醫(yī)用一次性防護(hù)服生物負(fù)載量檢測(cè)技術(shù)研究

遼寧省檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證中心 （遼寧 沈陽(yáng) 110036）

內(nèi)容提要：目的：醫(yī)用一次性防護(hù)服生物負(fù)載量檢測(cè)技術(shù)研究。方法：采集2020年2月～3月遼寧省4家醫(yī)用一次性防護(hù)服企業(yè)生產(chǎn)的4種材質(zhì)共5批73件產(chǎn)品，參考GB/T 19973.1-2015《醫(yī)療器械的滅菌 微生物學(xué)方法第一部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)的測(cè)定》、EJ/T 1243-2017《確認(rèn)輻射滅菌劑量的生物負(fù)載數(shù)據(jù)分析方法》、GB 18280.2-2015《建立滅菌劑量》的標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)樣品采集技術(shù)適用性、回收率、修正系數(shù)進(jìn)行考查。結(jié)果：三種采集技術(shù)中質(zhì)量法適用于醫(yī)用一次性防護(hù)服負(fù)載量檢測(cè)；實(shí)驗(yàn)回收率和修正系數(shù)的正確應(yīng)用對(duì)輻照滅菌劑量影響較大。結(jié)論：生物負(fù)載值反映了生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)環(huán)境狀況和質(zhì)量管理水平，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)加強(qiáng)生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量控制。

生物負(fù)載量是建立滅菌劑量的關(guān)鍵值，既決定了輻照成本的高低，又反映了企業(yè)生產(chǎn)質(zhì)量控制水平。如果在產(chǎn)品確定滅菌參數(shù)時(shí)，收集的生物負(fù)載數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，會(huì)直接影響產(chǎn)品的滅菌。不同的醫(yī)療器械和防護(hù)用品不能只確定一種技術(shù)方法來(lái)檢測(cè)，必須通過(guò)方法適用性實(shí)驗(yàn)，調(diào)整不同的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，評(píng)價(jià)所用檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法的適宜性，才能得到對(duì)質(zhì)量控制工作有意義的生物負(fù)載數(shù)據(jù)[1,2]。本項(xiàng)目通過(guò)對(duì)醫(yī)用一次性防護(hù)服采集技術(shù)適用性的考查、實(shí)驗(yàn)修正系數(shù)和回收率測(cè)定，得到的用于建立滅菌劑量的生物負(fù)載數(shù)據(jù)，是對(duì)醫(yī)用一次性防護(hù)服生物負(fù)載檢測(cè)方法的一次全面考查。

1.材料與方法

1.1 一般材料

樣本來(lái)源：采集2020年2月～3月遼寧省4家醫(yī)用防護(hù)服生產(chǎn)企業(yè)的4種材質(zhì)共5批73件醫(yī)用一次性防護(hù)服產(chǎn)品，按照不同生產(chǎn)場(chǎng)地不同生產(chǎn)批次進(jìn)行分組，設(shè)立檢測(cè)組、觀察組以及對(duì)照組。檢測(cè)組：生物負(fù)載測(cè)量實(shí)驗(yàn)；觀察組：污染趨勢(shì)分析；對(duì)照組：30kGy輻照，無(wú)菌保證水平為10-6。

儀器與試劑：恒溫培養(yǎng)箱（Binder-KB240）；生物安全柜（NUAIRE-NU-437-400S）；顯微鏡（萊卡-DM4000B）；實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)系統(tǒng)（BAX Q7）；全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀（miniVIDAS)；MALDI-TOF全自動(dòng)高級(jí)版微生物質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)及配套試劑（美國(guó)BRUKER公司）。

增菌與培養(yǎng)用干粉培養(yǎng)基均為北京路橋技術(shù)有限責(zé)任公司出品。顯色培養(yǎng)基為法國(guó)科瑪嘉顯色培養(yǎng)基，API試紙條為法國(guó)梅里埃產(chǎn)品，均購(gòu)自北京路橋技術(shù)有限責(zé)任公司。以上培養(yǎng)基試劑均在有效期內(nèi)使用。

表1.生物負(fù)載方法適用性實(shí)驗(yàn)

1.2 方法

1.2.1 生物負(fù)載測(cè)試方法

本實(shí)驗(yàn)采用GB/T 19973.1-2015《醫(yī)療器械的滅菌 微生物學(xué)方法第一部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)的測(cè)定》中B.4.3平板傾注法。

1.2.2 生物負(fù)載方法適用性實(shí)驗(yàn)測(cè)試方法

依據(jù)GB/T 19973.1-2015，向?qū)φ战M空白樣品所選部分接種濃度為10～100CFU/0.1mL的標(biāo)準(zhǔn)菌株（大腸桿菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC8538、蠟樣芽胞桿菌CMCC(B)63303）懸液0.1mL，并在生物安全柜正常開(kāi)啟的層流狀態(tài)下干燥。以此為樣品做如下實(shí)驗(yàn)：采集方式一（質(zhì)量法局部）：稱(chēng)重取25g樣品到225mL洗脫液；采集方式二（涂抹法局部）：涂抹25cm2樣品表面積到225mL洗脫液；采集方式三：在方式一的洗脫液中添加表面活性劑。洗脫液為緩沖磷酸鹽液（pH=7.0）?；厥章?試驗(yàn)組菌落數(shù)/菌液組菌落數(shù)×100%[1]。

1.2.3 生物負(fù)載數(shù)據(jù)分析方法與實(shí)驗(yàn)依據(jù)

EJ/T 1243-2017《醫(yī)療器械輻射滅菌確認(rèn)輻射滅菌劑量的生物負(fù)載數(shù)據(jù)分析方法》[3]。

GB 18280.2-2015《醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 輻射 第2部分：建立滅菌劑量》[4]。

