天麻提取物配伍刺五加提取物組方對(duì)小鼠睡眠的影響

張夢(mèng)麒　田孟華　張振宇　楊新周

摘 要：目的：研究天麻和刺五加提取物對(duì)于改進(jìn)睡眠質(zhì)量的作用，為天麻和刺五加改善睡眠保健食品或藥品的開(kāi)發(fā)奠定一定的基礎(chǔ)。方法：分別以0.05、0.1、0.3g/kg·bw劑量給小鼠連續(xù)灌胃30d，采用直接睡眠實(shí)驗(yàn)、延長(zhǎng)戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)、巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)，對(duì)小鼠睡眠時(shí)間和潛伏睡眠時(shí)間等進(jìn)行觀察。結(jié)果：經(jīng)口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，末次給藥后，與溶媒對(duì)照組比較，（1）各劑量組小鼠均未發(fā)生睡眠現(xiàn)象;（2）0.3g/kg·bw劑量組小鼠睡眠時(shí)間顯著增加，具有顯著性差異，（3）0.1、0.3g/kg·bw劑量組入睡動(dòng)物數(shù)顯著增加，具有顯著性差異。（4）0.05g/kg·bw、0.1g/kg·bw劑量組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短，具有顯著性差異。結(jié)論：天麻刺五加提取物具有輔助睡眠的功效和縮短睡眠潛伏期的時(shí)間，具有改善睡眠質(zhì)量的作用。

關(guān)鍵詞：天麻;刺五加;提取物;改善睡眠

隨著社會(huì)的不斷進(jìn)步與發(fā)展，生活節(jié)奏越來(lái)越快，人們的生活壓力隨之增大，加之人們睡前使用電子產(chǎn)品的頻率增加，睡眠障礙疾病也隨之產(chǎn)生，失眠也逐漸成為臨床最常見(jiàn)的睡眠障礙類型。根據(jù)第三屆世界睡眠大會(huì)統(tǒng)計(jì)表明，預(yù)計(jì)到2020年大約有超過(guò)7億失眠者。目前針對(duì)失眠多采用一些藥物治療，包括苯二氮□類類受體激動(dòng)藥、褪黑素或褪黑素受體激動(dòng)劑、具有鎮(zhèn)靜作用的抗抑郁癥藥物、某些抗精神病藥、有中樞抑制作用的抗組胺藥物、中藥等進(jìn)行治療，長(zhǎng)期服用西藥類藥物容易產(chǎn)生依賴并帶來(lái)一定的副作用，如出現(xiàn)共濟(jì)失調(diào)、順行記憶障礙等。因此研究一些藥食同源的具有養(yǎng)心安神的藥品或保健食品，用于改善失眠癥狀極為重要。

天麻（GastrodiaeRhizoma）為蘭科真菌營(yíng)養(yǎng)型多年生草本植物天麻（Gastrodiaelata Bl.）的干燥塊莖，是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥材之一，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，位列上品，在中國(guó)和東亞國(guó)家已有上千年的應(yīng)用歷史。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，天麻對(duì)預(yù)防和治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管和免疫系統(tǒng)疾病具有一定功效，臨床醫(yī)學(xué)常用于治療頭暈?zāi)垦?、肢體麻木、癲癇抽搐、小兒驚風(fēng)、風(fēng)濕痹痛等癥。此外，天麻富含多種營(yíng)養(yǎng)成分和礦質(zhì)元素，已廣泛用于食品輔料，如“天麻蒸蛋”、“天麻烏骨雞”和“天麻粥”等。刺五加（Radix AcanthopanacisSemticosi）為我國(guó)的傳統(tǒng)中藥，重點(diǎn)開(kāi)發(fā)的北藥之一，益氣健脾、補(bǔ)腎安神的功效?，F(xiàn)代臨床和實(shí)驗(yàn)研究表明，刺五加在治療睡眠障礙提高睡眠質(zhì)量方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。

