魔芋葡甘聚糖及氧化魔芋葡甘聚糖對(duì)益生菌生長(zhǎng)及乳糖代謝作用的體外研究

蘆雨佳,毛凱雯,鐘 耕

(1.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院,重慶 400716;2.西南大學(xué)西塔學(xué)院,重慶 400715;3.食品科學(xué)與工程國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心(西南大學(xué)),重慶 400716)

乳制品是改善居民膳食結(jié)構(gòu),提高民族身體素質(zhì)的重要食品,乳糖(lactose)是乳制品中存在的主要碳水化合物,乳糖經(jīng)由小腸黏膜上皮細(xì)胞絨毛刷狀緣分泌的乳糖酶分解為葡萄糖和半乳糖,是供給嬰兒所需能量的主要來(lái)源[1]。據(jù)調(diào)查,全世界大約70%的人體內(nèi)缺乏乳糖酶[2]。乳糖不耐受(lactose intolerance,LI)是由于乳糖酶數(shù)量的減少及活性的降低,不能完全消化分解乳中的乳糖而引起以腹脹、腹瀉、腹痛為主的一系列臨床癥狀[3]。乳糖不耐受按照病因主要分為三型,第一型為先天性乳糖不耐受,很罕見(jiàn)[4],不作為本文主要研究問(wèn)題。第二型為原發(fā)性(成人型)乳糖不耐受,在臨床最為常見(jiàn),是指隨著年齡增長(zhǎng)乳糖酶活性自發(fā)地逐漸下降而引起的乳糖不耐受[5]。第三型為繼發(fā)性乳糖不耐受,指多由于感染性腹瀉、營(yíng)養(yǎng)不良等原因,導(dǎo)致小腸粘膜細(xì)胞受損而使乳糖酶含量降低,從而對(duì)乳糖暫時(shí)不耐受[4]?，F(xiàn)如今關(guān)于解決乳糖不耐受問(wèn)題的方法,均還有待完善。如食用低(無(wú))乳糖制品,但無(wú)法長(zhǎng)期滿足患者營(yíng)養(yǎng)需求[6];口服乳糖酶通常需要長(zhǎng)期治療且價(jià)格昂貴,且胃內(nèi)pH等因素均會(huì)影響乳糖酶的功效[7];而改變基因又相對(duì)復(fù)雜且技術(shù)不成熟,仍處于試驗(yàn)階段[8]。如何簡(jiǎn)單高效地提高乳糖酶活性是現(xiàn)如今需要研究的主要方向。

人體腸道內(nèi)乳糖酶的主要來(lái)源為機(jī)體自身合成、有益菌少量合成并分泌,以及攝入外源乳糖酶[9]。乳酸菌作為一種主要的腸道益生菌,能夠壓制腐敗細(xì)菌以及腸的腐化,預(yù)防便秘和老年性疾病,同時(shí)可以防治與抗生素有關(guān)的腹瀉[10]。其中,雙歧桿菌能夠改善乳糖的利用,并通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群平衡來(lái)治療腹瀉[11]。另有研究表明,所有雙歧桿菌均具有乳糖酶,且活力顯著高于其他腸道菌群[9],因此適量補(bǔ)充雙歧桿菌可預(yù)防乳糖不耐受病癥的發(fā)生[12]。如何促進(jìn)益生菌群的生長(zhǎng),成為提高乳糖酶活性及數(shù)量,從而緩解乳糖不耐受問(wèn)題的新思路。

