荊條蜜炮制前后黃酮類化合物含量及其抗氧化活性研究

重慶師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 鄧先麗 王林玲

蜂蜜是蜜蜂采集植物花蜜、分泌物或昆蟲的排泄物，經(jīng)過一定的反應(yīng)后在蜂巢中精制和成熟的物質(zhì)，富含黃酮類和酚酸化合物[1-2]。根據(jù)蜜源組成，蜂蜜可分為單花蜜和混合蜜。單花蜜以蜜源植物名稱命名，荊條蜜就是其中之一，是我國(guó)的四大名蜜之一，其液態(tài)呈淺琥珀色，結(jié)晶呈乳白色，含有大量的還原糖、礦物質(zhì)元素[4]。豐富的物質(zhì)組成，為其生物學(xué)活性提供理論依據(jù)。荊條蜜具有抗氧化活性和延緩衰老的功效[3]。具有保肝作用，且功能發(fā)揮與酚類物質(zhì)相關(guān)[4]。曹煒等人的研究表明，荊條蜜中酚酸類物質(zhì)在一定濃度與其抗氧化活性呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系[5]。荊條蜜的生物學(xué)活性，為其藥理價(jià)值奠定了基礎(chǔ)。蜂蜜經(jīng)過炮制后，可作為中藥輔料。但是對(duì)荊條蜜經(jīng)炮制后的物質(zhì)變化以及抗氧化活性變化鮮有研究。本研究對(duì)荊條蜜進(jìn)行高溫?zé)捴?，檢測(cè)了其總黃酮含量及抗氧化活性，為荊條蜜的藥用研究提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 樣品處理

根據(jù)Ota等人的方法，做部分修改[6,7]。稱取新鮮荊條蜜10 g，在 80℃、120℃、150℃、180℃條件下，分別加熱 10 min、30 min、60 min。樣品制備：（1）分別精確稱取2 g處理后的樣品，10 ml蒸餾水充分溶解后備用。（2）精確稱取2 g高溫處理的樣品，10 ml ph=2的鹽酸水溶液混合均勻，3000 r/min離心5 min。與等體積XAD-2大孔樹脂混合，過柱，按甲醇與樹脂體積比1∶2洗脫，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 樣品總黃酮測(cè)定[4]

稱取蘆丁標(biāo)品4 mg，充分溶解于10 mL甲醇，制成0.4 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液。按照比例用50%甲醇將蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液稀釋至0.07、0.13、0.2、0.27、0.33 mg/ml。取稀釋液 0.072 mL 至 96 孔板，加入0.012 mL5%亞硝酸鈉，混勻，靜置10 min。加入0.012 mL硝酸鋁，混勻，靜置10 min。再加入0.012 mL4.5%氫氧化鈉溶液，以50%甲醇溶液定容至0.3mL，充分混勻，靜置10 min后在510 nm處測(cè)定吸光值，求得標(biāo)準(zhǔn)曲線和吸光值：y=12.33x-0.0077，R2=0.9977。測(cè)定上述兩種處理樣品的吸光值，計(jì)算出樣品中的總黃酮含量。

1.3 DPPH抗氧化[8]

吸取0.1 mL上述兩種處理過的蜂蜜樣品至96孔板，加入配置好的DPPH甲醇溶液0.2mL，避光1 h，于519 nm處測(cè)定吸光度；未加入樣品的DPPH甲醇溶液為空白組。DPPH自由基清除率公式：清除率（%）=（（A0-A1）/A0x100%）式中：A1為樣品管吸光值，A0為空白組吸光值。

1.4 數(shù)據(jù)處理

結(jié)果表示為三個(gè)平行測(cè)量的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）。統(tǒng)計(jì)分析用軟件SPSS16.0單因素反差分析樣品間的顯著性。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品總黃酮測(cè)定結(jié)果

荊條蜜經(jīng)高溫炮制處理后，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出總黃酮含量發(fā)生顯著性變化。處理蜂蜜經(jīng)150℃、30 min和60 min，180℃處理后，總黃酮含量顯著增加，相較于未經(jīng)處理的蜂蜜而言，增加了247倍[9]。研究表明荊條蜜中的總黃酮含量為19～39毫克蘆丁每千克，本研究測(cè)得含量較之偏低，但經(jīng)炮制后含量明顯偏高。蜂蜜醇提取物總黃酮含量與處理蜂蜜基本一致，相對(duì)于未處理蜂蜜醇提取而言增加了39倍，并且在120℃、30 min處理后含量也顯著增加，見表1。蜂蜜炮制溫度和時(shí)間對(duì)其總黃酮化合物含量具有顯著影響。

2.2 對(duì)DPPH自由基清除作用

處理蜂蜜和其醇提取物對(duì)DPPH自由基的清除作用均在不同程度有所增加。處理蜂蜜的半抑制濃度隨處理溫度和時(shí)間的增加而減小，在150℃、30min處理達(dá)到IC50最低值0.03 g，其中未經(jīng)處理蜂蜜的IC50為0.21g。醇提取物在180℃、10min處理后IC50最低值與處理蜂蜜相同，見表1。李菁研究蜂蜜加工抗氧化活性變化，發(fā)現(xiàn)抗氧化活性增強(qiáng)，本研究與之結(jié)果一致[10]。因此，經(jīng)炮制處理后的蜂蜜及其醇提取物在一定程度上增加了DPPH自由基清除作用。

3 結(jié)論

蜂蜜炮制會(huì)改變其理化性值。本文采用高溫炮制荊條蜜，酶標(biāo)儀檢測(cè)總黃酮含量和DPPH自由基清除作用。結(jié)果表明在150℃、30 min和60 min，180℃處理后，蜂蜜和醇提取物的總黃酮含量顯著性增加，分別增加了247倍、39倍。DPPH自由基清除活性隨著處理溫度和時(shí)間的增加而增加，蜂蜜和醇提取物IC50最小值均為0.03 g。荊條蜜經(jīng)炮制后總黃酮含量顯著性增加，DPPH自由基清除活性增強(qiáng)，高溫炮制蜂蜜對(duì)其藥理作用具有積極的影響。

表1 處理蜂蜜和醇提取物總黃酮含量及抗氧化活性