桔梗不同炮制方法工藝優(yōu)選及其鎮(zhèn)咳作用比較*

★ 黃藝 鐘凌云* 鐘國(guó)躍 張壽文 祝婧 彭春艷 徐夢(mèng)甜（江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌 330004）

桔梗為桔?？浦参锝酃＃跴latycodon grandiflorum（Jacq.）A.DC.］的干燥根，具有止咳、祛痰等功效。桔梗的炮制最早見(jiàn)于晉代，葛洪在《肘后備急方》中有記載“燒末”的炮制方法［1］，現(xiàn)如今臨床用桔梗多以生品為主，常以復(fù)方煎劑或復(fù)方顆粒中的一味藥物形式用于祛痰、鎮(zhèn)咳的治療［2］。但桔梗還有“姜汁浸，炒”“米泔水浸一宿，焙干用”“蜜拌、甑蒸”等7種加輔料的炮制方法［3-6］。

經(jīng)研究桔梗在蜜制之后有增加其止咳、祛痰之功效，為了進(jìn)一步探討不同炮制品桔梗在鎮(zhèn)咳功效上的差異，本文選擇了生桔梗、蜜烘桔梗、蜜炙桔梗等3個(gè)炮制品，以小鼠咳嗽次數(shù)、咳嗽潛伏期為指標(biāo)，對(duì)其鎮(zhèn)咳作用進(jìn)行比較研究，為桔梗的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 戴安U-3000高效液相色譜儀（賽默飛世爾科技有限公司），PHS-3E 型精密pH計(jì)（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司），PHS-3E粉碎機(jī)（紅景天工貿(mào)粉碎機(jī)），電熱套（北京科偉永興儀器有限公司MH-1000型科偉牌調(diào)溫型電熱套），加熱爐（天津天泰DK-98-11型電子萬(wàn)用爐），抽濾機(jī)（鞏義市子華儀器有限責(zé)任公司SHZ-D（Ⅲ）型循環(huán)水氏真空泵），402AI 型超聲霧化器（江蘇魚躍醫(yī)療設(shè)備股份有限公司）。

1.2 試劑與材料 桔梗（采購(gòu)于內(nèi)蒙古赤峰，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)張壽文教授鑒定為桔?？浦参锝酃５母稍锔?，洋槐蜜（江西汪氏蜜蜂園有限公司，2017年3月27日產(chǎn)），枸櫞酸噴托維林片（咳必清，上海全宇生物科技內(nèi)鄉(xiāng)制藥有限公司，批號(hào)130304），濃氨水（沈陽(yáng)沈一精細(xì)化學(xué)品有限公司，批號(hào)：20090625）。

2 桔梗不同炮制方法工藝優(yōu)選

2.1 生桔梗飲片炮制工藝優(yōu)選 取桔梗原藥材適量，選擇潤(rùn)制時(shí)間、飲片厚度、干燥溫度和干燥時(shí)間作為考核因素，以桔梗皂苷D、醇浸出物、總皂苷含量為考察指標(biāo)，采用L18（37）表，各因素水平見(jiàn)下表1。

表1 生桔梗飲片炮制工藝優(yōu)選正交設(shè)計(jì)表

選用SPSS 20.0軟件處理數(shù)據(jù)，利用綜合加權(quán)評(píng)分法對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，桔梗皂苷D、醇浸出物、總皂苷含量權(quán)重系數(shù)分別為0.5、0.25、0.25。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表2，通過(guò)分析最終得出潤(rùn)制2d，55℃烘干6 h的3 mm飲片為最佳的炮制工藝。這為實(shí)驗(yàn)后期桔梗的蜜制研究提供參考基礎(chǔ)。

2.2 蜜炙桔梗飲片炮制工藝優(yōu)選 取桔梗原藥材適量，選擇每100 kg飲片加蜜量、炒制溫度、炒制時(shí)間作為考核因素，以桔梗皂苷D、醇浸出物、總皂苷含量為考察指標(biāo)，采用L9（34）表，各因素水平見(jiàn)表3。

