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      鐵過載對再生障礙性貧血患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響

      2020-06-24 01:47:56俞穎朱琳超李強(qiáng)姚軼敏
      浙江醫(yī)學(xué) 2020年8期
      關(guān)鍵詞:鐵蛋白受檢者亞群

      俞穎 朱琳超 李強(qiáng) 姚軼敏

      再生障礙性貧血(aplastic anemia,AA)是由免疫介導(dǎo)的造血干細(xì)胞及造血微環(huán)境損傷,從而導(dǎo)致骨髓造血功能衰竭的一種惡性血液疾病,以骨髓造血干細(xì)胞增生減低和外周血全血細(xì)胞減少為特征,以貧血、出血和感染為主要臨床表現(xiàn),病死率高。AA患者由于頻繁輸血,使機(jī)體鐵沉積量過多,造成鐵過載,導(dǎo)致多種臟器不同程度的損傷,且病程和預(yù)后與鐵過載程度相關(guān)[1-2]。近年來,鐵過載和免疫系統(tǒng)的關(guān)系受到越來越多的關(guān)注,免疫因素的介入會加劇鐵過載對人體的危害[3-4]。淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)重要的免疫細(xì)胞,研究發(fā)現(xiàn)鐵過載可通過升高活性氧(reactive oxygen species,ROS)來調(diào)節(jié) T淋巴細(xì)胞數(shù)量和功能[5]。但關(guān)于AA患者鐵過載對淋巴細(xì)胞影響的報道尚少,為此筆者回顧性分析AA患者臨床資料和血清鐵蛋白、血常規(guī)和淋巴細(xì)胞亞群等參數(shù),旨在探討鐵過載對AA患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響及其與鐵過載程度的相關(guān)性。

      1 對象和方法

      1.1 對象 選取2016年3月至2019年3月本院門診或住院部收治的AA患者200例作為研究對象,患者均符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》(第3版)中AA診斷標(biāo)準(zhǔn)[6],所有患者均未經(jīng)造血干細(xì)胞移植治療,臨床和實(shí)驗(yàn)室檢查排除感染性疾病、免疫性疾病、骨髓移植和其他造血系統(tǒng)疾病。以鐵蛋白>1 000μg/L定義為鐵過載[7],其中鐵過載、非鐵過載各100例。鐵過載組:男44例,女56 例,年齡 12~84(40.1±16.7)歲;非鐵過載組:男 33例,女 67 例,年齡 9~80(37.7±16.2)歲。160 例健康志愿者作為健康對照組,其中男70例,女90例,年齡16~70(40.7±12.3)歲。3組受檢者性別、年齡比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。

      1.2 試劑與儀器 Beckman-Coulter Gen.S LH780全自動血液分析儀、血常規(guī)配套試劑、Beckman 5色流式細(xì)胞儀、單克隆抗體 CD3+、CD4+、CD8+、CD45+、CD19+、CD16+、CD56+試劑盒、Abbott C1600 全自動生化分析儀及配套試劑購自美國Abbott公司。

      1.3 方法

      1.3.1 血常規(guī)檢測 于清晨采集受檢者外周靜脈血2ml,用乙二胺四乙酸二鉀抗凝,使用Beckman-Coulter Gen.S LH780全自動血液分析儀檢測,2h內(nèi)上機(jī)完成。獲得中性粒細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比值(NRL)。

      1.3.2 淋巴細(xì)胞亞群(T細(xì)胞、Treg細(xì)胞、Th細(xì)胞、Tc細(xì)胞、CD4/CD8、B細(xì)胞、NK細(xì)胞)檢測 血標(biāo)本6h內(nèi)染色、上機(jī)檢測。取流式管,加入10μl不同熒光標(biāo)記的單克隆抗體,加入外周血100μl混勻,室溫下避光放置20min,加入溶血素2ml,室溫下放置20min,500g離心6min,棄上清液,加入2ml PBS洗滌,離心,棄上清液,500μl PBS重懸細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測淋巴細(xì)胞亞群表達(dá),包括CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+、CD3-CD19+、CD3-CD16+CD56+。

      1.3.3 血清鐵蛋白檢測 采用Abbott C1600全自動生化分析儀檢測血清鐵蛋白,正常范圍14~233ng/ml。

      1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件。計量資料用±s表示,多組間比較采用單因素方差分析,方差齊時兩兩比較采用LSD-t法,方差不齊時兩兩比較采用Tamhane法。計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。鐵過載和非鐵過載組淋巴細(xì)胞、NRL、T細(xì)胞、NK細(xì)胞與鐵蛋白之間的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 3組受檢者血常規(guī)檢測結(jié)果比較 鐵過載組和非鐵過載組中性粒細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、NRL與健康對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05);鐵過載組淋巴細(xì)胞數(shù)與非鐵過載組比較降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);鐵過載組NRL與非鐵過載組比較升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表 1。