魔芋中的主要成分為一種可溶性半纖維素,即魔芋葡甘聚糖(Konjac Glucomannan,KGM)[13]。KGM是一種不被人體吸收的膳食纖維,具有極低的熱量及飽腹感,可以預(yù)防肥胖,并具備降血脂的作用[14-15]。有研究指出,KGM可促進(jìn)乳酸菌等腸道益生菌的生長(zhǎng)[16]。另有研究表明,RP-G28(一種特殊的低聚半乳糖)可能是改善乳糖消化和LI癥狀的有效方法[17],RP-G28與KGM均為水溶性膳食纖維,但未見(jiàn)有關(guān)KGM對(duì)乳糖代謝作用的研究。本實(shí)驗(yàn)參考秦清娟等[16]通過(guò)腸道內(nèi)容物體外厭氧發(fā)酵模擬腸道的方法,擬通過(guò)提供厭氧條件并調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH為7.5左右模擬腸道環(huán)境[18]。以KGM及其氧化衍生物-氧化魔芋葡甘聚糖(Oligo-Konjacglucomannan,OKGM)為試驗(yàn)材料,體外發(fā)酵法研究其對(duì)乳糖的降解作用。通過(guò)體外厭氧發(fā)酵24 h,從構(gòu)效(KGM與OKGM)、量效(設(shè)置低、中、高劑量)以及時(shí)效(不同發(fā)酵時(shí)間的測(cè)定結(jié)果)三個(gè)方面測(cè)定并分析各指標(biāo),研究KGM和OKGM對(duì)益生菌生長(zhǎng)和對(duì)乳糖代謝的促進(jìn)作用。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

清潔級(jí)KM小鼠 重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司,SCXK(軍)2012-0011;KGM 重慶康家客食品公司,符合NY/T 494-2010《魔芋粉》;全脂奶粉 雀巢公司生產(chǎn),配方:生牛乳、乳粉、鐵(焦磷酸鐵)、維生素D(膽鈣化醇)、食品添加劑(磷脂);乳酸菌種 北京川秀科技有限公司提供,丹麥進(jìn)口,產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào):Q/TZCXG 0001;乳糖 合肥博美生物科技有限責(zé)任公司;碳酸氫銨、氯化鈉 成都市科隆化學(xué)品有限公司;碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、七水合硫酸鎂、氫氧化鈉、九水合硫化鈉、亞硫酸氫鈉水 成都市科龍化工試劑廠;苦味酸 BR,臺(tái)山市眾城化工有限公司;上述試劑除注明外,均為AR;MRS培養(yǎng)基 BR,北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司;多胨 BR,青島高科園海博生物技術(shù)有限公司;瓊脂 BR,福建省綠麒食品膠體有限公司;乳糖酶試劑盒 南京建成生物工程研究所;BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒 北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

Synergy H1多功能酶標(biāo)儀 中國(guó)香港基因有限公司;Spectrum100紅外分光光度計(jì) 美國(guó)PERKINELMER公司;UV-2450紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì) 日本SHIMADZU公司;JM-65003電子天平 中國(guó)諸暨市超澤衡器設(shè)備有限公司;SW-CJ-1FD超凈工作臺(tái) 中國(guó)蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;GR60DA自動(dòng)壓力蒸汽滅菌器 中國(guó)致微(廈門)儀器有限公司;NDJ-5S旋轉(zhuǎn)粘度計(jì) 中國(guó)上海越平科學(xué)儀器有限公司。

1.2.1 OKGM的制備 參考李斌等[19]的方法,并略有修改:將料液比為1∶4的KGM及異丙醇加入至三口瓶(500 mL)中,攪拌5 min,調(diào)pH7.5,反應(yīng)溫度4～5 ℃,滴加體積分?jǐn)?shù)為2.4%的H2O2,30 min內(nèi)滴加完畢,反應(yīng)4 h后,經(jīng)過(guò)濾、洗滌,60 ℃低溫干燥至恒重,得OKGM。在60 ℃水浴加熱攪拌2 h,冷卻至室溫,用旋轉(zhuǎn)粘度計(jì),檢測(cè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的OKGM粘度為1036 mPa·s,質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的KGM的粘度為7450 mPa·s。通過(guò)滴定法測(cè)定氧化度為0.431。分別稱取10 mg KGM和OKGM,以KBr壓片,傅里葉紅外分光光度計(jì)上測(cè)定,進(jìn)行光譜分析。

