結(jié)合全草花葉類中藥煎煮相對(duì)密度監(jiān)測(cè)模型探討中藥湯劑的質(zhì)量控制*

陳洪燕，高申蓉，閆斌，周從輝，朱田密，孫婉瑾，高歡，陳樹(shù)和，李學(xué)林，劉瑞新

(1.湖北省中醫(yī)院藥事部，武漢 430061；2.湖北省中醫(yī)藥研究院中藥研究所，武漢 430074；3.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，鄭州 450000)

中藥湯劑是我國(guó)應(yīng)用最早、最廣泛的傳統(tǒng)劑型，至今已有數(shù)千年的歷史。明代醫(yī)藥學(xué)家李時(shí)珍謂：“凡服湯藥，雖品物精專，修治如法，而煎煮鹵莽造次，水火不良，火候失度，則藥亦無(wú)功[1]?！鼻宕t(yī)家徐大椿指出：“煎藥之法，最宜深講，藥之效不效，全在乎此[2]?！笨梢?jiàn)歷代醫(yī)家對(duì)中藥煎煮方法及質(zhì)量極為重視。作為治病的最后一關(guān)，煎藥質(zhì)量極大地影響著中醫(yī)臨床療效的發(fā)揮[3]，因此，正確煎煮中藥，加強(qiáng)煎藥質(zhì)量監(jiān)控尤為重要。目前很多大型醫(yī)院采用中藥煎藥機(jī)煎煮中藥，主要依據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》(2009年版)，但影響煎藥質(zhì)量的因素較多，且中藥湯劑存在個(gè)體化差異，至今中藥湯劑的質(zhì)量控制沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致煎藥質(zhì)量難以控制，因此建立中藥湯劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)意義重大。

筆者在本實(shí)驗(yàn)參照《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版四部合劑的質(zhì)量控制項(xiàng)目，借鑒“國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 15038-2006葡萄酒、果酒通用分析方法”中采用出膏率對(duì)相對(duì)密度線性回歸關(guān)系進(jìn)行質(zhì)量控制的方法[4]，選取相對(duì)密度作為中藥湯劑質(zhì)量控制參數(shù)之一。實(shí)驗(yàn)以部分全草花葉類中藥煎煮數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，建立單味中藥湯劑相對(duì)密度對(duì)出膏率的線性回歸關(guān)系，推導(dǎo)復(fù)方湯劑相對(duì)密度對(duì)出膏率的回歸方程，建立復(fù)方湯劑相對(duì)密度預(yù)測(cè)區(qū)間數(shù)學(xué)模型，以期為中藥湯劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 AU-120L型高精度密度測(cè)定儀，杭州金邁儀器有限公司；ME204E型萬(wàn)分之一電子天平(感量：0.1 mg)，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；DHG-9146A型鼓風(fēng)干燥箱，上海習(xí)仁科學(xué)儀器有限公司；ZNHW智能恒溫電熱套，天津工興實(shí)驗(yàn)室儀器有限公司。

1.2試藥 29種全草花葉類中藥飲片，每種飲片3批，分別購(gòu)自安徽人民中藥飲片有限公司、安徽普仁中藥飲片有限公司和亳州滬譙中藥飲片有限公司， 29種中藥飲片的全部批次經(jīng)湖北省中醫(yī)院陳樹(shù)和主任藥師鑒定，均符合2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)或《安徽省中藥飲片炮制規(guī)范》標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)用水為自來(lái)水。

2 方法與結(jié)果

通過(guò)煎煮實(shí)驗(yàn)，測(cè)定29種全草花葉類中藥的煎煮吸水率、得液量、相對(duì)密度和出膏率，以出膏率對(duì)相對(duì)密度進(jìn)行線性回歸，建立全草花葉類復(fù)方中藥湯劑相對(duì)密度95%預(yù)測(cè)區(qū)間的數(shù)學(xué)模型，并選取具有代表性的7種全草花葉類中藥混合煎煮，驗(yàn)證該數(shù)學(xué)模型。

2.1單味中藥飲片煎煮吸水率、得液量、相對(duì)密度、出膏率的測(cè)定

2.1.1單味飲片煎煮吸水率的測(cè)定 選取臨床使用頻次高的魚(yú)腥草、廣藿香等19種全草類、菊花等6種花類以及桑葉等4種葉類中藥，共29種87批次飲片進(jìn)行研究。稱取單味飲片50 g，置1 000 mL圓底燒瓶，一煎加水量為飲片重量的12倍，二煎加水量為飲片重量的10倍，浸泡30 min，在智能恒溫電熱套中進(jìn)行回流煎煮。一般飲片一煎30 min，二煎20 min；滋補(bǔ)類藥一煎60 min，二煎40 min；后下藥如薄荷、青蒿等一煎5 min，二煎20 min，后下藥如番瀉葉、魚(yú)腥草等一煎10 min，二煎20 min[5-6]；旋覆花、蒲黃、蜜枇杷葉等裝入無(wú)紡布袋，密閉包煎[7]。濾過(guò)后測(cè)定濾液體積，分別計(jì)算一煎吸水率和二煎吸水率。飲片煎煮吸水率計(jì)算公式：煎煮吸水率(%)=(加水量-濾液體積)/飲片重量×100%(公式1)。