表2 生桔梗飲片炮制工藝優(yōu)選實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 蜜炙桔梗飲片炮制工藝優(yōu)選正交設(shè)計(jì)表

選用SPSS 20.0軟件處理數(shù)據(jù)，利用綜合加權(quán)評(píng)分法對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，桔梗皂苷D、醇浸出物、總皂苷含量權(quán)重系數(shù)分別為0.5、0.25、0.25。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表4，通過(guò)分析最終得出每100kg飲片加蜜量25 kg，160℃炒制17 min為最佳的炮制工藝。

表4 蜜炙桔梗飲片炮制工藝優(yōu)選實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 蜜烘桔梗飲片炮制工藝優(yōu)選 桔梗原藥材適量，選擇烘制時(shí)間、烘制溫度、水蜜比作為考核因素，以桔梗皂苷D、醇浸出物、總皂苷含量為考察指標(biāo)，采用L9（34）表，各因素水平見(jiàn)下表5。

表5 蜜烘桔梗飲片炮制工藝優(yōu)選正交設(shè)計(jì)表

選用SPSS 20.0軟件處理數(shù)據(jù)，利用綜合加權(quán)評(píng)分法對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，桔梗皂苷D、醇浸出物、總皂苷含量權(quán)重系數(shù)分別為0.5、0.25、0.25。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表6，通過(guò)分析最終得出烘制時(shí)間2 h，烘制溫度90℃，水密比1∶2.5為最佳的炮制工藝。

3 制備及給藥

3.1 生桔梗飲片 將桔梗原藥材潤(rùn)制1 d后，切制成3 mm厚片，以60℃干燥4 h，放涼備用。

3.2 蜜炙桔梗飲片 將煉蜜與熱水按2.5∶1的比例混合，加入適量桔梗生飲片充分?jǐn)嚢杈鶆?，悶?rùn)30 min后，用160℃鍋快速翻炒17 min出鍋，放涼即可。每100 kg桔梗生飲片用煉蜜25 kg。

3.3 蜜烘桔梗飲片 將煉蜜與熱水按2.5∶1的比例混合，加入適量桔梗生飲片充分?jǐn)嚢杈鶆?，悶?rùn)30 min放入預(yù)熱至90℃烘箱內(nèi)，烘制2 h取出，放涼即可。每100 kg桔梗生飲片用煉蜜25 kg。

3.4 蜜的水溶液 蜜稱量，加入4倍水，混合均勻配制成0.25 g·mL-1，冷藏備用。

表6 蜜烘桔梗飲片炮制工藝優(yōu)選實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.5 咳必清水溶液 取咳必清藥片12.5 g，碾磨壓碎至粉末狀，置入50 mL定容瓶中，加水至刻度，配制成0.25 g·mL-1，冷藏備用。

3.6 給藥藥物 分別取定量生桔梗飲片、蜜炙桔梗飲片、蜜烘桔梗飲片，粉碎過(guò)3號(hào)篩，加入8倍量水，連續(xù)回流反復(fù)提取3次，每次2 h，合并濾液混合后濃縮至一定濃度，冷藏備用。

4 不同桔梗炮制品鎮(zhèn)咳作用研究

按照桔梗不同炮制方法工藝優(yōu)選項(xiàng)下優(yōu)選出的工藝，對(duì)桔梗原藥材進(jìn)行炮制，制成適量生桔梗飲片、蜜炙桔梗飲片、蜜烘桔梗飲片。首先對(duì)桔梗飲片鎮(zhèn)咳的最佳給藥劑量進(jìn)行優(yōu)選，以該劑量為實(shí)驗(yàn)組灌胃單位，進(jìn)行不同方法炮制桔梗的鎮(zhèn)咳作用比較研究。

4.1 鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)（濃氨水噴霧法） 于小鼠末次給藥后1 h。使用超聲霧化器，持續(xù)通入氨氣15 s，立即關(guān)閉霧化器并記錄小鼠2 min內(nèi)咳嗽次數(shù)和咳嗽潛伏期時(shí)間。

