電針“解郁方”對(duì)抑郁癥大鼠模型血清中吲哚胺2，3 雙加氧酶、5-羥色胺、白介素10 含量的影響

呂竹青，閆麗萍，楊善銀，楊郁鵬

（山西中醫(yī)藥大學(xué)，山西晉中030619）

抑郁癥是影響人們正常學(xué)習(xí)、工作和生活的嚴(yán)重神經(jīng)精神心理性疾病，致病因素復(fù)雜多樣［1］，至今發(fā)病機(jī)制仍然不確定，可能與炎癥、單胺類缺乏、皮質(zhì)醇和促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素水平升高以及白介素10（IL-10）、淋巴細(xì)胞等細(xì)胞因子有關(guān)［2］。根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，到2020 年抑郁癥將超過大多數(shù)疾病，成為第二大致殘疾?。?］。抑郁癥每年產(chǎn)生1 萬億美元費(fèi)用（約為人民幣6 萬億），增加世界經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［4］。實(shí)驗(yàn)和臨床研究均表明電針在抑郁癥的治療上有良好的效果。本研究以慢性不可預(yù)測(cè)性應(yīng)激抑郁大鼠模型作為研究對(duì)象，觀察電針“解郁方”［百會(huì)、神門（雙側(cè)）、太沖（雙側(cè)）］對(duì)抑郁癥大鼠模型血清中吲哚胺 2，3 雙加氧酶（IDO）、5-羥色胺（5-HT）、IL-10含量的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 60 只體質(zhì)量為190～230 g 的清潔級(jí)SD 雄性大鼠，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006，給予滅菌水、經(jīng)消毒滅菌的飼料，使用無毒、無異味、無油脂、吸濕性強(qiáng)的墊料，動(dòng)物房及周圍噪聲應(yīng)低于60 dB，大鼠飼養(yǎng)密度為0.063 m2，保持室內(nèi)溫度20 ℃～26 ℃，相對(duì)濕度為40%～70%。適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 試劑與儀器 IDO、IL-10、5-HT 抗體（博士德生物實(shí)驗(yàn)試劑有限公司）；華佗牌SDZ-ⅱB 電子針療儀（蘇州市南方醫(yī)療器械有限公司）、HC-1010 高速離心機(jī)（安徽中科中佳醫(yī)療器械有限公司）、930N 熒光分光光度計(jì)（上海始恒儀器有限公司）、數(shù)顯恒溫水浴箱（常州國(guó)華有限公司）、美國(guó)酶標(biāo)儀（Bio-Rad 伯樂）（上海江萊生物科技有限公司）、XW-80A 微型漩渦混合儀（上海滬西儀器廠）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組 通過曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)將水平運(yùn)動(dòng)次數(shù)和垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)不足30 次和超過120 次的大鼠剔除后篩選出40 只清潔級(jí)SD 雄性大鼠，按照隨機(jī)數(shù)字表分為空白組、模型組、假針組、電針組4 組，每組10 只。慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激抑郁癥模型造模方法為［5］：束縛 3 h，夾尾 3 min，熱烘（45 ℃～60 ℃ 5 min），禁食、禁水各24 h，晝夜顛倒24 h，4 ℃下冰水游泳（5 min），7 種每天隨機(jī)給予1 種，每種方法使用4次，共造模28 d，再搭配上潮濕墊料。

1.2.2 干預(yù)方法 針刺選用“解郁方”［6］，參照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位圖譜》［7］取穴，選用規(guī)格為0.25 mm×25 mm 的華佗牌毫針進(jìn)行針刺，針刺得氣后連接到華佗牌SDZ-ⅱB 電子針療儀上，選用疏密波，針刺強(qiáng)度為以穴周肌肉微顫動(dòng)而大鼠不感痛苦、不嘶叫為度，設(shè)置電流小于 2 mA，20 min/次，1 次/d，針刺5 d 后休息2 d，共針刺4 個(gè)療程。假針操作方法為用雙面膠帶將皮膚與導(dǎo)管相連，針柄約2 cm 的4 cm“真實(shí)”針灸針體可從導(dǎo)管腔內(nèi)插入皮膚約0～2 cm，但實(shí)際插入深度不得超過1～2 cm（以避免非特異性效應(yīng)）［8］，干預(yù)時(shí)間同電針組?？瞻捉M正常飼養(yǎng)，模型組只抓取固定。處死前1 d，大鼠禁食不禁水，用水合氯醛麻醉后腹主靜脈采血，在常溫下靜置2 h 后離心取上清液。離心轉(zhuǎn)數(shù)設(shè)置為3000 r/min，時(shí)間為15～20 min，分離血清后用ELISA 雙抗夾心法檢測(cè) IDO、IL-10、5-HT 含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用GraphPad Prism 7 軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，用單因數(shù)方差分析（ANOVA）進(jìn)行組間比較，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

與空白組比較，模型組血清中IDO 含量顯著增加（P＜0.01），5-HT、IL-10 含量明顯下降（P＜0.01）；與模型組比較，假針組和電針組血清IDO含量均降低（P＜0.01），5-HT、IL-10 含量明顯升高（P＜0.01）；與假針組比較，電針組血清 IDO 含量下降（P＜0.01），5-HT、IL-10 含量明顯升高（P＜0.05，P＜0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表1、圖1。

