某全自動(dòng)循環(huán)熒光免疫分析儀cTnI項(xiàng)目的性能驗(yàn)證

梅 竹，孫 思,白欣鷺,胡禮儀

(重慶兩江新區(qū)第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，重慶 401121)

心肌肌鈣蛋白I(cTnI)是調(diào)節(jié)肌肉收縮的肌鈣蛋白復(fù)合物中的組成成分，也是僅存在于心肌上而非骨骼上的肌鈣蛋白[1]。敏感和準(zhǔn)確的cTnI檢測(cè)對(duì)心肌梗死的診斷至關(guān)重要[2]。cTnI在心肌梗死發(fā)生數(shù)小時(shí)內(nèi)即可釋放入血，胸痛發(fā)作后3～6 h即可在血清中檢出，于12～16 h達(dá)到峰濃度，其峰值可超出參考區(qū)間幾十倍，具有高度的心肌特異性和敏感性，是目前最理想的心肌梗死診斷標(biāo)志物之一?？焖佟?zhǔn)確地檢測(cè)人體內(nèi)cTnI水平與醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作息息相關(guān)。為確保所給出結(jié)果的準(zhǔn)確性，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可工作近年來(lái)備受關(guān)注。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織頒布的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專用要求》(ISO15189)及美國(guó)《臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)法案修正案最終法規(guī)》(CLIA′88)明確指出，臨床實(shí)驗(yàn)室在開(kāi)展某一檢測(cè)項(xiàng)目前，實(shí)驗(yàn)室需要對(duì)其相關(guān)方法學(xué)分析性能予以驗(yàn)證，對(duì)廠商提供的評(píng)價(jià)資料中的主要性能予以確認(rèn)，以及對(duì)于儀器配套系統(tǒng)做基本的性能驗(yàn)證試驗(yàn)，即對(duì)精密度、正確度、可報(bào)告范圍和參考區(qū)間等進(jìn)行驗(yàn)證[3-5]。為此，本實(shí)驗(yàn)室對(duì)常規(guī)使用的星童Pylon3D全自動(dòng)循環(huán)增強(qiáng)熒光免疫分析儀cTnI項(xiàng)目的主要質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行性能驗(yàn)證，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年8月本院體檢中心的健康體檢者20例，其中男、女各10例，年齡20～65歲，所有標(biāo)本均無(wú)溶血、黃疸及脂血。另選取本院患者的低、高值cTnI血清標(biāo)本各1份。

1.2儀器與試劑 星童Pylon3D全自動(dòng)循環(huán)增強(qiáng)熒光免疫分析儀及原裝配套試劑、校準(zhǔn)品，蘇州星童醫(yī)療技術(shù)有限公司生產(chǎn)的低值質(zhì)控品(批號(hào)2103171801)及高值質(zhì)控品(批號(hào)2203171801)。

1.3方法

1.3.1精密度驗(yàn)證 批內(nèi)精密度(重復(fù)性)測(cè)定：按照操作說(shuō)明書(shū)的要求對(duì)儀器進(jìn)行常規(guī)的保養(yǎng)、維護(hù)和校準(zhǔn)，保證室內(nèi)質(zhì)控在控的前提下再進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。選擇患者低、高值cTnI新鮮血清標(biāo)本各1份，在較短間隔時(shí)間內(nèi)各標(biāo)本連續(xù)重復(fù)測(cè)定10次，計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差與變異系數(shù)(CV)。參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)EP15-A2評(píng)價(jià)方案，將所得結(jié)果與廠商提供的性能指標(biāo)和公認(rèn)的質(zhì)量目標(biāo)進(jìn)行比較，若批內(nèi)CV≤1/4允許總誤差(TEa)，說(shuō)明該檢測(cè)系統(tǒng)的精密度符合要求。

