芒果果肉中總黃酮及芒果苷含量的測(cè)定

劉常凱 楊黎 何林飛

摘要：建立芒果（Mangifera indicaL）果肉中總黃酮及芒果苷含量的測(cè)定方法，采用紫外一分光光度計(jì)法測(cè)定總黃酮;采用高效液相色譜法測(cè)定芒果苷。結(jié)果表明，總黃酮在17-520 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系（R2=0.999 9），平均回收率為99.03%，RSD為1.42%（n=6）;芒果苷在4.0-80.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系（R=0.999 9），平均回收率為101.59%，RSD為1.87%（ n=6）。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性良好，可用于芒果果肉中總黃酮及芒果苷的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：總黃酮;芒果苷;紫外一分光光度計(jì);液相色譜法

中圖分類號(hào)：S667.7

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（ 2020）08-0138-03

D01：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.08.031

芒果（Mangifera indicaL-）是著名的熱帶水果，俗稱“熱帶水果之王”。隨著中國(guó)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展越來(lái)越迅猛，芒果的總產(chǎn)量已經(jīng)躍居世界第二[1]。芒果果肉中總黃酮以及芒果苷等可用于功能性和生物活性化合物的含量豐富[2，3]，總黃酮屬于黃酮類化合物，具有抗炎、抗病毒、抗衰老等作用;而芒果苷是一種天然的清除自由基的抗氧化劑，也是一種天然的輻射保護(hù)劑。相關(guān)研究表明，芒果苷具有抗菌抗炎和抗菌抗病毒等作用[4，5]以及調(diào)節(jié)免疫等功效[6]。目前，檢測(cè)總黃酮含量采用的是紫外分光光度計(jì)法。研究表明，高效液相色譜法（HPLC）具有高壓、高速、高靈敏度、載液流速快、分析速度快和應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)[7]，檢測(cè)芒果苷含量采用的是液相色譜法，但大部分研究是針對(duì)芒果的屬性部分。因此，本研究采用紫外一分光光度計(jì)和液相色譜法分別對(duì)桂七芒果果肉中的總黃酮以及芒果苷含量進(jìn)行了檢測(cè)，為桂七芒果的進(jìn)一步研究開發(fā)及藥用價(jià)值提供試驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)材料將百色地區(qū)生長(zhǎng)成熟的桂七芒果分別按表1中不同時(shí)間進(jìn)行采摘去皮、去核，取出芒果果肉，均質(zhì)混合均勻。

1.1.2 儀器與試劑 紫外可見分光光度計(jì)UV-2700，日本島津公司;電子天平ML204，瑞士梅特勒一托利多公司;高效液相色譜儀（液相色譜儀）Wa-ters 2695-2998，美國(guó)Waters公司。蘆?。号?hào)201409，中國(guó)食品藥品檢定研究院，含量91.9%;芒果苷：批號(hào)111607-201704，中國(guó)食品藥品檢定研究院，含量98.1%;甲醇（色譜級(jí)）、乙腈（色譜級(jí)）、乙酸乙酯（色譜級(jí)）廠家均為默克股份兩合公司;三氯化鋁（分析純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;冰醋酸（分析純），廣東光華科技股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 總黃酮含量的測(cè)定

1）標(biāo)準(zhǔn)線性的制備。參考文獻(xiàn)[8，9]，稱取12.60mg蘆丁對(duì)照品置于10mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為1.157 9mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，已按91.9%計(jì)算，再精密量取1.50mL至10 mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，制得到濃度為173.685 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，吸取0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別置于10mL的具塞比色管中，加入2.0 mL三氯化鋁溶液（ 2.5 g/100mL）混勻，標(biāo)準(zhǔn)管加水定容，靜置，在30 min內(nèi)用1 cm比色皿，以零管調(diào)零，于波長(zhǎng)415 nm處測(cè)定吸光度，以試劑空白作為參照。

