欖形風(fēng)車子萜類提取物對(duì)四種癌細(xì)胞的增殖抑制作用

張 園 劉紹華 楊 婕 李俊燕 肖志慧 文 檢

(萍鄉(xiāng)衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院 江西省萍鄉(xiāng)市 337000)

癌癥已成為我國(guó)疾病死因之首，發(fā)病率和死亡率還在攀升。肺癌、胃癌、肝癌、食道癌、結(jié)直腸癌，占到了所有癌癥死亡的四分之三。目前化學(xué)藥物抗腫瘤作用確切，療效顯著，但是毒副作用大，長(zhǎng)期應(yīng)用易產(chǎn)生耐藥性，所以人們迫切希望找到療效好且毒副作用小的藥物，中藥在這方面顯示出了明顯的優(yōu)勢(shì)。風(fēng)車子屬植物的抗腫瘤活性已被多人證實(shí)，并且從風(fēng)車子中提取出的二苯乙烯類風(fēng)車子抑素已被證實(shí)療效確切。欖形風(fēng)車子（Combretum olivaeforme Chao）為使君子科、風(fēng)車子屬攀援灌木。風(fēng)車子屬植物我國(guó)約有12 種，包括風(fēng)車子、十蕊風(fēng)車子、欖形風(fēng)車子、長(zhǎng)毛風(fēng)車子、崖縣風(fēng)車子等。風(fēng)車子屬植物具有止瀉、驅(qū)蛔蟲、抗炎、抗癌和殺菌等作用[1]。國(guó)內(nèi)外報(bào)道的風(fēng)車子屬植物的化學(xué)成分主要以二苯乙烯類、三萜化合物及菲類化合物為主。目前還未見欖形風(fēng)車子抗腫瘤作用的研究，而其他天然藥物中萜類化合物抗腫瘤作用明確，所以我們提取了欖形風(fēng)車子葉片中的萜類化合物，采用MTT 法，檢測(cè)其對(duì)四種癌細(xì)胞的體外增殖抑制作用，為進(jìn)一步的研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

全波長(zhǎng)酶標(biāo)HBS-109（上海博升科技有限公司）；細(xì)胞培養(yǎng)箱（上海博升科技有限公司）；倒置顯微鏡（重慶光學(xué)儀器廠）；潔凈工作臺(tái)（上海博迅醫(yī)療設(shè)備廠）；全自動(dòng)高壓蒸汽滅菌鍋（上海申安LDZX-50KBS）；可調(diào)式移液器（BRAND 公司）；96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板（Pore 公司）；RPMI1640 培養(yǎng)液、胰酶（Gibco 公司）；四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT，Sigma 公司）；超級(jí)新生牛血清（杭州四季青生物科技有限公司）；二甲基亞砜（DMSO，天津市化學(xué)試劑二廠）。人肺腺癌細(xì)胞（SPCA-1）、人肝癌細(xì)胞（BEL-7402）、人胃癌細(xì)胞（SGC-7901）和人白血病細(xì)胞（K562）由中科院上海生物所提供[2]。細(xì)胞用含10%胎牛血清、100 μg/ml 青霉素、100 μg/ ml 鏈霉素、0.2%NaHCO3的RPMI1640 培養(yǎng)液，于37 ℃、5%CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。欖形風(fēng)車子葉片。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 欖形風(fēng)車子中萜類化合物的提取與分離

干燥的欖形風(fēng)車子葉，粉碎，用70%乙醇回流提取3 次每次1h，減壓回收乙醇至無醇味的浸膏。加入適量的水混懸后，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取。石油醚部位用80%乙醇溶解，石油醚萃取，將80%乙醇層減壓回收至浸膏。

1.2.2 MTT 法檢測(cè)萜類提取物對(duì)四種癌細(xì)胞的增殖抑制作用

以2×104的密度將細(xì)胞接種于96 孔板中，培養(yǎng)12h 后加入不同濃度（1μM、10μM、100μM）提取物20μL，另設(shè)對(duì)照組。分別培養(yǎng)12h、24h、48h 后加入5mg/mL 的MTT50μL，繼續(xù)培養(yǎng)4h，終止培養(yǎng)，吸去培養(yǎng)液，加入150μL DMSO，避光振蕩5min，酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD 值570nm 處測(cè)量吸光值，計(jì)算抑制率和半數(shù)抑制濃度（IC50）。抑制率計(jì)算公式：抑制率(%)={[A(對(duì)照)-A(給藥組)]/A(對(duì)照)}×100。

1.2.3 結(jié)果統(tǒng)計(jì)

每份樣本平行測(cè)定6 孔，全部數(shù)據(jù)用SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。吸收值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用方差分析比較組間均數(shù)差異。

2 結(jié)果分析

2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

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2.2 結(jié)果分析

數(shù)據(jù)顯示，從欖形風(fēng)車子中的萜類提取物對(duì)四種癌細(xì)胞都有較好的抑制作用，并且隨著濃度的增加抑制作用都增強(qiáng)。其中對(duì)人肺腺癌細(xì)胞（SPCA-1）、人肝癌細(xì)胞（BEL-7402）和人白血病細(xì)胞（K562）的IC50（半數(shù)抑制濃度）都小于15μM，抑制效果最好的是人肺腺癌細(xì)胞（SPCA-1），IC50 （半數(shù)抑制濃 度）為7.31μM。說明該植物中的萜類化合物對(duì)人肺腺癌細(xì)胞（SPCA-1）的抑制作用最為顯著，提示欖形風(fēng)車子對(duì)肺癌具有潛在的治療作用?？梢赃M(jìn)行進(jìn)一步的研究。后期我們會(huì)分離出不同的萜類化合物并做結(jié)構(gòu)鑒定，選取其中活性最好的單體化合物進(jìn)行初步的抗癌機(jī)制研究。