天麻和刺五加均具有安眠鎮(zhèn)靜的作用，因此，本文根據(jù)天麻和五味子的作用，將二者的提取物進(jìn)行配伍，研究天麻和刺五加提取物對(duì)于改進(jìn)睡眠質(zhì)量的作用，為天麻和刺五加改善睡眠保健食品或藥品的開(kāi)發(fā)奠定一定的基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)KM小鼠，全雌，周齡4～6周，體重18～22g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（粵）2013-0002。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證：SYXK（滇）K2017-0004，發(fā)證單位：昆明市科技局。小鼠于PC飼養(yǎng)盒群養(yǎng)，每日飼喂大小鼠生長(zhǎng)繁殖飼料，自由取食，自由飲水。飼養(yǎng)溫度為25±2℃，相對(duì)濕度40～70%。

1.2 藥品與試劑

天麻提取物配伍刺五加提取物（以下簡(jiǎn)稱“天麻刺五加提取物”），兩種提取物單獨(dú)提取，按照1∶2比例進(jìn)行配伍，人體推薦量為0.5g/60kg·bw（成人）/日。天麻提取物選用干燥的優(yōu)質(zhì)天麻塊莖，粉碎，加入10倍量的70%乙醇加熱回流提取3次，合并提取液，濃縮、干燥所得，每克天麻提取物相當(dāng)于8.0g生藥量;刺五加提取物采用優(yōu)質(zhì)刺五加根莖粉碎至約40目，加入10倍量的60%乙醇加熱回流提取3次，合并提取液，濃縮、干燥所得，每克刺五加提取物相當(dāng)于12.0g生藥量。

根據(jù)天麻刺五加提取物人體推薦劑量，設(shè)0.042、0.083、0.25g/kg·bw三個(gè)劑量組（根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》分別相當(dāng)于受試樣品人體推薦攝入量的5倍、10倍、30倍），采用純水配制，經(jīng)口每日1次給予小鼠相應(yīng)劑量的受試物，小鼠灌胃量為0.1mL/10g·bw。

戊巴比妥鈉，Sigma公司分裝，批號(hào)：20131225、巴比妥鈉，上海試劑三廠生產(chǎn)，批號(hào)：65001。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

JJ2000型電子天平，常熟市雙杰測(cè)試儀器廠生產(chǎn)、SQP型電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司生產(chǎn)、ELGA LA 613超純水機(jī)，英國(guó)ELGA LabWater/VWS（UK）Ltd生產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 直接睡眠實(shí)驗(yàn)

取SPF級(jí)KM小鼠48只，隨機(jī)分為溶媒對(duì)照組、天麻刺五加提取物低、中、高劑量組，每組12只，全雄。受試組以0.1mL/10g·bw給藥體積灌胃給予相應(yīng)受試物，溶媒對(duì)照組給予等體積純水，1次/d，連續(xù)30d。末次給藥后，以小鼠翻正反射消失1min為進(jìn)入睡眠，翻正反射恢復(fù)即為小鼠覺(jué)醒判定標(biāo)準(zhǔn)，記錄各組入睡動(dòng)物數(shù)及睡眠時(shí)間，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2.2 延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)

分組及給藥方法同“2.1”。末次給藥15min后，各組小鼠均以45mg/kg·bw劑量腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為10mL/kg·bw。記錄動(dòng)物翻正反射消失至覺(jué)醒的時(shí)間為持續(xù)睡眠時(shí)間（當(dāng)小鼠置于背臥位時(shí)，能立即翻正身位，超過(guò)60s不能翻正者，即認(rèn)為翻正反射消失，進(jìn)入睡眠。翻正反射恢復(fù)即為動(dòng)物覺(jué)醒，翻正反射消失至恢復(fù)這段時(shí)間為動(dòng)物睡眠時(shí)間），觀察受試樣品能否延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間。比較溶媒對(duì)照組與受試物組之間睡眠時(shí)間延長(zhǎng)的差異，睡眠時(shí)間延長(zhǎng)有顯著性，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

2.3 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)

分組及給藥方法同“2.1”。末次給藥15min后，各組動(dòng)物按30mg/kg·bw劑量腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為10mL/kg·bw，記錄30min內(nèi)入睡動(dòng)物數(shù)（以小鼠翻正消失1min為睡眠指標(biāo)）。比較溶媒對(duì)照組與受試物組之間入睡動(dòng)物數(shù)的差異，入睡動(dòng)物數(shù)增加有顯著性，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

2.4 巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)