2.1.2單味飲片煎煮得液量、相對(duì)密度、出膏率的測(cè)定 稱取單味飲片50 g，以中藥湯劑每日服用500 mL(分兩次服用，每次250 mL)計(jì)算，要求一煎得液量和二煎得液量均為250 mL，兩煎分別按“2.1.1”項(xiàng)吸水率補(bǔ)加吸水量，即：加水量=吸水率×飲片重量+250 mL(公式2)，煎煮，過(guò)濾，合并2次煎液，在(80±1)℃測(cè)定藥液體積和相對(duì)密度。并在(80±1)℃精密量取藥液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿，水浴蒸干，置烘箱中105 ℃干燥3 h，移至干燥器，室溫放置30 min，精密稱定，計(jì)算飲片出膏率。飲片出膏率計(jì)算公式：出膏率(%)=干膏重/飲片重量×100%(公式3)。

表1 29種全草花葉類中藥煎煮主要參數(shù)的測(cè)定結(jié)果

序號(hào)飲片名稱一煎吸水率二煎吸水率%得液量/mL校正的相對(duì)密度出膏率/%1紫蘇梗①283.8±104.290.6±54.9 519±61.002 0±0.001 15.2±1.02荊芥炭325.3±34.538.0±12.2 512±61.003 4±0.001 39.8±2.43廣藿香205.9±23.666.6±7.5 499±71.004 3±0.000 710.6±0.84香薷249.9±28.169.3±8.3 518±81.004 6±0.000 211.1±1.05石斛①414.6±11.4244.2±9.8 520±171.003 4±0.003 811.5±0.76荊芥303.9±19.694.6±8.1 506±41.004 7±0.000 912.0±1.37矮地茶188.0±26.536.7±4.2 517±31.005 0±0.000 312.4±0.88荊芥穗391.3±43.098.0±38.6 514±21.005 4±0.001 113.5±2.69青蒿227.2±30.358.0±14.4 506±11.003 8±0.001 114.3±2.110木賊353.9±46.329.3±3.1 515±51.003 5±0.001 114.5±1.311麻黃223.8±19.128.6±6.1 513±41.005 4±0.000 915.5±1.312浮萍550.1±28.9194.5±18.0 492±31.003 6±0.001 116.6±1.613魚(yú)腥草412.2±18.574.8±7.4 497±41.004 7±0.000 617.0±0.914絞股藍(lán)①309.0±56.066.6±18.1 532±101.008 0±0.000 418.0±1.315旋覆花488.1±33.742.6±12.1 521±51.007 5±0.000 618.5±1.216佩蘭244.6±16.949.3±9.8 514±31.007 7±0.001 818.9±3.317墨旱蓮400.1±34.786.0±3.1 506±111.005 4±0.001 819.3±4.718薄荷318.5±16.980.0±17.8 507±31.008 0±0.000 819.4±1.019紫蘇葉339.8±37.955.7±7.0 499±131.006 7±0.001 119.8±1.120桑葉326.4±11.443.3±4.4 509±41.005 9±0.002 521.7±3.921蜜麻黃①206.4±3.247.3±26.9 518±141.005 2±0.001 122.2±2.122葛花451.7±53.448.6±18.5 497±61.008 1±0.001 325.0±1.723蜜旋覆花414.8±40.381.9±10.0 519±21.009 0±0.001 828.7±5.524羅布麻葉288.5±10.134.7±6.1 510±101.011 1±0.000 429.1±1.225番瀉葉269.2±5.026.7±13.3 496±61.011 8±0.000 433.1±0.826鎖陽(yáng)197.2±5.262.6±9.5 511±11.011 5±0.001 534.2±4.227款冬花①377.8±23.752.4±28.7 522±111.012 5±0.000 241.7±1.128蜜款冬花308.5±9.841.3±4.2 514±31.017 4±0.002 249.2±4.829酒蓯蓉193.0±3.256.6±20.7 513±21.017 5±0.001 253.3±5.8

①為得液量誤差在5%～10%之間的品種。

①The variety of liquid output error range is between 5% and 10%.

