抗PM-Scl抗體檢測對結締組織病重疊綜合征的診斷和鑒別診斷價值*

李格寧，蔡潔新，陳績才△，林秋強，陳 韌

廣東省汕頭市澄海區(qū)人民醫(yī)院：1.風濕免疫實驗室；2.風濕免疫科，廣東汕頭 515800

結締組織病是一種主要侵犯全身結締組織和血管的自身免疫性疾病。皮膚由于含有豐富的結締組織和血管，是一個重要的靶器官。隨著診斷技術的進步及人們對結締組織病的重視，近年來發(fā)現(xiàn)一些結締組織病間相互移行、合并和重疊的患者，用傳統(tǒng)分類標準無法得出確切診斷，因此，稱為重疊綜合征或重疊結締組織病。重疊綜合征是指同時或先后患有2種及以上的自身免疫性疾病[1]，其臨床表現(xiàn)復雜多樣，常發(fā)生漏診、誤診。該病患者體內存在多種自身抗體，除常規(guī)檢測的抗體，包括抗核抗體(ANA)、抗雙鏈DNA抗體、抗可溶性抗原譜、抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體和抗角蛋白抗體等，還存在其他多種自身抗體，如肌炎相關性自身抗體，包括抗PM-Scl抗體、抗U1核糖核蛋白抗體和抗Ro52抗體[2]。本研究對2017—2019年在本院就診的624例結締組織病患者進行抗PM-Scl抗體定量檢測并觀察分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017-2019年在本院就診的624例結締組織病患者為研究對象，其中男144例，女480例；年齡5～89歲，平均53.4歲；所有病例診斷均符合1987年美國風濕病協(xié)會的診斷標準。系統(tǒng)性硬化癥的診斷均符合2013年美國風濕病學會、歐洲風濕病聯(lián)盟(ACR/EULAR)發(fā)布的最新系統(tǒng)性硬化癥分類診斷標準[3]。對照組為本院體檢健康者100例，男60例，女40例；年齡21～60歲，平均48.0歲。

1.2抗PM-Scl抗體定量檢測 采用德國歐蒙公司生產(chǎn)的抗PM-Scl抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒，操作嚴格按照說明書進行。將標本按1∶100稀釋，根據(jù)加樣方案向相應微孔中分別加入稀釋血清、陰性對照、陽性對照及判斷標準血清各100 μL，室溫(18～25 ℃)溫育30 min，洗板3次，加酶標抗體100 μL，室溫溫育30 min，洗板3次，加底物顯色，室溫避光溫育15 min。加終止液100 μL，450 nm波長比色，判斷標準為:≥20.0 RU/mL為陽性，<20.0 RU/mL為陰性。標本吸光度(A)值采用五擬合參數(shù)計算軟件，通過標準曲線計算標本水平。

1.3免疫印跡法檢測ANA譜 采用廣州康潤生物科技有限公司提供的免疫印跡法檢測患者血清中ANA譜抗體，按照試劑盒說明書進行檢測，并采用配套軟件Aesku Scan進行掃描和判讀。結果判斷：≥6個灰區(qū)值為陽性，<6個灰區(qū)值為陰性。

1.4間接免疫熒光法檢測ANA 采用德國Aesku醫(yī)學實驗診斷股份公司提供的ANA抗原片檢測患者血清中ANA，按照試劑盒說明書進行檢測。起始稀釋滴度為1∶80。

1.5統(tǒng)計學處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以M(P25～P75)表示，采用秩和檢驗，計數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1結締組織病患者抗PM-Scl抗體定量檢測結果 624例結締組織病患者抗PM-Scl抗體檢出水平為6.57(2.31～10.02)RU/mL，檢出率為3.5%；在90例多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征患者中，其抗體檢出水平為11.34(6.48～16.32)RU/mL。624例結締組織病患者采用ELISA法定量檢測抗PM-Scl抗體，有22例患者抗PM-Scl抗體水平升高，結合臨床相關資料，最后有20例確診為多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征。22例抗PM-Scl抗體水平升高患者均出現(xiàn)在臨床診斷為多發(fā)性肌炎、系統(tǒng)性硬化癥及其重疊綜合征患者中，陽性率為13.3%(22/165)，其他結締組織病及對照組均未檢測到該抗體。見表1。

表1 624例結締組織病患者抗PM-Scl抗體定量檢測結果

2.2多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥與非多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征抗PM-Scl抗體檢測結果 20例多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征患者抗PM-Scl抗體水平和陽性率明顯高于非多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征患者(P<0.01)。見表2。

表2 多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥與非多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征抗PM-Scl抗體檢測結果

2.3抗PM-Scl抗體水平升高患者的ANA譜和ANA檢測結果 22例抗PM-Scl抗體水平升高患者的ANA譜抗體檢測均陰性，ANA用間接免疫熒光法篩查，核型均為核仁抗體陽性。見表3。