1.2.2 體外厭氧發(fā)酵 基礎(chǔ)發(fā)酵液的配制參考Menke等[20]的方法,配方如下:400 mL H2O、0.1 mL微量元素溶液A(每100 mL溶液A含CaCl2·2H2O 13.2 g、MnCl2·4H2O 10 g、CoCl·6H2O 1 g和FeCl3·6H2O 8 g)、200 mL 碳酸鹽緩沖溶液B(每L溶液B 含NH4HCO34 g和NaHCO335 g)、200 mL 磷酸鹽緩沖溶液C(每L溶液C含Na2HPO45.7 g、KH2PO46.2 g和MgSO4·7H2O 0.6 g)、1 mL 1.0 g/L刃天青溶液、40 mL還原劑溶液(每100 mL還原劑溶液含NaOH 160 mg、Na2S·9H2O 625 mg)。

參考秦清娟等[16]方法,并作適當(dāng)調(diào)整:在無(wú)菌條件下,分別取20只健康KM小鼠回腸、盲腸內(nèi)容物,迅速裝入已滅菌處理的50 mL的帶蓋離心管中并稱重,導(dǎo)入高純二氧化碳,上蓋。加入內(nèi)容物質(zhì)量9倍的無(wú)菌生理鹽水稀釋,經(jīng)振蕩分散均勻后用2層紗布過(guò)濾,即為回腸及盲腸內(nèi)容物稀釋液。配制基礎(chǔ)發(fā)酵液,滅菌,等分為16份于各發(fā)酵瓶中(160 mL/份),其中12份分別加入不同劑量的KGM或OKGM以及奶粉,另外2份加入乳酸菌和奶粉作為陽(yáng)性對(duì)照組,最后2份只添加奶粉作為陰性對(duì)照組(詳見(jiàn)表1)。迅速將體積分?jǐn)?shù)10%回腸或盲腸內(nèi)容物稀釋液加入上述各組發(fā)酵液中,混合均勻后沖入CO25 s后,立即蓋上瓶蓋,將其放于37 ℃厭氧發(fā)酵箱中發(fā)酵,每間隔4 h取樣一次,24 h后終止發(fā)酵并進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定。

表1 各試驗(yàn)組與對(duì)照組設(shè)置Table 1 Set of each experimental and control group

1.2.3 發(fā)酵液中菌落數(shù)的測(cè)定 乳酸菌等益生菌合成并分泌的乳糖酶是體內(nèi)乳糖酶的來(lái)源之一,其中雙歧桿菌的乳糖酶活性顯著高于其他腸道菌群[9]。因此本實(shí)驗(yàn)在測(cè)定發(fā)酵液中乳酸菌數(shù)量的基礎(chǔ)上,又增加專門針對(duì)雙歧桿菌數(shù)量的測(cè)定。因MRS培養(yǎng)基作為乳酸菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基被廣泛應(yīng)用[21],陳曉蔚等[22]指出改良BBL培養(yǎng)基可選擇性培養(yǎng)雙歧桿菌并抑制乳酸桿菌生長(zhǎng)[22]。因此,本試驗(yàn)采用以上兩種培養(yǎng)基(BBL參考陳曉蔚等[22]配制)測(cè)定發(fā)酵液中的菌落數(shù)。參照陳影等[23]的方法,并適當(dāng)調(diào)整如下:分別將上述兩種培養(yǎng)基固體粉末與水以一定比例混合,加熱煮沸并高溫滅菌后待用。將滅菌過(guò)的培養(yǎng)基(約10～20 mL)于超凈工作臺(tái)內(nèi)倒入培養(yǎng)皿中,等待平板冷卻凝固。取少量發(fā)酵液(0.1 mL)于培養(yǎng)基表面并均勻涂布。于37 ℃恒溫培養(yǎng)48 h后,選取菌落數(shù)在30～300個(gè)之間的平板計(jì)數(shù)。

1.2.4 發(fā)酵液中pH測(cè)定 每隔4 h取一次樣,參考GB/T 1601-1993《農(nóng)藥pH的測(cè)定方法》標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定[24]。