1.3.2靈敏度驗(yàn)證 采用廠家配套的稀釋液按一定比例的關(guān)系配制成系列水平的標(biāo)本，按照要求測(cè)試10次。判斷現(xiàn)有靈敏度與測(cè)量下限范圍是否相符。判斷標(biāo)準(zhǔn)：參照CLSI EP17-A2評(píng)價(jià)方案，如有不超過(guò)1個(gè)數(shù)值(測(cè)試結(jié)果的10%)在初始采納的檢測(cè)下限(0.025 ng/mL)外，認(rèn)為實(shí)驗(yàn)室采納的靈敏度可接受。

1.3.3正確度驗(yàn)證 參照CNAS-CL38:2012《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床化學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明》(簡(jiǎn)稱CNAS-CL38：2012)的評(píng)價(jià)方案，用廠家質(zhì)控品或標(biāo)準(zhǔn)品作為定值參考物質(zhì)。最少測(cè)定高、低2個(gè)水平的質(zhì)控品或標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)水平重復(fù)測(cè)定2次，根據(jù)兩次測(cè)定結(jié)果的平均值與靶值來(lái)計(jì)算偏倚，以偏倚≤20%為可接受。

1.3.4線性范圍驗(yàn)證 參照CLSI EP6-A2評(píng)價(jià)方案并結(jié)合相關(guān)報(bào)道[6]，選取1份高值cTnI血清標(biāo)本(H)，1份低值cTnI血清標(biāo)本(L)，按照平均斜率法稀釋為梯度水平標(biāo)本，即將H和L按5L、4L+H、3L+2H、2L+3H、L+4H、5H的比例混合成6份標(biāo)本。對(duì)所有標(biāo)本進(jìn)行2次測(cè)定，取其均值進(jìn)行結(jié)果計(jì)算和判斷(在高水平標(biāo)本不易獲取時(shí)，可以通過(guò)在低水平標(biāo)本中添加分析物制備)。計(jì)算結(jié)果時(shí)，以預(yù)測(cè)值即理論水平為橫軸，實(shí)際測(cè)量值的均值為縱軸，繪制散點(diǎn)圖，進(jìn)行回歸分析，得出線性回歸斜率b、相關(guān)系數(shù)r，以及直線回歸方程Y=bX+a。若相關(guān)系數(shù)r≥0.975，b值為0.9～1.1，a接近于0，則線性范圍驗(yàn)證通過(guò)。

1.3.5參考區(qū)間驗(yàn)證 本項(xiàng)目的參考區(qū)間引用原國(guó)家衛(wèi)生部頒布的參考區(qū)間。按相關(guān)要求從健康體檢人群中選取20例，判斷現(xiàn)有參考值范圍與測(cè)量范圍是否相符。判斷標(biāo)準(zhǔn)：如有不超2個(gè)數(shù)值(測(cè)試結(jié)果的10%)在初始采納的參考范圍外，那么實(shí)驗(yàn)室采納的參考范圍可接受，即該參考區(qū)間可有效地應(yīng)用于本實(shí)驗(yàn)室。

1.3.6方法學(xué)比對(duì) 參照CLSI EP9-A2評(píng)價(jià)方案，進(jìn)行星童Pylon3D免疫熒光法與西門子化學(xué)發(fā)光法cTnI檢測(cè)結(jié)果的比對(duì)。按照要求選取10份血清標(biāo)本，在保證檢測(cè)系統(tǒng)處于良好狀態(tài)下，將兩種儀器所檢測(cè)的cTnI結(jié)果進(jìn)行比較。以星童Pylon3D免疫熒光法的檢測(cè)結(jié)果為Y軸，西門子化學(xué)發(fā)光法的檢測(cè)結(jié)果為X軸，繪制散點(diǎn)圖，計(jì)算回歸方程。得到直線回歸方程Y=bX+a，若相關(guān)系數(shù)r≥0.975，則說(shuō)兩種儀器所用方法檢測(cè)的cTnI結(jié)果具有較好的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0軟件和Excel2003軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理和分析，采用直線相關(guān)與回歸分析數(shù)據(jù)間的關(guān)系，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1精密度驗(yàn)證結(jié)果 星童Pylon3D全自動(dòng)循環(huán)增強(qiáng)熒光免疫分析儀檢測(cè)cTnI的批內(nèi)精密度結(jié)果顯示，在批內(nèi)測(cè)定低、高水平標(biāo)本的均值分別為0.214、60.600 ng/mL，標(biāo)準(zhǔn)差分別為0.013和4.270，CV分別為6.13%、7.05%，CV均小于廠家最大允許誤差(10%)，且均<1/4TEa。