結(jié)果表明，87批次全草花葉類中藥，有80批次飲片(約占92%)得液量的RSD<5%，僅有1批紫蘇梗、2批石斛、2批絞股藍(lán)、1批蜜麻黃、1批款冬花共7批飲片得液量RSD在5%～10%，說(shuō)明29種全草花葉類中藥吸水率具有重復(fù)性和參考價(jià)值。

2.2預(yù)測(cè)相對(duì)密度區(qū)間范圍數(shù)學(xué)模型的建立

2.2.1校正的相對(duì)密度與出膏率的線性回歸方程的建立 按最小二乘法求表1中校正的相對(duì)密度(Y)對(duì)出膏率(X，%)的線性回歸方程為：Y=0.000 3X+1.000 2(方程1)，相關(guān)系數(shù)r=0.959 3，線性范圍5.2%～53.3%。

2.2.2線性回歸方程的假設(shè)檢驗(yàn) 為檢驗(yàn)方程1是否對(duì)總體的線性回歸方程存在回歸系數(shù)β≠0的可能，需要對(duì)線性回歸方程進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)，采用SPSS 20版統(tǒng)計(jì)軟件(IBM SPSS statistics 20)對(duì)校正的相對(duì)密度進(jìn)行方差分析，分析結(jié)果見(jiàn)表2。查臨界值表v1=1，v2=27，得P<0.01，按α=0.05水準(zhǔn)，接受回歸系數(shù)β≠0，認(rèn)為校正的相對(duì)密度與出膏率之間有線性關(guān)系，且線性關(guān)系顯著，總體線性回歸方程成立。

表2 線性回歸方程回歸系數(shù)方差分析結(jié)果

Tab.2 Results of variance analysis from regression coefficient of linear regression equation

模型平方和df均方FSig.回歸0.000 4110.000 41315.263 760.000 00殘差0.000 3270.000 00總計(jì)0.000 4428

2.2.3全草花葉類復(fù)方湯劑相對(duì)密度預(yù)測(cè)區(qū)間數(shù)學(xué)模型的建立 結(jié)合方程1單味全草花葉類中藥煎煮相對(duì)密度與出膏率的線性回歸方程，推測(cè)該方程也適合全草花葉類復(fù)方中藥煎煮相對(duì)密度與出膏率的關(guān)系，即全草花葉類中藥復(fù)方湯劑的相對(duì)密度為：Y復(fù)方=0.000 3X復(fù)方+1.000 2(方程2)，Y復(fù)方為復(fù)方相對(duì)密度，X復(fù)方為復(fù)方出膏率，即每種飲片出膏重量之和除以飲片總?cè)恿?，?jì)算方程為：

2.3數(shù)學(xué)模型的驗(yàn)證

2.3.1單味全草花葉類中藥煎煮相對(duì)密度數(shù)學(xué)模型的驗(yàn)證 以實(shí)驗(yàn)“2.1.2”測(cè)定的29種全草花葉類中藥煎煮校正的相對(duì)密度與平均出膏率，代入數(shù)學(xué)模型中進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證結(jié)果表明，在29種飲片共87批次校正相對(duì)密度數(shù)據(jù)中，76批次(占總批次的87.4%)的校正相對(duì)密度均在數(shù)學(xué)模型預(yù)測(cè)的范圍之內(nèi)，余下2批石斛、1批荊芥穗、1批浮萍、1批絞股藍(lán)、1批佩蘭、1批墨旱蓮、1批薄荷、1批桑葉、1批蜜麻黃、1批蜜款冬花共11批次校正的相對(duì)密度不在數(shù)學(xué)模型的95%預(yù)測(cè)區(qū)間范圍內(nèi)，表明數(shù)學(xué)模型適用于單味全草花葉類中藥煎煮相對(duì)密度95%的預(yù)測(cè)區(qū)間。

2.3.2全草花葉類復(fù)方中藥煎煮相對(duì)密度數(shù)學(xué)模型的驗(yàn)證 根據(jù)藥用部位、使用頻次及功效，從表1中選取紫蘇梗、廣藿香、荊芥、麻黃、旋覆花、桑葉、款冬花共7種全草花葉類中藥飲片組成復(fù)方，取1倍處方量，進(jìn)行全草花葉類中藥復(fù)方煎煮相對(duì)密度預(yù)測(cè)的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。7種飲片的取樣量為《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部用量的中間值，如紫蘇梗的《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部用量為5～10 g，實(shí)驗(yàn)中選取7.5 g。復(fù)方的加水量為各藥吸水量之和再加上得液量250 mL，具體根據(jù)表1計(jì)算，煎煮的時(shí)間以及方法同“2.1.2”項(xiàng)。分別選擇不同批號(hào)3組飲片，每組進(jìn)行3次平行實(shí)驗(yàn)。