1.2.5 發(fā)酵液中乳糖酶活性 按照乳糖酶試劑盒的要求進(jìn)行操作并計(jì)算。

1.2.6 奶粉及發(fā)酵液中乳糖含量的測(cè)定 參考樊宏等[25]方法,并適當(dāng)修改為:精確稱取1.000 g樣品于燒杯中(液體則根據(jù)蛋白質(zhì)含量不同,精確稱取10.0～20.0 g樣品),用水溶解,移入200 mL容量瓶中并定容。從中精確吸取25.0 mL于100 mL容量瓶,緩慢加入5.0 mL乙酸鋅溶液(219 g/L)和5.0 mL亞鐵氰化鉀溶液(106 g/L),加水定容并混勻。靜置30 min后,通過(guò)濾紙過(guò)濾,待測(cè)。同時(shí)做空白試驗(yàn)。作乳糖標(biāo)準(zhǔn)曲線,測(cè)得乳糖含量線性回歸方程為C=4.5608×A+0.0487,結(jié)果表明吸光度與濃度呈良好的線性關(guān)系(R2為0.9728)。取2.0 mL樣品和試劑空白濾液于25 mL比色管,在波長(zhǎng)520 nm處測(cè)定吸光值,按下式計(jì)算乳糖含量:

式中:X,乳糖的含量,g/100 g;C,根據(jù)回歸方程測(cè)得樣品中乳糖的含量,mg;M,樣品質(zhì)量,g;V1,經(jīng)稀釋樣品定容的體積,mL;V2,沉淀蛋白質(zhì)時(shí)使用的稀釋樣品的體積,mL;V3,沉淀蛋白質(zhì)時(shí)樣品定容的體積,mL;V4,測(cè)定時(shí)乳糖使用的體積,mL。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)均采用SPSS分析軟件(v23)中單因素ANOVA檢驗(yàn)得出平均值、標(biāo)準(zhǔn)差以及顯著性分析等,并通過(guò)Excel軟件(2016)制圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 KGM及OKGM紅外光譜分析

分別對(duì)樣品KGM和OKGM進(jìn)行紅外光譜分析,從圖1可見(jiàn),3406 cm-1處的多糖-OH特征吸收峰、873 cm-1處的表征β-D糖苷鍵構(gòu)型的吸收峰、797 cm-1處的吡喃環(huán)呼吸振動(dòng)峰都能明顯識(shí)別,說(shuō)明經(jīng)氧化改性所得的OKGM的主鏈結(jié)構(gòu)與KGM一致,但1711 cm-1處出現(xiàn)了新的吸收峰,表明氧化形成了羧基(-COOH),結(jié)果與李斌等[19]研究結(jié)果一致。

圖1 KGM和OKGM紅外光譜圖Fig.1 KGM and OKGM infrared spectra

2.2 發(fā)酵液中菌落數(shù)的測(cè)定

由表2可知,在回腸發(fā)酵液中,KGM中、高劑量組和OKGM低、高劑量組的乳酸菌數(shù)量均顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05)。同時(shí)雙歧桿菌數(shù)量測(cè)定結(jié)果顯示,KGM各試驗(yàn)組以及OKGM低、高劑量組的菌落數(shù)量均顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05)。在盲腸發(fā)酵液中,KGM、OKGM各試驗(yàn)組和陽(yáng)性對(duì)照組的乳酸菌數(shù)量均顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05),同樣的結(jié)果也可以在雙歧桿菌數(shù)量測(cè)定中觀察到。此外在回腸和盲腸發(fā)酵液中,對(duì)比KGM與OKGM兩組結(jié)果發(fā)現(xiàn),相同劑量的KGM和OKGM各組間數(shù)據(jù)幾乎均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。以上結(jié)果表明,KGM和OKGM對(duì)乳酸菌生長(zhǎng)增殖均具有良好的促進(jìn)作用,與秦清娟等[16]的研究結(jié)論一致:KGM對(duì)乳酸菌等腸道有益菌有明顯的促進(jìn)增殖作用。