2.2靈敏度驗(yàn)證結(jié)果 采用廠家配套的稀釋液按一定比例的關(guān)系配制成系列水平的標(biāo)本，按照要求使用星童Pylon3D全自動(dòng)循環(huán)增強(qiáng)熒光免疫分析儀測(cè)試10次。結(jié)果顯示，10份標(biāo)本的測(cè)試結(jié)果<0.025 ng/mL，無(wú)任何1例數(shù)據(jù)在初始采納的檢測(cè)下限(0.025 ng/mL)外，符合EP17-A2評(píng)價(jià)方案標(biāo)準(zhǔn)，靈敏度驗(yàn)證通過(guò)。

2.3正確度驗(yàn)證結(jié)果 結(jié)果顯示，低水平質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果均值為0.212 ng/mL，靶值為0.245 ng/mL，計(jì)算其偏倚為13.50%；高水平質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果均值為0.841 ng/mL，靶值為0.888 ng/mL，計(jì)算其偏倚為5.29%。高、低兩個(gè)水平質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果的偏倚≤20%，符合CNAS-CL38：2012評(píng)價(jià)方案標(biāo)準(zhǔn)，正確度驗(yàn)證通過(guò)。

2.4線性范圍驗(yàn)證結(jié)果 對(duì)所有標(biāo)本進(jìn)行2次測(cè)定，取其均值進(jìn)行結(jié)果計(jì)算和判斷，得到直線回歸方程Y=1.022 3X+0.065 1(R2=0.998 9)，相關(guān)系數(shù)r>0.975，b值為0.9～1.1，a接近于0，說(shuō)明預(yù)期值與實(shí)測(cè)值相關(guān)性好，線性范圍驗(yàn)證通過(guò)。見(jiàn)表1。

表1 線性范圍驗(yàn)證結(jié)果(nmol/L)

2.5參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果 按照要求從健康體檢人群中選取20份采集血清標(biāo)本，經(jīng)檢測(cè)，無(wú)檢測(cè)值在初始采納的參考范圍(0.1 ng/mL)外，即均處于所引用的參考區(qū)間內(nèi)，說(shuō)明該生物參考區(qū)間適用于本實(shí)驗(yàn)室。見(jiàn)表2。

表2 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果(ng/mL)

2.6方法學(xué)比對(duì)結(jié)果 選取10份血清標(biāo)本，在保證檢測(cè)系統(tǒng)處于良好狀態(tài)下，進(jìn)行星童Pylon3D免疫熒光法與西門子化學(xué)發(fā)光法cTnI項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果的比對(duì)。直線回歸方程為Y=2.103 8X+0.005 2(R2=0.999 7)，相關(guān)系數(shù)r=0.999 8>0.975，可見(jiàn)兩種方法有較好的相關(guān)性。見(jiàn)表3。

表3 方法學(xué)比對(duì)結(jié)果(ng/mL)

3 討 論

在臨床工作中，臨床醫(yī)生常依靠醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室給出的結(jié)果對(duì)患者進(jìn)行診斷、用藥指導(dǎo)及預(yù)后評(píng)估等。因此，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室需要確保所給出結(jié)果的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)系統(tǒng)的良好分析性能是保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的前提。根據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》的要求和《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可準(zhǔn)則》的規(guī)定，臨床實(shí)驗(yàn)室在開(kāi)展新的檢測(cè)項(xiàng)目、更換檢測(cè)系統(tǒng)或改變檢測(cè)試劑盒時(shí)必須對(duì)主要分析性能進(jìn)行驗(yàn)證或確認(rèn)，以證實(shí)其滿足要求。星童Pylon3D全自動(dòng)循環(huán)增強(qiáng)熒光免疫分析儀在本實(shí)驗(yàn)室用于cTnI項(xiàng)目檢測(cè)，盡管廠家聲明本儀器具有良好的性能，但針對(duì)本實(shí)驗(yàn)室，該儀器的主要性能如精密度、正確度、線性范圍、生物參考區(qū)間等仍需進(jìn)一步驗(yàn)證[7-9]。