2）樣品處理。稱取5 g經(jīng)過(guò)均質(zhì)的芒果樣品，10 000 r/min離心10 min，后取上清液備用。吸取上述溶液1.0 mL于10 mL的具塞比色管中，分別加入2.0 mL三氯化鋁溶液（2.5 g/100mL）混勻，靜置，在30 min內(nèi)用1 cm比色皿，以零管調(diào)零，于波長(zhǎng)415nm處測(cè)定吸光度。

3）最大吸收波長(zhǎng)的確定。精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作液1.0 mL置于10 mL容量瓶中，加入甲醇溶液稀釋至刻度，以試劑空白作為參照，利用紫外可見分光光度計(jì)在波長(zhǎng)350-500 nm進(jìn)行掃描，蘆丁對(duì)照品在415 nm吸收度最大。

1.2.2 芒果苷含量的測(cè)定

1）色譜條件。C18柱（ IntertSustain，4.6mm×250mm，5μm），柱溫30℃，流速1.0 mUmin，進(jìn)樣體積10.0 μL，檢測(cè)器紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。流動(dòng)相：（A）乙腈，（B）質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.3%乙酸溶液，采用的梯度洗脫程序：0-5 min，20%A;5.01-10.00 min，90%（ A）; 10.01-15.00min， 10%A;15.01-25.00min，20% A.

2）芒果苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備。稱取芒果苷標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg，置于25 mL容量瓶中，用30%乙腈溶液定容、搖勻，制成400.00 μg/mL芒果苷標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。

3）樣品前處理。稱取均質(zhì)過(guò)芒果樣品2.50 9，加入1mL 6 mol/L的HCI溶液，搗碎，加入20 mL蒸餾水，加20mL的乙酸乙酯，萃取2次，渦旋5 min后離心，分離出酯相和水相，將酯相合并，40℃旋蒸至于，再用5mL 30%乙腈溶液定容。

4）測(cè)定。在最佳測(cè)定條件進(jìn)行HPLC分析，進(jìn)樣量為20 μL，根據(jù)測(cè)得各組分保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)比，對(duì)芒果苷進(jìn)行定性分析，依據(jù)峰面積，利用標(biāo)準(zhǔn)品回歸方程計(jì)算樣品濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 總黃酮含量的測(cè)定結(jié)果

2.1.1 線性關(guān)系結(jié)果以吸光度為縱坐標(biāo)，蘆丁對(duì)照品的質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為y=0.002 847x+0.013 50，r=0.999 9（n=6），表明蘆丁在質(zhì)量濃度17-520 μg/mL，呈良好的線性關(guān)系。

2.1.2 精密度精密量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作液1.0 mL置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，顯色后連續(xù)測(cè)定6次，測(cè)定濃度平均值為17.16 μg/mL，RSD為0.51%，表明精密度良好。

2.1.3 重復(fù)性稱取6份同一批次樣品5 9，經(jīng)處理后吸取上述樣品1.0 mL于50 mL的具塞比色管中，顯色后分別測(cè)定RSD為1.14%，表明重復(fù)性良好。

2.1.4 回收率試驗(yàn)稱取已知總黃酮含量（57.18mg/kg）的6份芒果果肉樣品5 9，分別按高低添加濃度加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液制備供試品試液，吸取上述1.0mL于10mL的具塞比色管中，顯色后進(jìn)行測(cè)定，平均回收率為99.03%，RSD為1.42%，表明該方法回收率較高（表2）。

2.1.5 實(shí)際樣品測(cè)定吸取供試品溶液1.0mL于50mL的具塞比色管中，顯色后進(jìn)行測(cè)定，所得吸光度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算樣品中總黃酮含量，其結(jié)果見表3。