      表1 3組受檢者血常規(guī)檢測結(jié)果比較

      2.2 3組受檢者淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較 鐵過載組和非鐵過載組T細(xì)胞、Treg細(xì)胞、Tc細(xì)胞、CD4/CD8、NK細(xì)胞比例與健康對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05);鐵過載組T細(xì)胞、NK細(xì)胞比例與非鐵過載組比較均降低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05),見表2。

      2.3 鐵過載組與非鐵過載組患者NK細(xì)胞與鐵蛋白之間的相關(guān)性 鐵過載組NK細(xì)胞與鐵蛋白呈負(fù)相關(guān)(r=-0.617,P<0.05),非鐵過載組NK細(xì)胞與鐵蛋白無相關(guān)性(r=0.009,P >0.05),見圖 1、2。

      表2 3組受檢者淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較

      圖1 鐵過載組NK細(xì)胞與鐵蛋白的散點(diǎn)圖

      圖2 非鐵過載組NK細(xì)胞與鐵蛋白的散點(diǎn)圖

      3 討論

      AA是血液系統(tǒng)的常見疾病,目前認(rèn)為AA的發(fā)病機(jī)制主要為造血微環(huán)境異常、造血干祖細(xì)胞缺陷和免疫異常,這3種機(jī)制在不同患者個體中單獨(dú)或聯(lián)合作用,最終導(dǎo)致造血功能衰竭[8]。近年來研究發(fā)現(xiàn)免疫異常在AA發(fā)病中起重要作用,是造成AA造血功能異常的主要原因,T淋巴細(xì)胞功能亢進(jìn),CD4+與CD8+細(xì)胞亞群數(shù)量與比值改變,導(dǎo)致免疫功能發(fā)生改變,其免疫作用以造血細(xì)胞為靶細(xì)胞,最終造成全血細(xì)胞減少[9]。AA患者長期依賴輸血,導(dǎo)致鐵沉積,造成機(jī)體鐵過載,研究發(fā)現(xiàn)鐵過載可通過升高活性氧(ROS)從而損傷骨髓造血功能,包括直接對造血干細(xì)胞[10]以及間接對造血支持間充質(zhì)細(xì)胞[11]的數(shù)量和功能損傷。鐵過載和機(jī)體免疫力的關(guān)系近年越來越被重視,免疫因素的介入會加劇鐵過載的危害,機(jī)體的預(yù)后也與鐵過載程度相關(guān)[12]。本實(shí)驗(yàn)以免疫因素作為切入點(diǎn),分析AA患者和鐵過載的免疫聯(lián)系,初步探討鐵過載對AA患者淋巴細(xì)胞亞群的影響。

      本研究血常規(guī)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)鐵過載組外周血淋巴細(xì)胞絕對數(shù)降低,中性粒細(xì)胞絕對數(shù)變化不明顯,提示鐵過載對淋巴細(xì)胞影響較大,于是筆者進(jìn)一步分析淋巴細(xì)胞亞群,結(jié)果顯示鐵過載組與非鐵過載組比較,T細(xì)胞和NK細(xì)胞比例顯著降低。研究發(fā)現(xiàn)鐵既是參與紅系造血的重要原料,又作為氧化還原反應(yīng)的重要催化劑,鐵過載使ROS自由基的生產(chǎn)增加[13],過度的ROS積累可能會導(dǎo)致蛋白和基因氧化損傷,進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞的衰老和凋亡[14-15]。有研究顯示鐵過載通過升高ROS水平,對T淋巴細(xì)胞起重要的調(diào)節(jié)作用,從而影響機(jī)體免疫功能[16]。基于以上結(jié)果,筆者進(jìn)一步分析T細(xì)胞和NK細(xì)胞與鐵蛋白的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)鐵過載組NK細(xì)胞與鐵蛋白呈負(fù)相關(guān),提示鐵過載對AA患者NK細(xì)胞影響較大。NK細(xì)胞是一類大顆粒淋巴細(xì)胞,通過一系列生物學(xué)過程獲得激活信號,包括鈣內(nèi)流、細(xì)胞骨架重排以及與靶細(xì)胞接觸部位免疫突觸形成等,最終通過分泌細(xì)胞因子、趨化因子及釋放毒性顆粒執(zhí)行殺傷和免疫調(diào)節(jié)功能。Hua等[17]研究骨髓異常增生綜合征鐵過載與非鐵過載患者發(fā)現(xiàn),鐵過載組NK細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高,主要通過p38和JNK信號通路對NK細(xì)胞凋亡進(jìn)行調(diào)控。

      綜上所述,鐵過載對AA患者T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞有較大的影響,同時發(fā)現(xiàn)鐵過載程度與NK細(xì)胞具有負(fù)相關(guān)性,提示鐵過載對NK細(xì)胞的影響更大,但相關(guān)研究目前尚缺乏,筆者將進(jìn)一步深入研究鐵過載對NK細(xì)胞的作用機(jī)制,為臨床治療AA患者鐵過載導(dǎo)致的免疫功能紊亂提供理論客觀依據(jù)。

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