cè)

3.7.1 ?常規(guī)脂質(zhì)體的觀察

本實(shí)驗(yàn)以最佳工藝制得的載藥脂質(zhì)體混懸液如圖11所示，混懸液呈乳白色，普通光源下通過(guò)倒置熒光顯微鏡觀察，可以看出所制備的載藥脂質(zhì)體數(shù)目較多且形貌較為圓整，如圖12所示。

3.7.2 ?NBD-PE熒光染色后脂質(zhì)體的觀察

為進(jìn)一步觀測(cè)脂質(zhì)體形貌使用NBD-PE熒光染色劑染色后的利奈唑胺脂質(zhì)體呈現(xiàn)出黃綠色，如圖13所示。在倒置熒光顯微鏡可以觀察到利奈唑胺脂質(zhì)體的雙分子層結(jié)構(gòu)，外觀為橢球形，粒徑較均勻，平均粒徑分布在500 nm左右如圖13圖14。

4 ?討論

本實(shí)驗(yàn)采用乙醇注入法配合超聲制備利奈唑胺脂質(zhì)體，利奈唑胺物化性質(zhì)良好，包封效果顯著，傳統(tǒng)脂質(zhì)體制備使用三氯甲烷等有毒有機(jī)溶劑，該法乙醇無(wú)毒，但乙醇過(guò)量會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)體聚集影響包封率;卵磷脂與膽固醇的比例在有效范圍內(nèi)可保證包封率的良好，但過(guò)量后會(huì)導(dǎo)致膜不對(duì)稱，藥物泄露降低包封率;在制得脂質(zhì)體后，應(yīng)嚴(yán)格把控其貯存條件冷藏4℃下放置，如在室溫25℃下儲(chǔ)存則會(huì)出現(xiàn)不可逆性沉淀，顆粒變大如圖，影響其包封率。在制備過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，藥品加入的順序、超聲時(shí)間、是否用微孔濾膜過(guò)濾對(duì)脂質(zhì)體的形態(tài)影響很大，而且在膽固醇與卵磷脂被乙醇溶解后有少量膽固醇不溶，需加入吐溫80增溶。利奈唑胺原料藥最后加入，其溶解完全且脂質(zhì)體均與;超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾，脂質(zhì)體變成單室且不宜用倒置顯微鏡觀察到。本實(shí)驗(yàn)分離利奈唑胺與脂質(zhì)體的方法為離心法，該法的選擇不如葡萄糖凝膠柱層析法，但條件有限，便采用方便易行的離心法代替。.影響脂質(zhì)體制備工藝的因素有很多，如進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，不能進(jìn)行因素與因素之間的相互影響考察，采用正交試驗(yàn)，試驗(yàn)次數(shù)將明顯增多，因此采用響應(yīng)面法進(jìn)行工藝優(yōu)化，響應(yīng)面法既反映了單一自變量與包封率之間的關(guān)系，又體現(xiàn)出每個(gè)自變量相互間的作用對(duì)包封率的影響，使最佳的考察因素不僅僅局限于設(shè)計(jì)試驗(yàn)所選擇的幾個(gè)點(diǎn)，而是存在于一個(gè)由連續(xù)的點(diǎn)構(gòu)成的曲面的極值處，并且僅為一個(gè)點(diǎn)。此法比常規(guī)的考察方法更精確。并且，響應(yīng)面法進(jìn)行的試驗(yàn)次數(shù)相對(duì)較少，并且省時(shí)易行。在進(jìn)行體外釋藥度考察時(shí)，發(fā)現(xiàn)利奈唑胺脂質(zhì)體前期的釋藥速度較后期快很多，因?yàn)榍捌卺尫艦槲赐耆獾乃幬锛粗|(zhì)體膜外附著的藥物，后期釋放的則為脂質(zhì)體中包封的藥物，由此體現(xiàn)出脂質(zhì)體的緩釋功能[17-20]。

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