表2 發(fā)酵液中微生物數(shù)量Table 2 Microbial quantities in anaerobic fermentation

2.3 發(fā)酵液pH的變化

由圖2～圖5可知,經(jīng)24 h體外厭氧發(fā)酵,回腸發(fā)酵液組與盲腸發(fā)酵液組pH測(cè)定結(jié)果呈現(xiàn)較為相似的現(xiàn)象:整體上,各組pH在24 h內(nèi)呈下降趨勢(shì),其中陽(yáng)性對(duì)照組在兩類發(fā)酵液組別中均下降最多(回腸發(fā)酵液陽(yáng)性對(duì)照組從7.5降至4.3,盲腸發(fā)酵液陽(yáng)性對(duì)照組從7.5降至4.2);0～12 h,各組pH下降速度較快,且在12 h時(shí)同一類發(fā)酵液組間呈現(xiàn)較為明顯的差異:KGM高劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組12 h的pH均顯著低于其陰性對(duì)照組(P<0.05);12～24 h,各組pH均下降至最低點(diǎn)(回腸發(fā)酵液組平均降至4.4左右,盲腸發(fā)酵液組平均降至4.3左右)。比較可知,回腸發(fā)酵液和盲腸發(fā)酵液的KGM高劑量組pH在12 h均顯著低于其陰性對(duì)照組(P<0.05),但兩類發(fā)酵液的OKGM各劑量組在24 h時(shí)均與其陰性對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P>0.05)?？赡艿脑?yàn)?發(fā)酵液pH與其中微生物活性密切相關(guān)[26],據(jù)研究指出KGM可以促進(jìn)乳酸菌等腸道益生菌的增殖[16],從而可能對(duì)發(fā)酵液pH造成明顯的影響,但KGM的氧化改性產(chǎn)物OKGM對(duì)發(fā)酵液pH的影響還未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道,也值得后續(xù)深入研究。

圖2 KGM各劑量組及對(duì)照組回腸發(fā)酵液不同時(shí)段pH的比較Fig.2 Comparison of pH in each KGM group and control groupin ileum fermentation broths at different time

圖3 OKGM各劑量組及對(duì)照組回腸發(fā)酵液不同時(shí)段pH的比較Fig.3 Comparison of pH in each OKGM group and controlgroup in ileum fermentation broths at different time

圖4 KGM各劑量組及對(duì)照組盲腸發(fā)酵液不同時(shí)段pH的比較Fig.4 Comparison of pH in each KGM group and controlgroup in cecum fermentation broths at different time

圖5 OKGM各劑量組及對(duì)照組盲腸發(fā)酵液不同時(shí)段pH的比較Fig.5 Comparison of pH in each OKGM group and controlgroup in cecum fermentation broths at different time

2.4 發(fā)酵液中乳糖酶活性的測(cè)定

由表3可知,在8、12 h各組回腸發(fā)酵液中,KGM高劑量組、OKGM各劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組的乳糖酶活性均顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05)。在盲腸發(fā)酵液中,OKGM高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組8 h的乳糖酶活性顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05),12 h只有OKGM中、高劑量組的乳糖酶活性顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05)。以上現(xiàn)象說(shuō)明KGM和OKGM對(duì)發(fā)酵過(guò)程中乳糖酶活性具有促進(jìn)作用,原因可能為乳糖酶活性隨著腸道內(nèi)厭氧菌數(shù)量(腸道厭氧菌群主要為類桿菌、雙歧桿菌和乳桿菌)的增加而增強(qiáng)[27],且KGM可促進(jìn)雙歧桿菌、乳桿菌等腸道有益菌的生長(zhǎng)[16],進(jìn)而可能提高了乳糖酶活性。此外,相同劑量下OKGM組的乳糖酶活性整體較KGM組高。此現(xiàn)象可能因?yàn)镵GM經(jīng)氧化后分子鏈產(chǎn)生解聚[28],生成低分子甘露聚糖,更容易被微生物利用,此現(xiàn)象與Li等[29]研究結(jié)果相似:腸道微生物可以降解利用瓊膠和卡拉膠寡糖,但對(duì)高分子量瓊膠和卡拉膠的降解能力很低。

表3 8、12 h發(fā)酵液中各組乳糖酶活性Table 3 Lactase activity in 8 and 12

2.5 發(fā)酵液中乳糖含量的變化

由圖6、圖7可知,回腸發(fā)酵液各組在24 h內(nèi),乳糖含量整體呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。4 h各組間乳糖含量開(kāi)始呈現(xiàn)顯著性差異:KGM低劑量組、OKGM各劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組的乳糖含量顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.05),提示KGM和OKGM可能有效加快乳糖代謝進(jìn)程。4～24 h,各組乳糖含量繼續(xù)下降并在24 h降至最低值,其中,KGM中、高劑量組和OKGM各劑量組24 h乳糖含量均顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.05)。

