人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及超聲造影成像

胡 蓉，買(mǎi)迪努爾·阿不來(lái)提，馮文霞

（新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)超聲科 新疆 烏魯木齊 830054）

成功建立卵巢癌動(dòng)物模型，是進(jìn)一步研究卵巢癌的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及靶向治療的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本研究采用人卵巢癌SKOV3 懸浮細(xì)胞液皮下注射接種法構(gòu)建裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型，并用超聲造影動(dòng)態(tài)觀察不同生長(zhǎng)期內(nèi)裸鼠皮下成瘤情況[1]。

1 材料與方法

我院2018年12月購(gòu)買(mǎi)6 ～8 周齡雌性裸鼠55 只，5 只用于耗損，重量18 ～22g；取人上皮性卵巢癌細(xì)胞株SKOV3 培養(yǎng)、傳代，將生長(zhǎng)活躍、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，調(diào)整濃度至 5×107個(gè)/ml，逐一于裸鼠右下肢背部經(jīng)皮下接種細(xì)胞混懸液0.2ml，觀察動(dòng)物一般情況，依次在移植后的第10 天、第20 天、第30 天、第40 天、第50 天，隨機(jī)抽取10 只裸鼠進(jìn)行超聲造影檢查；使用百勝M(fèi)yLab90 彩色超聲儀，探頭頻率9 ～12MHz，二維超聲了解移植瘤的大小、形態(tài)、血流及內(nèi)部回聲情況，于最佳切面，超聲儀調(diào)至對(duì)比脈沖序列造影模式，每只裸鼠由尾靜脈注入0.2ml 聲諾維混懸液，進(jìn)一步觀察瘤體造影劑灌注情況。所有在體研究結(jié)束后處死動(dòng)物，解剖瘤體、HE 染色行瘤體切片病理檢查。

2 結(jié)果

2.1 人卵巢癌移植瘤模型一般情況

2 只造模失敗，余造模成功。瘤體體積隨時(shí)間逐漸增大，10 天組裸鼠背部接種點(diǎn)表皮可見(jiàn)米粒樣瘤體凸起；移植瘤生長(zhǎng)至20 ～30 天，于接種點(diǎn)皮下已明顯可見(jiàn)瘤體，表面未見(jiàn)任何破潰，40 ～50 天組部分瘤體出現(xiàn)壞死，呈紅色或黑色結(jié)痂，其中50 天組部分表面破潰嚴(yán)重，裸鼠惡病質(zhì)表現(xiàn)，體重明顯下降。

2.2 移植瘤超聲造影成像

二維超聲測(cè)量移植瘤在體瘤體平均直徑見(jiàn)表1。瘤體呈類(lèi)圓形或菜花樣外凸的低回聲區(qū)，回聲不均勻，其內(nèi)可見(jiàn)無(wú)回聲區(qū)分布，彩色多普勒超聲顯示瘤體周邊及內(nèi)部可見(jiàn)點(diǎn)條狀血流信號(hào)分布；超聲造影：造影劑從瘤體中央向周邊呈樹(shù)枝狀快速?gòu)?qiáng)化，呈不均勻強(qiáng)化，無(wú)回聲區(qū)內(nèi)未見(jiàn)造影劑灌注。

表 不同時(shí)間組瘤體生長(zhǎng)直徑（±s，cm）

表 不同時(shí)間組瘤體生長(zhǎng)直徑（±s，cm）

時(shí)間 10 天組 20 天組 30 天組 40 天組 50 天組 P瘤體平均直徑（cm） 0.27±0.08 0.92±0.23 1.4±0.45 1.6±0.66 2.3±1.9 ＜0.05

2.3 解剖后，部分移植瘤與周邊組織粘連，剝離較困難。瘤體剖面呈魚(yú)肉狀，色灰白。50 天組部分瘤體中央?yún)^(qū)域壞死液，部分侵入裸鼠大腿肌肉深部，并可見(jiàn)胸腹水生成。HE 染色后光學(xué)顯微鏡觀察腫瘤細(xì)胞豐富，排列密集，細(xì)胞異型性明顯，畸形核和核分裂相多見(jiàn)，核大深染，細(xì)胞核質(zhì)比例明顯增大。細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)大量空泡，少數(shù)細(xì)胞核固縮，裂解，偶見(jiàn)凋亡細(xì)胞。腫瘤組織內(nèi)有較多壞死組織和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

3 討論

卵巢癌動(dòng)物模型保瘤了卵巢癌本身的生長(zhǎng)特性，是臨床上用于研究人卵巢癌生物學(xué)特征、治療評(píng)價(jià)、尋找靶點(diǎn)的重要實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本研究中有2 只裸鼠移植失敗，可能是因?yàn)榻臃N的太深，或是由于腫瘤細(xì)胞沒(méi)有及時(shí)接種出現(xiàn)細(xì)胞分布不均所致。建立理想的卵巢癌研究模型，將有助于對(duì)卵巢癌生物學(xué)行為的研究，獲得更可靠的卵巢癌診斷和治療的實(shí)驗(yàn)研究數(shù)據(jù)[2-3]。目前，卵巢癌模型有體外卵巢癌研究模型，該方法獲得的模型時(shí)間有限，不利于長(zhǎng)時(shí)間研究；另外在體動(dòng)物模型的制備主要包括誘發(fā)性腫瘤模型和移植性腫瘤模型，后者包括皮下注射法、腹腔注射法和原位移植瘤模型[4-5]。

本研究采用了皮下注射接種法，同時(shí)運(yùn)用超聲造影監(jiān)測(cè)模型，可以在體實(shí)時(shí)探查腫瘤的生長(zhǎng)情況，包括腫瘤的大小、內(nèi)部血供、壞死情況，并且與病理結(jié)果保持一致。該方法操作簡(jiǎn)便，動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，為后續(xù)的卵巢癌的在體研究提供了可靠的實(shí)驗(yàn)工具。