分組及給藥方法同“2.1”。末次給藥15min后，各組小鼠均以10mL/kg·bw給藥體積腹腔注射巴比妥鈉（300mg/kg·bw），記錄注射巴比妥鈉后至小鼠翻正反射消失時(shí)間作為入睡潛伏期（以小鼠翻正消失1min為睡眠指標(biāo)），觀察受試物對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響。比較溶媒對(duì)照組與受試物組之間睡眠潛伏期的差異，睡眠潛伏期縮短有顯著性，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

2.5 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

入睡潛伏期、睡眠時(shí)間為計(jì)量資料，用SPSS17.0軟件對(duì)各試驗(yàn)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，滿足方差齊要求的數(shù)據(jù)資料，用單因素方差分析方法中多個(gè)試驗(yàn)組與一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理;對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)資料進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。入睡動(dòng)物數(shù)為計(jì)數(shù)資料，用X2檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 對(duì)直接睡眠的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示：經(jīng)口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，末次給藥后，各組小鼠均未發(fā)生睡眠現(xiàn)象。天麻刺五加提取物0.05、0.1、0.3g/kg·bw劑量對(duì)小鼠均無(wú)直接睡眠作用。

3.2 天麻刺五加對(duì)延長(zhǎng)戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時(shí)間的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示：經(jīng)口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，腹腔注射戊巴比妥鈉，觀察小鼠的睡眠時(shí)間。睡眠時(shí)間經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析中多個(gè)實(shí)驗(yàn)組與一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，與溶媒對(duì)照組比較，0.3g/kg·bw劑量組小鼠睡眠時(shí)間顯著增加，具有顯著性差異（P<0.05）。

3.3 天麻刺五加提取物對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量催眠的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示：經(jīng)口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，腹腔注射戊巴比妥鈉，觀察30min內(nèi)各組小鼠睡眠發(fā)生率。入睡動(dòng)物數(shù)用X2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。與溶媒對(duì)照組比較，0.1、0.3g/kg·bw劑量組入睡動(dòng)物數(shù)顯著增加，具有顯著性差異（P<0.05）。

3.4 天麻刺五加提取物對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4所示：經(jīng)口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，腹腔注射巴比妥鈉，觀察小鼠的睡眠潛伏期。睡眠潛伏期經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個(gè)實(shí)驗(yàn)組與一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。與溶媒對(duì)照組比較，0.05g/kg·bw、0.1g/kg·bw劑量組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短，具有顯著性差異（P<0.05）。

4 討論

本文參照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）的要求，采用4個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)天麻刺五加提取物的改善睡眠作用進(jìn)行研究。其中，直接睡眠實(shí)驗(yàn)對(duì)受試物的直接催眠作用進(jìn)行研究;延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)主要是研究受試物與戊巴比妥鈉的協(xié)同作用;戊巴比妥鈉通過(guò)肝酶代謝，若受試物對(duì)肝酶具有抑制作用，亦可延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間，因此，為了排除干擾，進(jìn)行戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)，如果入睡動(dòng)物數(shù)顯著增加，可說(shuō)明受試樣品與戊巴比妥鈉（閾下劑量）具有協(xié)同作用;巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)是在巴比妥鈉催眠的基礎(chǔ)上，觀察受試樣品能否縮短入睡潛伏期，若睡眠潛伏期縮短，則說(shuō)明受試樣品與巴比妥鈉有協(xié)同作用。

目前，對(duì)天麻、刺五加在改善睡眠方面的研究較多，但對(duì)兩者進(jìn)行配伍后的研究較少。在本實(shí)驗(yàn)條件及所設(shè)計(jì)的劑量范圍內(nèi)，天麻刺五加提取物0.3g/kg·bw可明顯增加戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時(shí)間，0.1和0.3g/kg·bw劑量可明顯增加戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠入睡數(shù)量，且呈現(xiàn)出明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系;天麻刺五加提取物0.1和0.3g/kg·bw劑量組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短。上述結(jié)果表明，天麻刺五加提取物具有改善睡眠的保健功能。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)天麻刺五加提取物各劑量組對(duì)小鼠均無(wú)明顯直接睡眠作用。

綜上所述，根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）中的判定標(biāo)準(zhǔn)，本實(shí)驗(yàn)條件及劑量范圍內(nèi)，天麻刺五加提取物具有改善睡眠功能作用，且不具有直接睡眠作用，其催眠作用弱于鎮(zhèn)靜催眠藥物，其改善睡眠作用的機(jī)制，還需進(jìn)一步深入研究。

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