表3 抗PM-Scl抗體水平升高的ANA譜和ANA檢測結果

3 討 論

抗PM-Scl抗體的靶抗原主要位于核仁的顆粒部分，由11～16種蛋白多肽組成，其中相對分子質量為75×103和100×103的兩種蛋白質已被鑒定為主要抗原組分。本研究顯示，采用間接免疫熒光法檢測ANA，22例抗PM-Scl抗體水平升高患者血清出現(xiàn)特征性熒光染色模型，即Hep-2細胞實驗基質分裂間期細胞的細胞核核仁呈現(xiàn)強均質型熒光染色，有絲分裂期細胞濃縮的染色體區(qū)為陰性。采用免疫印跡法檢測ANA譜抗體，22例抗PM-Scl抗體水平升高患者血清抗Scl-70抗體、抗Jo-1抗體均陰性，其原因是抗Scl-70抗體的靶抗原是DNA拓撲異構酶1，而抗PM-Scl抗體的靶抗原位點主要是相對分子質量為75×103和100×103的蛋白質。

已有一些相關資料顯示，抗PM-Scl抗體可存在于多種結締組織病中，但陽性率不高，其中多發(fā)性肌炎的陽性率為8%，系統(tǒng)性硬化癥的陽性率為3%，在肌炎合并硬化癥重疊綜合征患者中該抗體陽性率高達25%[4]。雖然僅25%左右的重疊綜合征出現(xiàn)抗PM-Scl抗體陽性，但是抗PM-Scl抗體陽性者50%易患重疊綜合征[5]。本研究624例結締組織病患者，抗PM-Scl抗體檢出水平為6.57(2.31～10.02)RU/mL,陽性率為3.5%。其中有90例多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征患者，其抗體檢測水平為11.34(6.48～16.32)RU/mL?？筆M-Scl抗體的陽性率雖然不高，但是幾乎僅存在于多發(fā)性肌炎[6]、系統(tǒng)性硬化癥[7]及重疊綜合征中。本研究結果顯示，多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征患者抗PM-Scl抗體水平及陽性率明顯高于非多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征患者，說明抗PM-Scl抗體對多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥具有良好相關性，有一定診斷價值。這也解釋了本研究抗PM-Scl抗體陽性多出現(xiàn)在一些結締組織病間相互移行、合并和重疊患者中的原因。多發(fā)性肌炎與彌散型系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征患者紅細胞沉降率加快，C-反應蛋白水平升高?？筆M-Scl抗體陽性的患者，一般其他自身抗體為陰性，如抗可提取核抗原或抗Jo-1抗體。但是抗PM-Scl抗體陽性患者中抗著絲點抗體或抗Scl-70抗體陰性，表明這些患者具有多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥的疾病單元。抗PM-Scl抗體相關重疊綜合征的診斷對患者的治療具有重要意義，與彌散型系統(tǒng)性硬化癥患者相比，抗PM-Scl抗體相關重疊綜合征患者需要的激素劑量較低，且大多具有良好的預后?？筆M-Scl抗體陽性與肺纖維化和指端潰瘍風險增加有關，對肺動脈高壓和下消化道癥狀有保護意義[8]。西班牙的一項研究發(fā)現(xiàn)，癌癥風險與抗PM-Scl抗體存在直接相關性(OR=3.90，95%CI：1.31～11.61，P=0.014)[9]，然而，另一項研究并未驗證出該結果，抗PM-Scl抗體在系統(tǒng)性硬化癥合并腫瘤組與系統(tǒng)性硬化癥不合并腫瘤組的陽性結果相似(6.5%vs.6.9%，P=0.916)[10]。

抗PM-Scl抗體不是系統(tǒng)性硬化癥特異性的指標，在多發(fā)性肌炎/系統(tǒng)性硬化癥重疊綜合征中經(jīng)常出現(xiàn)[11]，即使肌炎臨床癥狀不明顯的，也可出現(xiàn)肌酶升高。本研究結果顯示，抗PM-Scl抗體陽性率雖然不高，但是幾乎僅存在于多發(fā)性肌炎、系統(tǒng)性硬化癥及其重疊綜合征患者中，與某些疾病具有很好的相關性。因此，檢測抗PM-Scl抗體對多發(fā)性肌炎、系統(tǒng)性硬化癥及重疊綜合征等結締組織病的診斷和鑒別診斷有重要的臨床價值。本研究抗PM-Scl抗體陽性的患者不多，與葉楊等[5]的研究陽性率有差別，可能與本試驗采用的是德國歐蒙進口試劑盒檢測，抗體特異性較高，以及不同地區(qū)疾病陽性率有一定差異有關。