Xpert MTB/RIF技術(shù)對(duì)肺結(jié)核的靈敏度和特異性分析

陸善詞 黃 貞 張綺麗 馮健華 郭 煒

廣東省中山市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東中山 528447

結(jié)核病為結(jié)核分岐桿菌（MTB）引起的傳染病，其對(duì)人類健康造成重大威脅[1]，涂片鏡檢的敏感度不高，容易出現(xiàn)漏診，也無法進(jìn)行耐藥檢測；采用分枝桿菌培養(yǎng)的敏感度、特異性均較高，也能進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，但是該方法的結(jié)果回報(bào)時(shí)間過長，對(duì)臨床醫(yī)生制定治療決策不利[2-3]。利福平耐藥實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增（Xpert MTB/RIF）技術(shù)以半巢式實(shí)時(shí)定量PCR為基數(shù)基礎(chǔ)，對(duì)結(jié)核桿菌與利福平耐藥同時(shí)進(jìn)行分子水平上的檢測，其具有檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠、結(jié)果回報(bào)時(shí)間短的優(yōu)勢，能在早期檢測耐藥結(jié)核桿菌與結(jié)核桿菌，從而為診斷肺結(jié)核與啟動(dòng)治療時(shí)間創(chuàng)造了良好的條件[4-5]。本研究主要對(duì)XpertMTB/RIF技術(shù)應(yīng)用于肺結(jié)核診斷的靈敏度與特異性進(jìn)行分析，從而為臨床早期診斷肺結(jié)核提供一定參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后，選取2017年8月～2019年6月我院肺科門診收治的300例初診肺結(jié)核可疑患者300例，其中男186例、女114例，年齡22～65歲、平均（42.2±2.2）歲。300例患者均表現(xiàn)胸痛、咯血、咳嗽、咳痰等癥狀，患者的臨床資料完整，知情同意參與研究。

1.2 方法

留取所有患者的痰標(biāo)本共3份，實(shí)驗(yàn)室對(duì)3份標(biāo)本分別進(jìn)行涂片鏡檢、固體培養(yǎng)以及Xpert MTB/RIF檢測。

1.2.1 涂片鏡檢 嚴(yán)格按照《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程》中的操作程序進(jìn)行檢查。

1.2.2 分離羅氏固體培養(yǎng) 吸取痰標(biāo)本2mL，放置于帶有螺旋蓋的前處理管中，根據(jù)樣本的形狀加入1～2倍體積的4%氫氧化鈉前處理液，放置于渦旋振蕩器上振蕩30～60s直至標(biāo)本充分混合，室溫下放置15min。待前處理完畢后，吸取前處理液0.1mL并將其均勻接種于2支酸性羅氏培養(yǎng)基斜面上，斜面水平向上，37℃下培養(yǎng)24h，轉(zhuǎn)變?yōu)橹绷⒚媾囵B(yǎng)。接種完畢后3、7d對(duì)培養(yǎng)情況進(jìn)行觀察，每7天觀察1次，將生長結(jié)果紀(jì)錄于分離培養(yǎng)結(jié)果記錄本上[6]。

1.2.3 Xpert MTB/RIF檢測 取痰標(biāo)本共1mL，加入前處理管，加入SR痰標(biāo)本處理液，量為2倍痰標(biāo)本體積，將前處理管旋緊后震蕩15～30s，室溫下靜置15min，直至痰標(biāo)本充分液化。將反應(yīng)盒打開，取后處理樣品共2mL，經(jīng)加樣孔緩慢加入反應(yīng)盒，反應(yīng)盒放置于檢測模塊，由儀器進(jìn)行自動(dòng)檢測。待反應(yīng)結(jié)束后，經(jīng)檢測系統(tǒng)窗口讀出測試結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

2個(gè)月后進(jìn)行隨訪，將隨訪結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，比較涂片鏡檢、固體培養(yǎng)以及Xpert MTB/RIF檢測對(duì)肺結(jié)核桿菌的靈敏度、特異性以及準(zhǔn)確度。采用Kappa一致性檢驗(yàn)，Xpert MTB/RIF檢測與固體培養(yǎng)的一致性，Kappa值≥0.75提示一致性較好。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS19.0處理，計(jì)數(shù)資料（%）采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 隨訪結(jié)果

300 例初診肺結(jié)核可疑患者中，經(jīng)臨床綜合診斷與治療后，確診肺結(jié)核244例，占81.33%；其余56例患者為非肺結(jié)核患者，占18.66%。

2.2 涂片鏡檢與金標(biāo)準(zhǔn)比較

300 例患者經(jīng)涂片鏡檢結(jié)果：漏檢3例，陽性48例，陰性249例，涂片鏡檢的靈敏度為19.67%（48/244）、特異性為 22.22%（56/252）、準(zhǔn)確度為18.94%（104/549），見表1。

表1 涂片鏡檢與金標(biāo)準(zhǔn)比較

2.3 固體培養(yǎng)與金標(biāo)準(zhǔn)比較

300 例患者經(jīng)固體培養(yǎng)檢查結(jié)果：漏檢28例，陽性98例，陰性174例，固體培養(yǎng)的靈敏度為36.03%（98/272）、特異性為 27.72%（56/202）、準(zhǔn)確度為32.49%（154/474），見表2。

