復(fù)合益生菌制劑對(duì)小白鼠生長(zhǎng)性能、腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)及血清生化指標(biāo)的影響

徐 鳳， 邱發(fā)明， 邱 揚(yáng)

（1.白城醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，吉林白城 173000；2.吉林省畜牧業(yè)學(xué)校，吉林白城 173000；3.昆明醫(yī)科大學(xué)海源學(xué)院，云南昆明 650000）

小白鼠是野生鼷鼠的變種鼠種，大多用于醫(yī)學(xué)研究。昆明系小白鼠作為實(shí)驗(yàn)室主要的模式動(dòng)物被普遍用在生理學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等學(xué)科的教學(xué)與研究中，為研究工作的開展給予了可靠的支持（崔燦，2019；楊慧軍，2012）。益生菌主要來(lái)源于動(dòng)物的胃、腸道，是動(dòng)物胃、腸道消化過程中主要的微生物菌群，在動(dòng)物消化過程中起著重要的作用，臨床中常見的益生菌主要包括乳酸桿菌、乳雙歧桿菌、酵母菌、糞尿球菌、腸球菌等，這些益生菌具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育，調(diào)整腸道內(nèi)菌群平衡，提高免疫機(jī)能等多種優(yōu)點(diǎn)，益生菌可以替代抗菌藥物使用，具有廣闊的應(yīng)用前景（劉正旭，2019；李巧蘭，2019；亓愛杰，2019）。復(fù)合益生菌制劑是由多種益生菌經(jīng)過特殊工藝制成的一種具有調(diào)節(jié)作用的活菌制劑，該制劑具有多種營(yíng)養(yǎng)與保健作用且應(yīng)用范圍廣、容易制備、使用方便，被廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖中（劉政，2017）。因此，本試驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)小白鼠的基礎(chǔ)日糧中添加不同水平的復(fù)合益生菌制劑，旨在探討其對(duì)腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)及血清生化指標(biāo)的影響，為復(fù)合益生菌制劑在實(shí)驗(yàn)小白鼠中進(jìn)一步的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 復(fù)合益生菌制劑主要由乳酸桿菌、乳雙歧桿菌、糞尿球菌、腸球菌4種不同比例的益生菌組成，4種益生菌的活菌數(shù)均大于7.5×109cfu/g，由白城醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校微生物實(shí)驗(yàn)室制備；糞便中大腸桿菌、沙門菌、乳酸桿菌、乳雙歧桿菌鑒定試劑盒購(gòu)于 Elabscience公司；總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 （GPT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 （GOT）、血尿素氮（BUN）等試劑盒均購(gòu)于北京中控生物技術(shù)有限公司。

1.2 飼糧配比 參考秦哲（2017）文獻(xiàn)，根據(jù)小白鼠的營(yíng)養(yǎng)需要，配制基礎(chǔ)飼糧，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）%

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與管理 采用單因素隨機(jī)設(shè)計(jì)試驗(yàn)，選擇體質(zhì)量為（20±2.5）g健康實(shí)驗(yàn)昆明系小白鼠360只隨機(jī)分成4個(gè)組，每個(gè)組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30只，1組飼喂基礎(chǔ)日糧為空白對(duì)照組，試驗(yàn)2、3、4組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.25%、0.5%、1.0%的復(fù)合益生菌制劑，試驗(yàn)期為28 d。按照常規(guī)飼養(yǎng)管理方式進(jìn)行飼養(yǎng)與管理，每個(gè)重復(fù)組單獨(dú)飼養(yǎng)，自由采食和飲水，飼養(yǎng)環(huán)境一致，適合的溫度與光照。

1.4 生長(zhǎng)性能測(cè)定 在試驗(yàn)期間記錄試驗(yàn)開始與結(jié)束的體重及耗料量，測(cè)定平均日增重、平均日采食量、料重比等生長(zhǎng)性能指標(biāo)。

1.5 腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)測(cè)定 參照李平（2019）報(bào)道方法，試驗(yàn)結(jié)束前4 d，采集每個(gè)重復(fù)組實(shí)驗(yàn)小白鼠的新鮮糞便大約50 g，混合均勻進(jìn)行處理。糞便中大腸桿菌、沙門菌、乳酸桿菌、乳雙歧桿菌鑒定按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，分離細(xì)菌計(jì)數(shù)，每克糞便中菌群總數(shù)用對(duì)數(shù)（lg cfu/g）表示。

1.6 血清中生化指標(biāo)測(cè)定 在試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)組隨機(jī)抽取10只小白鼠摘眼球取血，離心分離血清。按照說(shuō)明書測(cè)定血清中總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 （GPT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 （GOT）、血尿素氮（BUN）等生化指標(biāo)。

1.7 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用 “平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件SPSS 18.0對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，以P＜0.05表示差異顯著性。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)合益生菌制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)小白鼠生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，試驗(yàn)3、4組小白鼠平均日增重較1組相比分別提高31.9%、29.8%（P＜0.05），試驗(yàn)2組高于1組，差異性不顯著（P＞0.05），試驗(yàn) 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著（P ＞ 0.05）；試驗(yàn)2、3、4組平均采食量均高于1組，但差異性不顯著 （P＞0.05）；試驗(yàn)3、4組料重比較1組相比分別降低 16.2%、15.7% （P＜0.05），試驗(yàn) 2組低于 1 組，差異性不顯著（P ＞ 0.05）；試驗(yàn) 2、3、4組之間相比，差異性不顯著（P＞0.05）。

表2 復(fù)合益生菌制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)小白鼠生長(zhǎng)性能的檢測(cè)結(jié)果