4.2 不同給藥劑量鎮(zhèn)咳作用研究 將健康昆明種小鼠40只，SPF級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g。隨機(jī)分為4組，每組雌雄各5只，分為：A生理鹽水給藥組、B桔梗飲片水提液給藥高劑量組（1.6 mL/20 g）、C桔梗飲片水提液給藥中劑量組（1.2 mL/20 g）、D桔梗飲片水提液給藥低劑量組（0.8 mL/20 g），自由飲食飲水，連續(xù)給藥3 d，于末次給藥后1 h進(jìn)行鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表7，根據(jù)咳嗽次數(shù)與潛伏時(shí)間進(jìn)行對(duì)比優(yōu)選出每20 g小鼠給藥1.2 mL為最佳的給藥劑量。

表7 不同劑量給藥組鎮(zhèn)咳作用比較（n=10）

4.3 不同方法炮制桔梗的鎮(zhèn)咳作用研究 健康昆明種小鼠60只，SPF分級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g。隨機(jī)分為6組，每組雌雄各5只。分為：A生理鹽水給藥組，B蜜的水溶液給藥組，C生桔梗飲片水提液給藥組，D蜜烘桔梗水提液給藥組，E蜜炙桔梗水提液給藥組，F(xiàn)陽(yáng)性藥（咳必清）給藥組。自由飲食飲水。每20 g小鼠給藥1.2 mL，連續(xù)給藥5 d。于末次給藥后1 h進(jìn)行鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表8。

與空白組比較，陽(yáng)性藥物組、蜜水組、桔梗生飲片、蜜烘桔梗、蜜炙桔梗組咳嗽次數(shù)均有顯著性差異（P＜0.01）。與蜜烘桔梗組比較，空白組、蜜水組、桔梗生飲片、蜜炙桔梗飲片組有顯著性差異。與空白組比較，陽(yáng)性藥物組、生桔梗、蜜烘桔梗、蜜炙桔梗飲片組均有延緩小鼠咳嗽潛伏期的功效。與蜜烘桔梗水提液組比較，空白組、蜜水組，小鼠咳嗽潛伏時(shí)間有顯著性差異。

表8 不同炮制方法鎮(zhèn)咳作用比較（n=10）

5 討論與展望

我國(guó)中藥發(fā)展歷史源遠(yuǎn)流長(zhǎng)，其炮制方法的產(chǎn)生與發(fā)展也由來(lái)已久，呈現(xiàn)出復(fù)雜多樣性［7］。合理有效的中藥炮制方法，直接影響藥物的活性成分，合理對(duì)中藥進(jìn)行炮制，能夠有效提升藥物對(duì)疾病的治療效果。

本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)桔梗飲片不同炮制品的制備工藝進(jìn)行了詳細(xì)研究，采用正交試驗(yàn)法設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，考察干燥溫度、干燥時(shí)間、飲片厚度、炒制溫度等多個(gè)因素，分別對(duì)生桔梗飲片、蜜炙桔梗飲片、蜜烘桔梗飲片進(jìn)行工藝優(yōu)選；再對(duì)桔梗飲片鎮(zhèn)咳的最佳給藥劑量進(jìn)行優(yōu)選；最后使用優(yōu)選后的工藝分別制備3種不同桔梗飲片炮制品，以優(yōu)選出的最佳給藥劑量為實(shí)驗(yàn)組灌胃單位進(jìn)行藥效學(xué)研究。結(jié)果最后表明桔梗具有明顯鎮(zhèn)咳作用，蜜烘桔梗效果最佳。

本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)炮制工藝、給藥劑量進(jìn)行優(yōu)化，再進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更具說(shuō)服力。最后建議臨床用桔梗治療咳嗽癥狀使用蜜烘桔梗，但究竟和哪些中藥配伍使用能達(dá)到更好的鎮(zhèn)咳祛痰功效，還有待進(jìn)一步研究。