表1 各組抑郁癥大鼠血清中IDO、5-HT、IL-10 含量比較 （）

表1 各組抑郁癥大鼠血清中IDO、5-HT、IL-10 含量比較 （）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01；與假針組比較，3）P＜0.01，4）P＜0.05

組別 n IDO（U/g） 5-HT（g/L） IL-10（ng/L）空白組 10 1.69±0.12 88.71±5，23 112.87±4.96模型組 10 3.91±0.561） 69.12±5.761） 72.55±3.091）假針組 10 2.79±0.482） 74.61±4.392） 102.83±8.142）電針組 10 2.12±0.322）3） 86.19±4.252）4） 107.59±5.562）3）

3 討 論

抑郁癥屬于精神心理疾病，和中醫(yī)學(xué)的郁證、百合病、臟躁、奔豚氣、梅核氣等疾病癥狀相似。臨床和實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，針刺能有效改善抑郁癥狀。侯冬芬等［9］運(yùn)用電針治療中風(fēng)后抑郁癥患者30 例，療效顯著。梁粵［10］以智三針、手三針治療中風(fēng)后抑郁癥患者53 例，總有效率達(dá)98%。楊改琴等［11］選用百會(huì)、印堂、四神聰?shù)妊ㄎ?，運(yùn)用醒腦開竅針法治療抑郁癥患者86 例，有效率達(dá)到95.3%。本實(shí)驗(yàn)采用電針“解郁方”治療抑郁癥，“解郁方”是燕平教授科研團(tuán)隊(duì)根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)研究篩選出來的治療抑郁癥的組方，臨床運(yùn)用表明針刺“解郁方”治療抑郁癥療效顯著。百會(huì)屬督脈經(jīng)穴，且位于手足三陽(yáng)經(jīng)與督脈交匯處，針刺可安神健腦，開竅醒腦；神門屬于心經(jīng)原穴，可安心神，益心氣，調(diào)情志，補(bǔ)心血；太沖為足厥陰肝經(jīng)之原穴，可舒達(dá)肝氣，解除郁結(jié)。抑郁癥多因氣機(jī)郁結(jié)于肝脈，郁而不得升發(fā)、疏泄，導(dǎo)致患者情志抑郁。電針“解郁方”腧穴疏肝解郁，則郁證自除。

圖1 抑郁癥大鼠血清中IDO、5-HT、IL-10 含量比較

炎癥是導(dǎo)致抑郁癥發(fā)生的基礎(chǔ)，當(dāng)炎癥水平升高時(shí)，抑郁癥狀加重。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)通過降低IDO含量可以有效改善炎癥，減輕抑郁癥狀［12］。臨床研究表明，抑郁量表評(píng)分的嚴(yán)重程度和IDO 活性呈正相關(guān)［13］。IDO 激活導(dǎo)致抑郁樣癥狀，而使用IDO抑制劑可以減輕小鼠的抑郁樣狀態(tài)［14］。IDO 是一種可以沿著犬尿氨酸代謝的限速酶，其代謝后產(chǎn)生下游產(chǎn)物犬尿喹啉酸、喹啉酸及3－羥基犬尿氨，這些代謝產(chǎn)物可以影響神經(jīng)元的再生和退化。IDO 的表達(dá)由腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-1、脂多糖（LPS）等促炎細(xì)胞因子誘導(dǎo)，臨床運(yùn)用促炎細(xì)胞因子抑制劑治療可使抑郁癥狀得以緩解。

在炎癥反應(yīng)中，IDO 可被炎性細(xì)胞過度激活，更多的色氨酸（Trp）被代謝分解，使Trp 的消耗增多，Trp 作為5-HT 生成的原料，Trp 的耗竭使5-HT 含量減少［15-18］。Coppen A 等［19］的 5-HT 假說認(rèn)為，當(dāng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)釋放的5-HT 含量減少時(shí)會(huì)引起大腦突觸間隙中的5-HT 含量不足而誘發(fā)抑郁癥。抑郁癥患者在治療后5-HT 含量會(huì)逐漸恢復(fù)，這也是判斷抑郁癥治療療效優(yōu)勢(shì)的依據(jù)之一。Trp 耗竭使5-HT 的含量減少屬于抑郁癥的發(fā)病機(jī)制中的經(jīng)典單胺假說，選擇性的5-HT 再攝取抑制劑已成為最關(guān)鍵的抗抑郁藥。IL-10 是一種由Th2 淋巴細(xì)胞分泌的，可以激活B 細(xì)胞介導(dǎo)體液免疫功能的抗炎細(xì)胞因子，同時(shí)也是細(xì)胞因子合成抑制因子，可以降低趨細(xì)胞因子，減輕炎癥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)IL-10 的使用顯著抑制了IFN-γ 誘導(dǎo)的 IDO 表達(dá)，從而減輕抑郁癥［20-21］。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，電針解郁方對(duì)抑郁癥大鼠模型的抑郁癥狀有治療作用，電針能夠調(diào)節(jié)抑郁癥大鼠血清中的IDO、5-HT、IL-10 含量，可能是其治療抑郁癥的機(jī)制之一。