LC-MS/MS法測(cè)定止咳糖漿中福爾可定含量

劉 娟 徐健君

（1.拱北海關(guān)緝私局司法鑒定中心，廣東 珠海519000；2.珠海市公安局刑警支隊(duì)，廣東 珠海519000）

福爾可定（Pholcodine），別名嗎啉嗎啡、?？啥ǎ瘜W(xué)名稱為17-甲-基-3-［2-（4-嗎啉基）乙氧基］-4，5α-環(huán)氧-7，8-二脫氫嗎啡喃-6α-醇，分子式為C23H30N2O4。福爾可定為止咳祛痰和抗鼻粘膜充血藥，臨床上主要治療劇烈干咳和中等程度的疼痛［1］，屬于國家管制麻醉藥品［2］。2015年版《中國藥典》（二部）中用電位滴定法測(cè)定含量［3］，其他有HPLC法、流動(dòng)注射微乳液化學(xué)發(fā)光法等［4，5］。本文建立了用LC-MS/MS測(cè)定福爾可定，該方法操作簡(jiǎn)單快速、重現(xiàn)性好、線性范圍寬、靈敏度高，可用于止咳水中福爾可定成分的定性定量測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

Agilent Technologies 1290-6470三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)；SIGMA?3-18K高速離心機(jī)；EYELA CUTE MIXER CM100高速振蕩器；METTLERTOLEDO十萬分一電子天平。

鹽酸福爾可定標(biāo)準(zhǔn)品（美國Sigma公司），用甲醇配制備用濃度為0.1mg/mL福爾可定標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18℃冰箱中冷藏保存。實(shí)驗(yàn)用乙腈、甲醇、甲酸為質(zhì)譜純。

1.2 儀器條件

色譜條件：色譜柱ZORBAX Eclipse Plus C18（50mm×2.1mm，1.8μm），柱溫40℃，進(jìn)樣量1μL，流動(dòng)相：0.1%甲酸（A）-甲醇（B）-梯度洗脫（見表1），流速0.2mL/min。

表1 梯度洗脫條件

質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子源（ESI），正離子掃描下以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式分析，福爾可定的優(yōu)化采集參數(shù)（見表2）。

表2 福爾可定的MRM條件

1.3 樣品處理

取檢材用乙腈（根據(jù)實(shí)際濃度稀釋）稀釋10000倍，經(jīng)0.22m有機(jī)微孔濾膜過濾待檢。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜監(jiān)測(cè)離子的選擇

在ESI正離子模式下，用濃度1000ng/mL的福爾可定溶液不接色譜柱，進(jìn)樣質(zhì)譜儀進(jìn)行全掃描，獲得福爾可定的［M+H］399.2準(zhǔn)分子離子峰，以其作為母離子，優(yōu)化碎裂電壓進(jìn)行轟擊，獲得福爾可定二級(jí)全掃描質(zhì)譜，選擇信號(hào)較強(qiáng)m/z399.2/114.2（定量離子對(duì)）和m/z399.2/70.2兩對(duì)離子在MRM模式下，進(jìn)一步優(yōu)化子離子碰撞能量（見表2）。

2.2 方法的線性范圍和檢出限

在空白止咳糖漿（不含福爾可定成分的止咳糖漿）中加入系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，配成濃度為0.05，0.1，1.0，5.0，10.0，50.0，100.0，200.0，500.0ng/mL的樣品，在選定的色譜和質(zhì)譜條件下測(cè)定。福爾可定的濃度為橫坐標(biāo)，以定量離子對(duì)m/z399.2/114.2的峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y=1915.6x+4190，R2=0.9996，表明福爾可定在0.05～500ng/mL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

在空白止咳糖漿中加入系列低濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，樣品經(jīng)前期處理，然后測(cè)定。以定量離子對(duì)3倍信噪比的響應(yīng)的樣品濃度為檢出限（LOD），以10倍信噪比為定量限（LOQ）。止咳糖漿中福爾可定的檢出限為0.02ng/mL，定量限為0.05ng/mL。如圖1所示。

圖1 100ng/mL福爾可定的MRM色譜圖

2.3 方法的回收率

空白止咳糖漿中添加福爾可定標(biāo)準(zhǔn)品，配制成低、中、高濃度的0.01，0.1，1mg/mL的樣品，按2.3的樣品處理方法，稀釋1000倍，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每一濃度平行6個(gè)樣品。結(jié)果0.01，0.1，1mg/mL的3個(gè)樣品的平均回收率分別為92.5%、96.2%、102.1%；RSD分別為6.8 %、5.7%、3.5%。

3 結(jié)論

綜上，本文建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)福爾可定含量的方法。使用該方法時(shí)，福爾可定在0.05～500ng/mL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，檢出限為0.02ng/mL，定量限為0.05ng/mL。在高、中、低三個(gè)添加濃度下，平均加標(biāo)回收率為92.5%～102.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為3.5%～6.8%。該方法操作簡(jiǎn)單快速、重現(xiàn)性好、線性范圍寬、靈敏度高，適用于相關(guān)案（事）件的檢驗(yàn)鑒定。

4 案例

2018年，檢查人員在包裹中發(fā)現(xiàn)用塑料袋包裝的紅色液體50包，每包5mL。經(jīng)LC-MS/MS檢驗(yàn)，該紅色液體中檢出福爾可定成分，含量為1.25mg/mL。