上調(diào)Caprin-1對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性行為的影響

張 珩 陰金波 余 輝 李其平 李 想 周 政

膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，手術(shù)擴(kuò)大切除結(jié)合放療和化療是當(dāng)前的主要治療手段[1]。由于膠質(zhì)瘤存在腫瘤相關(guān)基因異質(zhì)性及腫瘤易感性，目前尚無(wú)十分有效的治療措施，因此較高的不良預(yù)后和復(fù)發(fā)使其成為顱內(nèi)腫瘤的一大難題[2-3]。膠質(zhì)瘤的發(fā)生是多基因、多步驟、多階段性的演變過(guò)程，在其癌變過(guò)程中涉及到許多基因的表達(dá)異常[4]。細(xì)胞周期相關(guān)蛋白-1(cell cycle associated protein 1，Caprin-1)為一種RNA 結(jié)合蛋白(RNA-binding protein，RBP)，與腫瘤的藥物耐受、增殖、遷移、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[5-6]。Capirn-1可選擇性結(jié)合多種與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和遷移有關(guān)的基因，包括cyclin D2、c-MYC等，促進(jìn)細(xì)胞快速進(jìn)入分裂期，縮短細(xì)胞分裂間期時(shí)間，從而促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖[7-8]。肝癌衍生生長(zhǎng)因子(hepatoma-derived growth factor，HDGF)在膠質(zhì)瘤中高表達(dá)，可介導(dǎo)PI3K/Akt和TGF-β等相關(guān)通路的調(diào)控，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移[9-10]。本文具體探討了上調(diào)Caprin-1對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性行為的影響，希望為闡明膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展與預(yù)測(cè)預(yù)后提供一個(gè)新的思路，現(xiàn)總結(jié)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

2014年2月至2019年2月選擇在閬中市人民醫(yī)院神經(jīng)外科收治的膠質(zhì)瘤患者78例的病灶組織與癌旁組織(癌組織邊緣外≥2 cm組織)。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡40～80歲；所有病例術(shù)前均未接受化療、放療及生物治療；臨床與隨訪(fǎng)資料完整；隨訪(fǎng)過(guò)程得到了患者或家屬的知情同意；醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)了此次研究；病理確診為膠質(zhì)瘤。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其它腫瘤；臨床與隨訪(fǎng)資料缺乏者。

1.2 調(diào)查資料

收集患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理類(lèi)型、臨床分期、局部侵襲、體重指數(shù)等參數(shù)。

1.3 免疫組化方法

嚴(yán)格按照所用抗體說(shuō)明書(shū)進(jìn)行染色，所有病理組織的染色均在同一條件下進(jìn)行，用PBS代替一抗設(shè)立陰性對(duì)照。

免疫組化具體過(guò)程：病理組織常規(guī)脫蠟水化、烘片、抗原修復(fù)、阻斷、加入一抗(按1∶5000稀釋抗Caprin-1抗體和抗Caprin-1抗體，4 ℃冰箱過(guò)夜)、加入二抗(室溫孵育30 min)、DAB顯色、蘇木精復(fù)染與封片，在免疫鏡下觀(guān)察。

Caprin-1和HDGF的表達(dá)主要位于細(xì)胞核中，以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色或棕褐色為陽(yáng)性染色。細(xì)胞染色百分率：0分：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞，1分：1%～25%陽(yáng)性細(xì)胞，2分：26%～50%陽(yáng)性細(xì)胞；3分：51%～75%陽(yáng)性細(xì)胞，4分：≥75%陽(yáng)性細(xì)胞；細(xì)胞染色強(qiáng)度：0分：未染色，1分：弱染色(淺棕黃色)，2分：中等染色(棕黃色)，3分：強(qiáng)染色(棕褐色)。以細(xì)胞染色百分率×細(xì)胞染色強(qiáng)度為染色記分，強(qiáng)陽(yáng)性(9～12分)，弱陽(yáng)性(4～8分)，陰性(0～3分)，(強(qiáng)陽(yáng)性+弱陽(yáng)性)/本組例數(shù)×100.0%=陽(yáng)性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.00統(tǒng)計(jì)軟件完成數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以樣本率、陽(yáng)性率示，計(jì)量資料的對(duì)比采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)的對(duì)比采用四格表資料的確切概率法或χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Caprin-1和HDGF表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比

病灶組的Capirn-1和HDGF表達(dá)陽(yáng)性率為85.9%和80.8%，顯著高于癌旁組的24.4%和28.2%(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 膠質(zhì)瘤患者不同組織的Capirn-1和HDGF表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比(例，%)