《國(guó)務(wù)院應(yīng)對(duì)新型冠狀病毒感染的肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制醫(yī)療物資保障組關(guān)于疫情期間執(zhí)行<醫(yī)用一次性防護(hù)服輻照滅菌應(yīng)急規(guī)范（臨時(shí)）>的通知（肺炎機(jī)制醫(yī)療保障發(fā)[2020]112號(hào)）》[5]。

1.3 檢驗(yàn)項(xiàng)目

非選擇性需氧菌：菌落總數(shù)、大腸菌群測(cè)定。

真菌：霉菌和酵母菌。

致病菌：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞、蠟樣芽胞桿菌。

1.4 觀察指標(biāo)與判定標(biāo)準(zhǔn)

①生物負(fù)載方法適用性：對(duì)于一特定產(chǎn)品，采集存活微生物是方法的一部分，應(yīng)考慮采集效率，對(duì)該產(chǎn)品的采集技術(shù)進(jìn)行適用性的考查。用上述三種采集方式，分別計(jì)算回收率，評(píng)價(jià)醫(yī)用一次性防護(hù)服生物負(fù)載方法適用性方法。②回收率：將樣品按照多次洗脫方式回收微生物，每重復(fù)一次，將產(chǎn)品上的洗脫液全部回收并計(jì)數(shù)，直到回收數(shù)量沒(méi)有明顯增加為止，計(jì)算方法回收率。③修正系數(shù)：本項(xiàng)目采用的質(zhì)量法，因考慮到采集的局部樣本數(shù)據(jù)代表性問(wèn)題，應(yīng)考慮整體樣本均勻性，因此，將局部采樣得到的負(fù)載值數(shù)據(jù)與直投式采樣的負(fù)載數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，得到均勻系數(shù)（SIP），結(jié)合回收率最后得到修正系數(shù)（修正系數(shù)=均勻系數(shù)/回收率）。④生物負(fù)載值測(cè)定與分析：將實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)經(jīng)修正后得出生物負(fù)載數(shù)值，再運(yùn)用極差控制圖分析數(shù)據(jù)最后得到用于滅菌劑量確認(rèn)的生物負(fù)載數(shù)據(jù)[3]。⑤滅菌劑量。

表2.回收率測(cè)定

2.結(jié)果

2.1 生物負(fù)載方法適用性實(shí)驗(yàn)

三種采集方式效率相當(dāng)，按照適用性來(lái)說(shuō)，本項(xiàng)目宜采用質(zhì)量法。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 回收率測(cè)定

回收率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3 修正系數(shù)的完善

本項(xiàng)目得到的均勻系數(shù)（SIP）經(jīng)計(jì)算為0.657，因此修正系數(shù)為0.73。

2.4 生物負(fù)載值測(cè)定與分析

生物負(fù)載數(shù)據(jù)見(jiàn)表3，見(jiàn)圖1。

2.5 確認(rèn)滅菌劑量

運(yùn)用極差控制圖后，剔除超差數(shù)據(jù)，應(yīng)用質(zhì)量法計(jì)算得平均生物負(fù)載為1600 CFU/g，查GB18280.2-2015表4，按照肺炎機(jī)制醫(yī)療保障發(fā)[2020]112號(hào)通知的要求，以14.9kGy作為最低滅菌劑量可保證10-3無(wú)菌保證水平。見(jiàn)表4。

表3.運(yùn)用控制圖分析用于滅菌劑量確認(rèn)的生物負(fù)載數(shù)據(jù)

表4.生物負(fù)載值修正前后滅菌劑量的差異

圖1.生物負(fù)載極差圖（23個(gè)樣品組）

3.討論

3.1 方法討論

本項(xiàng)目完成了醫(yī)用一次性防護(hù)服生物負(fù)載方法適用性考查、實(shí)驗(yàn)修正系數(shù)和回收率測(cè)定，并運(yùn)用分析方法得到用于滅菌劑量確認(rèn)的生物負(fù)載數(shù)據(jù)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，質(zhì)量法、涂抹法、添加表活劑法的回收率分別為89%、86.6%、83.8%，質(zhì)量法操作簡(jiǎn)單，回收率較高，適用于醫(yī)用一次性防護(hù)服負(fù)載量檢測(cè)；實(shí)驗(yàn)回收率和修正系數(shù)的正確應(yīng)用對(duì)輻照滅菌劑量影響較大，應(yīng)用修正值前后滅菌劑量差異較大，應(yīng)正確使用修正值。

3.2 結(jié)果討論

生物負(fù)載值反映了生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生狀況以及質(zhì)量管理水平。本項(xiàng)目采集了遼寧省4家醫(yī)用一次性防護(hù)服生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品，生物負(fù)載值差異較大，與生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)環(huán)境相關(guān)。醫(yī)用一次性防護(hù)服是醫(yī)護(hù)人員隔離病原微生物的第一道屏障，生物負(fù)載實(shí)驗(yàn)中檢出了金黃色葡萄球菌等致病菌，表明如果不重視產(chǎn)品質(zhì)量，對(duì)醫(yī)護(hù)人員及醫(yī)院環(huán)境都會(huì)造成污染危害，不能單純的認(rèn)為醫(yī)用一次性防護(hù)服使用的環(huán)境非無(wú)菌環(huán)境而忽略對(duì)生產(chǎn)環(huán)境的消毒滅菌及產(chǎn)品滅菌環(huán)節(jié)[6]。產(chǎn)品的滅菌劑量是根據(jù)其生物負(fù)載水平確定的，滅菌劑量決定了輻照成本的高低，因此生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)常規(guī)生產(chǎn)產(chǎn)品的生物負(fù)載進(jìn)行質(zhì)量控制[7]。