圖6 KGM各劑量組及對(duì)照組回腸發(fā)酵液不同時(shí)段乳糖含量的比較Fig.6 Comparison of lactose content in each KGM groupand control group in ileum fermentation broths at different time

圖7 OKGM各劑量組及對(duì)照組回腸發(fā)酵液不同時(shí)段乳糖含量的比較Fig.7 Comparison of lactose content in each OKGM groupand control group in ileum fermentation broths at different time

由圖8、圖9可知,體外厭氧發(fā)酵24 h,各組盲腸發(fā)酵液的乳糖含量也呈下降趨勢(shì)。4 h各試驗(yàn)組和陽(yáng)性對(duì)照組的乳糖含量均顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.05),且KGM中劑量組和OKGM中、高劑量組的乳糖含量均顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組的乳糖含量(P<0.05),提示KGM和OKGM可能有效加快乳糖代謝過(guò)程。4～24 h內(nèi),各組乳糖含量較為平穩(wěn)地降至最終值,且KGM低、中劑量組和OKGM中、高劑量組以及陽(yáng)性對(duì)照組的24 h乳糖含量均顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.05)。

圖8 KGM各劑量組及對(duì)照組盲腸發(fā)酵液不同時(shí)段乳糖含量的比較Fig.8 Comparison of lactose content in each KGM groupand control group in cecum fermentation broths at different time

圖9 OKGM各劑量組及對(duì)照組盲腸發(fā)酵液不同時(shí)段乳糖含量的比較Fig.9 Comparison of lactose content in each OKGM groupand control group in cecum fermentation broths at different time

以上結(jié)果說(shuō)明,KGM和OKGM可有效降低經(jīng)發(fā)酵奶粉的乳糖含量,4h即有明顯效果,表明對(duì)乳糖代謝具有明顯的促進(jìn)作用。原因可能為腸道內(nèi)乳酸菌等腸道益生菌含有乳糖酶,是體內(nèi)乳糖酶的來(lái)源之一[9]。而KGM被證明可以促進(jìn)此類腸道益生菌的生長(zhǎng)繁殖[16],且由于厭氧菌數(shù)量越高(研究表明腸道內(nèi)厭氧菌群最多的為類桿菌、雙歧桿菌和乳桿菌),腸道內(nèi)乳糖酶活性越大[27],從而可能使得乳糖含量明顯降低。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,KGM與OKGM對(duì)乳酸菌有明顯的增殖作用:在回腸發(fā)酵液中,KGM中、高劑量組和OKGM低、高劑量組的乳酸菌數(shù)量均顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05);在盲腸發(fā)酵液中,KGM、OKGM各試驗(yàn)組的乳酸菌數(shù)量均顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05)。同時(shí),KGM與OKGM可顯著提高乳糖酶活性:8、12 h回腸發(fā)酵液中,KGM高劑量組、OKGM各劑量組的乳糖酶活性均顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05);盲腸發(fā)酵液中,OKGM高劑量組8和12 h的乳糖酶活性顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05)。此外,KGM和OKGM對(duì)乳糖代謝具有顯著促進(jìn)作用:發(fā)酵4 h KGM低劑量組、OKGM各劑量組的回腸發(fā)酵液中乳糖含量顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.05),同時(shí)各試驗(yàn)組的盲腸發(fā)酵液中乳糖含量均顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.05),且其中KGM中劑量組和OKGM中、高劑量組結(jié)果也顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05),提示KGM和OKGM可有效加快乳糖代謝;發(fā)酵24 h后KGM中、高劑量組和OKGM各劑量組的回腸發(fā)酵液中乳糖含量均顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.05),且KGM低、中劑量組和OKGM中、高劑量組的24 h盲腸發(fā)酵液中乳糖含量均顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.05)。綜上所述,添加了KGM或OKGM的奶粉可促進(jìn)人體腸道內(nèi)乳酸菌的生長(zhǎng),同時(shí)可促進(jìn)乳糖的代謝,即明顯提高乳糖酶活性,加快乳糖的分解,并有效降低乳糖含量。