檢測(cè)乳制品中蔗糖含量的同時(shí)檢測(cè)乳糖的必要性

牛奶是人們?nèi)粘Ｉ钪邢矏?ài)的食物之一，營(yíng)養(yǎng)豐富，容易消化吸收，是理想的天然食品。眾所周知，純牛奶因?yàn)樵现挥信Ｄ蹋允遣缓崽堑?，但在?shí)際的檢測(cè)過(guò)程中，按GB5009.8-2016采用高效液相色譜法檢測(cè)牛奶中的蔗糖含量時(shí)，在色譜圖上，有時(shí)我們會(huì)看到疑似蔗糖的色譜峰，該色譜峰的出峰時(shí)間與蔗糖標(biāo)液的出峰時(shí)間完全吻合，那么這到底是不是蔗糖？該如何確定與判斷，我們做了大量的實(shí)驗(yàn)對(duì)比，確定了疑似蔗糖的色譜峰并不是蔗糖，而是乳糖。乳糖是牛奶本身就含有的物質(zhì)，乳糖的存在往往會(huì)干擾蔗糖的檢測(cè)，容易讓檢測(cè)者誤將乳糖判為蔗糖，影響最終的檢測(cè)結(jié)果，因此我們對(duì)蔗糖檢測(cè)的研究對(duì)實(shí)際的檢測(cè)檢驗(yàn)工作有著重要意義。

實(shí)驗(yàn)部分

儀器：本實(shí)驗(yàn)使用島津高效液相色譜儀LC-20A 與示差折光檢測(cè)器RID-10A。具體配置為：LC-20A×2 輸液泵，SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，CTO-20A 柱溫箱，CBM-20A 系統(tǒng)控制器， SHIMADZU LCsolution 色譜工作站。

試劑與材料：蔗糖、乳糖（國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，純度均為99%）；乙腈（色譜純）；亞鐵氰化鉀、乙酸鋅（分析純）；實(shí)驗(yàn)用水為一級(jí)水。實(shí)驗(yàn)樣品：樣品來(lái)源于當(dāng)?shù)爻匈?gòu)買的牛奶，包括樣品1：三元天愛(ài)純牛奶；樣品2：蒙牛純牛奶；樣品3：百菲酪高鈣水牛奶。

色譜條件：色譜柱：氨基色譜柱（250L×4.6，5μm）；流動(dòng)相：乙腈+水；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣體積：10μL；柱溫：40℃

主要溶液配制：蔗糖標(biāo)液（10mg/mL)：稱取經(jīng)96℃±2℃干燥過(guò)的蔗糖標(biāo)物0.5g，加水溶解并定容至50mL。乳糖標(biāo)液（10mg/mL)：稱取經(jīng)96℃±2℃干燥過(guò)的乳糖標(biāo)物0.5g，加水溶解并定容至50mL。亞鐵氰化鉀溶液：稱10.6g亞鐵氰化鉀，加水溶解并定容至100mL。乙酸鋅溶液：稱21.9g乙酸鋅，加冰乙酸3mL，加水溶解并定容至100mL。

樣品制備：稱取10.0g樣品，加50mL水溶解，分別加5mL亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液，用水定容至100mL。超聲30min，用濾紙過(guò)濾，濾液過(guò)0.45μm濾膜過(guò)濾至進(jìn)樣瓶，供液相色譜分析。

實(shí)驗(yàn)條件與結(jié)果討論

實(shí)驗(yàn)一。蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：10mg/mL，流動(dòng)相：乙腈：水=70:30，以此條件進(jìn)樣，對(duì)三元天愛(ài)和蒙牛兩種純牛奶進(jìn)行檢測(cè)，并做了加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)兩種純牛奶和加標(biāo)實(shí)驗(yàn)都在蔗糖標(biāo)液的出峰位置看到了相應(yīng)的色譜峰，如圖1所示：

由圖1可以看出，樣品1、樣品2和樣品1加標(biāo)的出峰時(shí)間與蔗糖標(biāo)準(zhǔn)的出峰時(shí)間完全吻合，那究竟是不是蔗糖呢？從理論上來(lái)說(shuō)，純牛奶中是不含有蔗糖的，且由檢測(cè)到的蔗糖濃度可以看出，濃度與牛奶中乳糖的含量極為相似，為了確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，于是又進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)二的驗(yàn)證。

實(shí)驗(yàn)二。配制一個(gè)乳糖標(biāo)液（10mg/mL），采用“實(shí)驗(yàn)一”同樣的條件進(jìn)樣，發(fā)現(xiàn)乳糖標(biāo)準(zhǔn)的出峰時(shí)間與蔗糖的出峰時(shí)間完全重合了（見(jiàn)圖2），因此懷疑“實(shí)驗(yàn)一”中樣品檢測(cè)到的色譜峰極有可能是乳糖。為了驗(yàn)證這個(gè)猜測(cè)，我們對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了調(diào)整，將乙腈與水的配比調(diào)整為85：15，目的是把乳糖和蔗糖的色譜峰分開(kāi)。經(jīng)過(guò)再次對(duì)標(biāo)液和“實(shí)驗(yàn)一”的樣品進(jìn)行重新檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在蔗糖標(biāo)準(zhǔn)出峰的時(shí)間不再看到有色譜峰了，而在乳糖標(biāo)準(zhǔn)的出峰時(shí)間則看到了相應(yīng)的色譜峰，如圖3所示。

結(jié)論

由圖3可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)一中檢測(cè)到的色譜峰就是乳糖，而不是蔗糖。通過(guò)實(shí)驗(yàn)一和實(shí)驗(yàn)二可以看出，在檢測(cè)牛奶中蔗糖含量時(shí)，同時(shí)對(duì)乳糖進(jìn)行檢測(cè)是非常有必要的，否則可能就會(huì)發(fā)生實(shí)驗(yàn)一的情況，容易造成假陽(yáng)性的誤判，影響最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。