2.2 芒果苷分量的測(cè)定結(jié)果

2.2.1 線性關(guān)系的考察精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0.1、0.25、0.5、1.0、2.0mL，分別置于10mL容量瓶中，加30%乙腈溶液定容，即得4、10、20、40、80 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為y=9.428 x10³x-5.055 1x10³，R2=0.999 9（n=5），表明芒果苷在質(zhì)量濃度4.0-80.0 μg/mL與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.2 精密度試驗(yàn)精密吸取濃度為20 μg/mL中間濃度的芒果苷溶液，按上述最佳色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次（n=6），RSD為0.66%，表明精密度良好。

2.2.3 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次樣品共6份，制備2份供試品溶液，按上述最佳色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，RSD為1.22%，表明重復(fù)性良好。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別在0、2、6、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，RSD為0.54%，表明芒果供試品溶液在24 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.2.5 回收率試驗(yàn) 稱取6份已知芒果苷含量（ 2.395 mg/kg）的芒果果肉樣品5 g，分別添加高濃度（40 μg/mL）和低濃度（10 μg/mL）芒果苷標(biāo)準(zhǔn)溶液制備供試品試液（表4）。結(jié)果表明，平均回收率為101.59%，RSD為1.87%，該方法回收率較好。

2.2.6 實(shí)際樣品測(cè)定分別稱取5 9樣品，制備2份供試品溶液，進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)，結(jié)果見表5。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)建立了紫外一分光光度計(jì)比色法檢測(cè)總黃酮含量及高效液相色譜法測(cè)定芒果苷含量，經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證，檢測(cè)方法結(jié)果可靠，準(zhǔn)確性高，精密度和重復(fù)性良好，對(duì)廣西百色地區(qū)桂七芒果中總黃酮和芒果苷檢測(cè)具有一定參考意義“叫。

參考文獻(xiàn)：

[1]李日旺，黃國(guó)弟，蘇美花，等.我國(guó)芒果產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀與發(fā)展策略[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013，44（5）：875-878.

[2] LOPEZ-COBO A，VERARDO V. DIAZ-DE-CERIO E，et al.Useof HPLC-and GC-QTOF to determine hydrophilicand lipophilicphenols in mango fruit（Mangzfera indicaL.）and its hy-products[Jl. Food research international， 2017. 100（3）：423-434

[3] ASIF A， FAROOQ U，AKRAM K， et al.Therapeutic potentials ofbioactive compounds from mango fruit wastes[J].Trends in food sci-ence& technology， 2016.53： 102-112.

[4]劉穎，郭明嘩，白根本.綠原酸的研究進(jìn)展[J].中藥材，2012，35（7）：1180-1185.

[5]楊海光，方蓮花，杜冠華.芒果苷的藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2016（1）：5-8

[6]陳娟，胡剛，張宇，等，四氮雜大環(huán)鎳配合物催化的BR振蕩體系的新應(yīng)用：檢測(cè)咖啡酸[J].阜陽(yáng)師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，33（1）：31-36.

[7]李曉波，屠鵬飛，中藥材指紋體系[J].中草藥，2003，34（5）：385-387.

[8]王小明，陳碧，鐘翠娟，等.均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)化甜茶葉中總黃酮提取工藝[J].食品研究與開發(fā)，2018，39（ 24）：55-62

[9]牛麗亞，劉宛玲，肖建輝，等.黑曲霉發(fā)酵法提取麥胚黃酮工藝的研究[J].食品工業(yè)，2015，36（11）：1-3.

[10]李開通，張藝軒，曹陽(yáng)，等HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地和品種石韋中綠原酸和芒果苷的含量[J].中國(guó)中藥雜志，2010，36（2）：104-107

作者簡(jiǎn)介：劉常凱（1986-），女，廣西博白人，主管藥師，主要從事食品藥品質(zhì)量與安全研究工作，（電話）15296388369（電子信箱）373719196@qq.com;通信作者，何林飛，主管藥師，主要從事食品藥品質(zhì)量與安全研究工作，（電子信箱）2960215496@qq.com。