根據(jù)表1中每種中藥的平均出膏率，利用方程3計(jì)算7種全草花葉類中藥出膏率的理論值，X復(fù)方=18.1%，利用數(shù)學(xué)模型計(jì)算其相對(duì)密度95%的預(yù)測(cè)區(qū)間，為1.003 4～1.007 8，7種全草花葉類復(fù)方煎煮的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在α=0.05水平下，對(duì)得液量、出膏率的理論值與驗(yàn)證值進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果出膏率的理論值與第2組、第3組的驗(yàn)證值均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與第1組的驗(yàn)證值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；3組出膏率驗(yàn)證值之間，第1組與第3組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，第1組與第2組、第2組與第3組均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3組校正后的相對(duì)密度均在數(shù)學(xué)模型的95%預(yù)測(cè)范圍內(nèi)，表明該數(shù)學(xué)模型適用于全草花葉類復(fù)方中藥煎煮相對(duì)密度95%預(yù)測(cè)區(qū)間，且相對(duì)密度的監(jiān)測(cè)可用于中藥湯劑的質(zhì)量控制。

3 討論

筆者在本實(shí)驗(yàn)依照傳統(tǒng)煎藥方法、《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部及《醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》，確定加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)、特殊煎煮方法等影響中藥湯劑質(zhì)量的主要因素[9-10 ]。如煎煮次數(shù)按照傳統(tǒng)煎藥方法煎煮2次，煎煮時(shí)間、加水量依據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》確定，并依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部及《醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》規(guī)定，結(jié)合文獻(xiàn)[5-7]，確定后下藥及后下時(shí)間、包煎藥等需要特殊煎煮方法的飲片，并按相應(yīng)的特殊方法進(jìn)行煎煮實(shí)驗(yàn)。

表3 全草花葉類復(fù)方湯劑煎煮驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果比較組別得液量/mL出膏率/%相對(duì)密度區(qū)間預(yù)測(cè)實(shí)際相對(duì)密度校正的相對(duì)密度理論值-500 18.11.003 4～1.007 8--驗(yàn)證值1485±5 17.2±0.2①②1.007 41.007 11.006 01.005 81.006 51.006 42501±14 18.1±0.61.004 11.004 21.003 81.003 81.003 91.003 83502±18 18.1±0.3②-1.004 21.004 11.003 81.003 71.004 51.004 7

①與出膏率理論值比較，t理，組1=-9.000，P<0.05；②組間比較，t組1，組3=-5.029，P<0.05。

①Compared with the theoretical value of extraction rate,ttheoretical value, group 1=-9.000，P<0.05；②Comparison between groups,tgroup 1, group 3=-5.029，P<0.05.

全草花葉類單味中藥飲片煎煮相對(duì)密度數(shù)學(xué)模型驗(yàn)證結(jié)果顯示，石斛等10個(gè)品種共11批次校正的相對(duì)密度不在數(shù)學(xué)模型的95%預(yù)測(cè)區(qū)間范圍內(nèi)。分析原因，荊芥穗、佩蘭、桑葉、墨旱蓮可能與3批之間出膏率的RSD偏大有關(guān)；石斛、蜜麻黃和絞股藍(lán)的得液量RSD較大，在5%～10%之間，可能有一定影響；浮萍、蜜款冬花可能存在樣品均一性不好的問(wèn)題，如蜜款冬花部分帶果梗，且為蜜炙品；薄荷含有揮發(fā)性成分，對(duì)相對(duì)密度會(huì)有一定影響。全草花葉類復(fù)方中藥煎煮相對(duì)密度數(shù)學(xué)模型的驗(yàn)證結(jié)果中，在α=0.05水平下，第2組、第3組得液量驗(yàn)證值與理論值比較均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，第1組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但差異在5%以內(nèi)，與戴麗莉等[11]研究結(jié)論基本一致。顯示相對(duì)密度預(yù)測(cè)數(shù)學(xué)模型的驗(yàn)證結(jié)果良好，該模型可用于中藥湯劑的質(zhì)量控制。

當(dāng)前，雖然有將中藥經(jīng)典方湯劑制成顆粒劑、片劑、合劑等不同劑型的嘗試[12]，但中藥湯劑在中醫(yī)辨證論治理論的指導(dǎo)下，可臨證加減，有其明顯的中醫(yī)特色優(yōu)勢(shì)，在臨床上仍被廣泛應(yīng)用。隨著社會(huì)的快速發(fā)展，傳統(tǒng)人工煎藥在效率上存在一定劣勢(shì)。本研究在遵循傳統(tǒng)煎藥方法的基礎(chǔ)上，通過(guò)監(jiān)測(cè)中藥煎煮的相對(duì)密度以控制中藥湯劑的質(zhì)量，并結(jié)合現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，開(kāi)發(fā)智能化中藥煎煮設(shè)備，以期達(dá)到傳統(tǒng)煎藥在監(jiān)控質(zhì)量的前提下實(shí)現(xiàn)智能化、現(xiàn)代化的目的。