精密度是反映方法學(xué)性能的主要指標(biāo)，體現(xiàn)了系統(tǒng)的隨機(jī)誤差，可確保標(biāo)本在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過(guò)程中的穩(wěn)定性、可靠性，良好的精密度和準(zhǔn)確度是保證結(jié)果準(zhǔn)確的前提，也是進(jìn)行其他性能驗(yàn)證試驗(yàn)的前提[10]。常規(guī)的精密度驗(yàn)證參考品至少需要包含兩個(gè)水平，因此本實(shí)驗(yàn)室在批內(nèi)測(cè)定了兩個(gè)不同水平cTnI新鮮血清標(biāo)本各1份，為盡可能地排除各類影響因素，在較短間隔時(shí)間內(nèi)各標(biāo)本連續(xù)重復(fù)測(cè)定10次，計(jì)算各指標(biāo)。驗(yàn)證結(jié)果顯示，低、高水平標(biāo)本的批內(nèi)CV分別為6.13%、7.05%，參照CLSI EP15-A2評(píng)價(jià)方案，均遠(yuǎn)低于廠家最大允許誤差(10%)，且均小于1/4TEa。以上驗(yàn)證結(jié)果提示，星童Pylon3D全自動(dòng)循環(huán)增強(qiáng)熒光免疫分析儀檢測(cè)系統(tǒng)的精密度符合要求，可以投入臨床使用。

靈敏度是指某方法對(duì)單位濃度或單位量待測(cè)物質(zhì)變化所致響應(yīng)量的變化程度，觀察某種方法是否能夠快速檢出待測(cè)指標(biāo)，也是反映方法學(xué)性能的重要指標(biāo)之一[11]。參照EP17-A2評(píng)價(jià)方案，本實(shí)驗(yàn)室采用廠家配套的稀釋液按一定比例的關(guān)系配制成系列水平的標(biāo)本，按照要求使用星童Pylon3D全自動(dòng)循環(huán)增強(qiáng)熒光免疫分析儀測(cè)試10次。結(jié)果提示所有數(shù)據(jù)均在初始采納的檢測(cè)下限內(nèi)，符合EP17-A2評(píng)價(jià)方案標(biāo)準(zhǔn)，分析靈敏度驗(yàn)證通過(guò)。

正確度可反映檢測(cè)系統(tǒng)的系統(tǒng)誤差。驗(yàn)證有兩種方法：(1)待驗(yàn)證的方法與其他檢驗(yàn)方法或試劑盒同時(shí)檢測(cè)患者標(biāo)本來(lái)進(jìn)行正確度驗(yàn)證；(2)用參考物質(zhì)進(jìn)行正確度驗(yàn)證試驗(yàn)[12]。本實(shí)驗(yàn)室采用第二種方法對(duì)cTnI項(xiàng)目加以驗(yàn)證，測(cè)定廠家提供的高、低兩個(gè)水平的質(zhì)控品，每個(gè)水平均重復(fù)測(cè)定2次，根據(jù)兩次測(cè)定結(jié)果的均值與靶值來(lái)計(jì)算偏倚。驗(yàn)證結(jié)果提示，高、低兩個(gè)水平質(zhì)控品的相對(duì)偏倚分別為13.50%和5.29%，均≤20%，符合CNAS-CL38：2012評(píng)價(jià)方案標(biāo)準(zhǔn)，表明該檢測(cè)系統(tǒng)正確度性能符合要求。