表2 固體培養(yǎng)與金標(biāo)準(zhǔn)比較

2.4 Xpert MTB/RIF技術(shù)與金標(biāo)準(zhǔn)比較

300 例患者經(jīng)Xpert MTB/RIF技術(shù)檢查結(jié)果：漏檢0例，陽性115例，陰性185例，Xpert MTB/RIF的靈敏度為47.13%（115/244）、特異性為30.27%（56/185）、準(zhǔn)確度為 35.26%（171/485），見表3。

表3 Xpert MTB/RIF技術(shù)與金標(biāo)準(zhǔn)比較

2.5 Xpert MTB/RIF技術(shù)與固體培養(yǎng)的靈敏度、特異性以及準(zhǔn)確度一致性分析

Xpert MTB/RIF技術(shù)與固體培養(yǎng)的靈敏度、特異性以及準(zhǔn)確度分析發(fā)現(xiàn)，Kappa值為0.860、0.879、0.872，均＞ 0.75，二者一致性良好。

3 討論

控制肺結(jié)核疫情、消除結(jié)核病對(duì)人類健康造成危害的關(guān)鍵在于早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。長期以來，結(jié)核病診斷技術(shù)仍然是傳統(tǒng)的細(xì)菌學(xué)、影像學(xué)檢查方法，盡管培養(yǎng)法、涂片法的特異性高，但是其敏感度低而容易出現(xiàn)漏診；采用傳統(tǒng) “培養(yǎng)+藥敏”的方法結(jié)果回報(bào)時(shí)間長，這對(duì)臨床醫(yī)生制定結(jié)核病初始治療決策不利，容易造成患者的病情延誤，對(duì)控制傳染源、防止疫情擴(kuò)散也不利。傳統(tǒng)涂片鏡檢陽性檢出率低；固體培養(yǎng)法的耗時(shí)較長，通常在8周左右，因此對(duì)肺結(jié)核的診療不利[7-9]。Xpert MTB/RIF技術(shù)回報(bào)時(shí)間短的優(yōu)勢使其前移了肺結(jié)核的診斷關(guān)口，這有助于實(shí)現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。

Xpert MTB/RIF技術(shù)基礎(chǔ)為半巢式實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)，其同時(shí)對(duì)利福平與MTB進(jìn)行分子水平上的檢測；該技術(shù)具有結(jié)果準(zhǔn)確可靠的優(yōu)勢，結(jié)果回報(bào)時(shí)間短，回報(bào)時(shí)間在2h以內(nèi)，這一優(yōu)勢使其具有取代傳統(tǒng)TB檢測的潛力；該技術(shù)將PCR擴(kuò)增與檢測整合于封閉反應(yīng)盒內(nèi)，將樣本加入后自動(dòng)在反應(yīng)盒內(nèi)完成試驗(yàn)過程，具有操作簡便的特點(diǎn)，簡化了操作，減少了檢驗(yàn)人員的工作量；該技術(shù)還具有樣本處理簡單的優(yōu)勢，液化樣本的試劑具有滅活MTB的能力，減少了檢驗(yàn)過程中的生物污染風(fēng)險(xiǎn)，因此該技術(shù)具有作為即時(shí)檢驗(yàn)工具的潛力；由于該技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)設(shè)施的要求不高，該技術(shù)也可以應(yīng)用于城鎮(zhèn)實(shí)驗(yàn)室，因此其具有推廣的價(jià)值[10-13]。該技術(shù)還可以對(duì)利福平的耐藥性進(jìn)行評(píng)價(jià)，其有助于指導(dǎo)臨床治療。

本研究結(jié)果提示，Xpert MTB/RIF技術(shù)診斷肺結(jié)核的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度均高于傳統(tǒng)涂片鏡檢，該技術(shù)的檢測結(jié)果與固體培養(yǎng)的一致性良好，提示這一技術(shù)檢測肺結(jié)核的靈敏度、特異性以及準(zhǔn)確度均較傳統(tǒng)檢測方法更高。這一技術(shù)可以進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌的快速鑒定，還能快速檢測對(duì)利福平的耐藥性，能發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)檢測技術(shù)難以發(fā)現(xiàn)的結(jié)核患者，這對(duì)早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療具有重要意義[14-15]。

但需要注意的是，Xpert MTB/RIF技術(shù)的檢測成本比較高，因此這一技術(shù)當(dāng)前還無法廣泛應(yīng)用于基層醫(yī)院，在當(dāng)前資源有限的局面下，建議將該技術(shù)應(yīng)用于利福平耐藥率比較高的醫(yī)院。該技術(shù)大范圍應(yīng)用仍然需要進(jìn)行不斷研究。

綜上所述，Xpert MTB/RIF技術(shù)應(yīng)用于肺結(jié)核診斷的靈敏度、特異性均較涂片鏡檢更高，與固體培養(yǎng)的一致性較高，其具有操作簡便、檢驗(yàn)迅速的優(yōu)勢，值得推廣。