液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定食用油中的苯并(a)芘

郭芳芳 高宏 朱成晶（江蘇省理化測(cè)試中心，江蘇 南京210000）

目前，食用油脂中苯并(a)芘的分析方法主要有免疫學(xué)法、表面增強(qiáng)拉曼光譜、氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS/MS）等。由于食用油成分復(fù)雜，其中苯并(a)芘含量又較低，存在著大量的干擾物質(zhì)，因此靈敏度高，抗干擾強(qiáng)的檢測(cè)方法是必要的。GC-MS 法由于靈敏度不高，熱穩(wěn)定性較差，在很多時(shí)候使用受到了限制。高效液相色譜法定性能力不夠；表面增強(qiáng)拉曼光譜還不夠成熟，應(yīng)用較少，定量分析時(shí)還不夠準(zhǔn)確；免疫學(xué)檢測(cè)靈敏度不高；LC-MS/MS法卻能同時(shí)提高靈敏度和提升定性能力，目前運(yùn)用LC-MS/MS測(cè)定食用油脂中苯并(a)芘鮮有報(bào)道。

文章是針對(duì)食用油中苯并(a)芘快速檢測(cè)的應(yīng)用研究，可用于批量樣品的高通量篩查，提高工作效率，也可用于突發(fā)食品中毒分析，這些對(duì)保護(hù)人類健康具有重要的意義。本文建立的這種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定食用油脂中苯并(a)芘的方法，快速，簡(jiǎn)便，高效，定量準(zhǔn)確。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent-1260-6430液質(zhì)聯(lián)用儀。

石油醚，南京化學(xué)試劑股份有限公司；乙腈，德國(guó)默克有限公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：C18 50×2.1mm 1.8um 柱溫：40℃流動(dòng)相：乙腈/水＝80/20 流速：0.6ml/min 進(jìn)樣量：20uL

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的制備：準(zhǔn)確移取1mL 100μg/mL苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL 容量瓶，用乙腈定容至刻度線，-20℃保存?zhèn)溆谩１讲?a)芘-D12 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的制備：準(zhǔn)確移取1mL 100μg/mL 苯并(a)芘-D12 標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL 容量瓶，用乙腈定容至刻度線，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：將上述苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液逐級(jí)稀釋成濃度為0.5ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，內(nèi)標(biāo)苯并(a)芘-D12溶液逐級(jí)稀釋為濃度均為5.0 ng/mL。

1.4 樣品的處理

稱取約0.5g 樣品，加入10 mL 石油醚提取，超聲提取5min，再旋渦振蕩提取15min。離心，取上清。上清液全部轉(zhuǎn)移到經(jīng)活化了的固相萃取柱中，經(jīng)乙腈洗脫，濃縮至近干，再用乙腈定容至1.0mL，經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過濾，濾液上機(jī)分析測(cè)試。

1.5 樣品的測(cè)定

按照上述色譜條件進(jìn)樣20μL，以保留時(shí)間定性，內(nèi)標(biāo)法峰面積定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的母離子、子離子獲得

采用大氣壓化學(xué)電離法進(jìn)行母離子掃描和子離子掃描，獲得苯并(a)芘母離子253，子離子250，224，200。苯并(a)芘-D12母離子265，子離子259，見圖1。

圖1 苯并(a)芘與苯并(a)芘-D12的子離子

2.2 裂解電壓（Fragmentor）優(yōu)化

根據(jù)母離子掃描，得到裂解電壓在135左右，響應(yīng)最強(qiáng)。因此選擇裂解電壓為120，125，130，135，140，145進(jìn)一步分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)苯并(a)芘子離子200 與224 最優(yōu)Fragmentor 為135，250最優(yōu)Fragmentor為130，苯并(a)芘-D12子離子259最優(yōu)Fragmentor為145。

2.3 碰撞能量（Collision Energy）優(yōu)化

子離子掃描顯示，碰撞能量在70左右響應(yīng)最強(qiáng)。因此選擇碰撞能量為60，70，80，90，100五個(gè)能量?jī)?yōu)化，結(jié)果表明，苯并(a)芘子離子200 與224 最優(yōu)碰撞能量為90，250 最優(yōu)碰撞能量為70，苯并(a)芘-D12子離子259最優(yōu)碰撞能量為80。

2.4 駐留時(shí)間（Dwell）優(yōu)化

駐留時(shí)間長(zhǎng)短影響靈敏度，如果駐留時(shí)間太短，一段時(shí)間通過質(zhì)量分析儀到達(dá)檢測(cè)器的粒子數(shù)太少，不能忠實(shí)再現(xiàn)原始峰形，且響應(yīng)太小，駐留時(shí)間太長(zhǎng)，影響峰形。結(jié)合循環(huán)時(shí)間，選擇80ms，100ms，120ms，200ms 四個(gè)駐留時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明，駐留時(shí)間100ms最合適，見圖2。

圖2 駐留時(shí)間優(yōu)化圖譜

2.5 實(shí)際樣品分析

實(shí)際選擇6批次植物油測(cè)定，大豆油，花生油，芝麻油，調(diào)和油，菜籽油，葵花籽油，苯并(a)芘均有檢出，含量在0.4μg/kg～2.0μg/kg，均未超出限值?？赡苁且?yàn)樵谟土仙a(chǎn)過程，要先把油籽加熱炒香，炒制的過程中如果溫度控制不均勻，很容易有局部過熱，從而產(chǎn)生苯并(a)芘。

3 結(jié)語

建立的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定食用油中的苯并(a)芘，采用大氣壓化學(xué)電離，內(nèi)標(biāo)法定量，進(jìn)樣快，采集時(shí)間短，方法線性良好，簡(jiǎn)便，獲得了較好的分離效果和較高的靈敏度，此方法可用于食用油中苯并(a)芘的快速測(cè)定，同時(shí)也為其他食品中苯并(a)芘的測(cè)定提供參考。