在日常檢驗(yàn)工作中，可能存在少數(shù)病例某一指標(biāo)直接檢測(cè)結(jié)果為陰性，但增加一定稀釋倍數(shù)再測(cè)結(jié)果即可變?yōu)殛?yáng)性，這就與檢測(cè)系統(tǒng)的線性范圍相關(guān)。線性范圍定義為患者標(biāo)本未經(jīng)任何稀釋、濃縮等預(yù)處理，由檢驗(yàn)方法得到可靠結(jié)果的范圍，其反映了分析結(jié)果與標(biāo)本真實(shí)水平之間呈恒定比例的關(guān)系，所以患者結(jié)果可報(bào)告范圍可視為對(duì)系統(tǒng)線性范圍的驗(yàn)證。依據(jù)EP6-A2文件方案，線性范圍驗(yàn)證可進(jìn)行多項(xiàng)式回歸計(jì)算，或者國(guó)內(nèi)常用的較簡(jiǎn)便的平均斜率法[13]。結(jié)合實(shí)際情況，本實(shí)驗(yàn)室選擇了平均斜率法，經(jīng)計(jì)算發(fā)現(xiàn)預(yù)測(cè)值與實(shí)際測(cè)量值之間相關(guān)性好(相關(guān)系數(shù)r>0.975)，提示線性范圍驗(yàn)證通過(guò)，滿足臨床實(shí)際應(yīng)用要求。

通常某一指標(biāo)的參考區(qū)間是研究人員對(duì)未患相應(yīng)疾病的健康人群進(jìn)行相應(yīng)檢查，用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)檢查結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，取其95.0%或97.5%的范圍作為參考范圍。而不同地區(qū)、不同實(shí)驗(yàn)室都會(huì)確定實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目的參考范圍，只有這樣才能有效指導(dǎo)臨床正確分析試驗(yàn)結(jié)果。由于參考區(qū)間的建立是針對(duì)某一部分人群確立的，對(duì)于一些生物學(xué)變異較大的測(cè)試項(xiàng)目，不同人種乃至不同地區(qū)的人群，其參考范圍不盡相同。ISO15189要求實(shí)驗(yàn)室在每個(gè)新的測(cè)試項(xiàng)目開(kāi)展前或其分析方法學(xué)改變，甚至患者群體改變時(shí)都需要進(jìn)行參考區(qū)間驗(yàn)證試驗(yàn)[14]。美國(guó)病理學(xué)家學(xué)會(huì)(CAP)要求對(duì)引用的試劑說(shuō)明書(shū)、參考文獻(xiàn)中的參考區(qū)間進(jìn)行證實(shí)。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)了20份健康體檢人群血清標(biāo)本，結(jié)果顯示所有結(jié)果均在初始采納的參考范圍內(nèi)，該生物參考區(qū)間適用于本實(shí)驗(yàn)室。

在日常的臨床工作中，實(shí)驗(yàn)室常常會(huì)使用一些新的方法、試劑、儀器，但是在使用它們之前，往往需要對(duì)其進(jìn)行一些評(píng)價(jià)。有學(xué)者認(rèn)為，其中很重要的一項(xiàng)便是和實(shí)驗(yàn)室目前使用的方法、試劑、儀器進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)試驗(yàn)，以確定新方法、試劑、儀器測(cè)定的結(jié)果是否在允許的范圍內(nèi)[15]。CLSI頒發(fā)的EP9-A2文件可以指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室使用患者標(biāo)本進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)。本研究中，實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格按照EP9-A2文件，選取10份血清標(biāo)本，在保證檢測(cè)系統(tǒng)處于良好狀態(tài)下，進(jìn)行星童Pylon3D免疫熒光法與西門子化學(xué)發(fā)光法cTnI項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果的比對(duì)。結(jié)果提示，兩種儀器所用方法檢測(cè)的cTnI結(jié)果具有較好的相關(guān)性，說(shuō)明星童Pylon3D免疫熒光法可以在臨床工作中使用。

綜上所述，星童Pylon3D全自動(dòng)循環(huán)增強(qiáng)熒光免疫分析儀性能好，既能符合質(zhì)量目標(biāo)要求，又能滿足臨床對(duì)cTnI的定量檢測(cè)要求。