2.2 復(fù)合益生菌制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)小白鼠腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)的影響 由表3可知，試驗(yàn)3、4組糞便中大腸桿菌的含量較1組相比分別降低19.2%、18.5% （P＜0.05），試驗(yàn)2組低于1組，差異不顯著（P ＞ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4 組之間差異不顯著（P ＞0.05）；試驗(yàn) 2、3、4組糞便中的沙門菌含量均低于1組，差異性不顯著（P ＞ 0.05）；試驗(yàn) 3、4組糞便中乳酸桿菌和雙歧桿菌含量較1組相比分別提高31.9%、31.5%、16.8%、16.2% （P ＜ 0.05），試驗(yàn)2組高于 1 組，差異性不顯著（P ＞ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4組之間相比，差異不顯著（P＞0.05）。

表3 復(fù)合益生菌制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)小白鼠腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)的檢測(cè)結(jié)果lg cfu/g

2.3 復(fù)合益生菌制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)小白鼠血清生化指標(biāo)的影響 由表4可知，試驗(yàn)3、4組血清中TP含量較1組相比分別提高 14.7%、14.4% （P＜0.05），試驗(yàn)2組高于1組，差異性不顯著（P＞0.05），試驗(yàn)2、3、4 組之間相比，差異性不顯著（P ＞ 0.05）；試驗(yàn)2、3、4組血清中的ALB含量均高于1組，但差異性不顯著（P ＞ 0.05）；試驗(yàn) 2、3、4 組血清中的 GOT 含量均低于1組，但差異性不顯著（P＞0.05）；試驗(yàn)3、4組血清中GPT、BUN含量較1組相比分別降低 11.1%、11%、21.7%、21.3%（P ＜ 0.05），試驗(yàn) 2組低于 1 組，差異性不顯著（P ＞ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4 組之間，差異性不顯著（P＞0.05）。

表4 復(fù)合益生菌制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)小白鼠血清生化指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果

3 討論

益生菌中富含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，具有多種作用與功效，被廣泛應(yīng)用于雞、豬、牛、羊健康養(yǎng)殖過程中。研究表明，益生菌可以顯著提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能（亓愛杰，2019）。本試驗(yàn)研究表明，試驗(yàn)3、4組小白鼠平均日增重較1組相比分別提高31.9%、29.8%（P ＜ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4組平均采食量均高于1組（P＞0.05），試驗(yàn)3、4組料重比較1組相比分別降低16.2%、15.7%（P＜0.05）。說(shuō)明復(fù)合益生菌可以提高實(shí)驗(yàn)小白鼠的生長(zhǎng)性能?？赡苡捎趶?fù)合益生菌中富含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及消化酶類，可促進(jìn)飼料在實(shí)驗(yàn)小白鼠體內(nèi)的消化吸收，提高飼料在體內(nèi)的利用率，促進(jìn)實(shí)驗(yàn)小白鼠生長(zhǎng)，從而提高小白鼠的生產(chǎn)性能，以0.5%添加為適宜。

動(dòng)物腸道中包括益生菌菌群和致病菌群，其中益生菌菌群中的乳酸桿菌和雙歧桿菌是機(jī)體重要的生理性細(xì)菌，具有抗感染、增強(qiáng)免疫力及拮抗有害微生物的作用 （楊巧麗，2017）。益生菌菌群和致病性菌群結(jié)構(gòu)保持動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)致病菌群占主要地位時(shí)，就會(huì)引起動(dòng)物腹瀉等疾病，動(dòng)物腸道中微生物菌群的平衡對(duì)動(dòng)物健康起著重要的作用（張任帥，2017）。本試驗(yàn)研究表明，試驗(yàn)3、4組糞便中大腸桿菌的含量較1組相比分別降低19.2%、18.5% （P ＜ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4組糞便中的沙門菌含量均低于1組（P＞0.05），試驗(yàn)3、4組糞便中的雙歧桿菌和乳酸桿菌含量較1組相比分別提高 31.9%、31.5%、16.8%、16.2% （P ＜ 0.05）。 說(shuō)明復(fù)合益生菌制劑可以降低大腸桿菌、沙門菌等有害菌的數(shù)量，提高其雙歧桿菌和乳酸桿菌含量水平，從而改善實(shí)驗(yàn)小白鼠的的腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)，促進(jìn)腸道微生態(tài)平衡。

國(guó)內(nèi)外許多相關(guān)研究表明，物質(zhì)在有機(jī)體內(nèi)代謝過程與肝、腎等功能生化指標(biāo)具有一定相關(guān)性，血液生化指標(biāo)動(dòng)態(tài)變化在一定程度上可以直接反映動(dòng)物的健康狀況（張召興，2018）。肝、腎功能器官代謝過程中與血清中總蛋白、總蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶及尿酸的含量有關(guān)，其指標(biāo)的高低可以直接影響肝、腎的代謝功能 （鮑坤，2015）。本試驗(yàn)研究表明，試驗(yàn)3、4組血清中TP含量較 1組比分別提高 14.7%、14.4% （P＜0.05），試驗(yàn)2、3、4組血清中的ALB含量均高于1組（P ＞ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4組血清中的 GOT 含量均低于1組（P＞0.05），試驗(yàn) 3、4組血清中 GPT、BUN含量較1組相比分別降低 11.1%、11%、21.7%、21.3%（P＜0.05）。說(shuō)明復(fù)合益生菌制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)小白鼠的肝腎無(wú)明顯損傷作用，還可以提高其肝、腎代謝水平，其作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加0.5%復(fù)合益生菌制劑可以提高小白鼠的生長(zhǎng)性能，改善腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)，提高肝腎代謝功能。