2.2 Caprin-1和HDGF表達(dá)陽(yáng)性率與臨床特征的相關(guān)性

在78例患者中，不同性別、年齡、體重指數(shù)、病理類(lèi)型膠質(zhì)瘤患者的Capirn-1和HDGF表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而不同腫瘤大小、臨床分期、是否局部侵襲膠質(zhì)瘤患者的Capirn-1和HDGF表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 Caprin-1表達(dá)與HDGF表達(dá)的相關(guān)性

在78例患者中，Spearman相關(guān)分析顯示Caprin-1表達(dá)與HDGF表達(dá)呈顯著正相關(guān)性(γ=0.543,P=0.000)。見(jiàn)表3。

3 討論

膠質(zhì)瘤是我國(guó)癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一，雖然該病的治療方法比較多，但是其預(yù)后生存率一直比較低，1年生存率不到20%，5年生存率不到10%[11]。并且部分患者首次診斷時(shí)已是局部晚期或轉(zhuǎn)移性疾病，失去了根治性手術(shù)切除的機(jī)會(huì)[12-13]。膠質(zhì)瘤的侵襲性比較強(qiáng)，其中細(xì)胞惡性增殖和腫瘤血管形成是膠質(zhì)瘤發(fā)生與發(fā)展的基礎(chǔ)，特別是膠質(zhì)瘤是個(gè)血供豐富的腫瘤，為此了解膠質(zhì)瘤血供發(fā)生的機(jī)制具有重要的價(jià)值[14]。

膠質(zhì)瘤的發(fā)生由多重因素引起，小RNA 基因、癌基因、抑癌基因在其中起著重要的作用[15]。Capirn-1的基因位于11號(hào)染色體上，編碼709個(gè)氨基酸，可促進(jìn)原位癌的生長(zhǎng)、肺部轉(zhuǎn)移，其也可與其他的RBPs 結(jié)合來(lái)影響相應(yīng)的靶向基因，抵抗腫瘤對(duì)放療和化療作用，也可誘導(dǎo)形成應(yīng)激顆粒，從而與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及藥物耐受密切相關(guān)[16]。而在非小細(xì)胞肺癌中，Capirn-1通過(guò)啟動(dòng)β-catenin信號(hào)通路，從而促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)和腫瘤生成作用[17]。Capirn-1通過(guò)與NF-kB p50的N端結(jié)合，進(jìn)而調(diào)控NF-k p50在細(xì)胞核的聚集和轉(zhuǎn)錄活性，從而促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖[18]。HDGF分子量約為40 kD，有240個(gè)氨基酸殘基組成，其N(xiāo)-末端和C-末端在促進(jìn)細(xì)胞增殖分裂活動(dòng)中分別發(fā)揮特殊的作用；C-末端區(qū)域在刺激DNA合成，負(fù)責(zé)調(diào)控細(xì)胞有絲分裂活動(dòng)發(fā)揮重要作用；N-末端主要負(fù)責(zé)促進(jìn)HDGF轉(zhuǎn)錄進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)[19]。已有研究證實(shí)HDGF在多種腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)，并可作為一個(gè)預(yù)后預(yù)測(cè)因素，同時(shí)HDGF的過(guò)度表達(dá)與腫瘤的復(fù)發(fā)、大小、血管和淋巴管浸潤(rùn)、分化程度、浸潤(rùn)深度、局部侵襲等顯著相關(guān)[20]。本研究病灶組的Capirn-1和HDGF表達(dá)陽(yáng)性率為85.9%和80.8%，顯著高于癌旁組的24.4%和28.2%。不同性別、年齡、體重指數(shù)、病理類(lèi)型膠質(zhì)瘤患者的Capirn-1和HDGF表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而不同腫瘤大小、臨床分期、局部侵襲膠質(zhì)瘤患者的Capirn-1和HDGF表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。當(dāng)前也有研究顯示Capirn-1可選擇性結(jié)合c-Myc，并參與p21、Ras 信號(hào)通路，可加速細(xì)胞進(jìn)入S期，促進(jìn)細(xì)胞增殖[21]。

膠質(zhì)瘤是指起源于神經(jīng)上皮組織來(lái)源的腫瘤，雖然該病的治療方法比較多，但是膠質(zhì)瘤患者復(fù)發(fā)率和死亡率依然比較高，而基因靶向治療可能是治療膠質(zhì)瘤的一種行之有效的方法[22-23]。本研究Spearman相關(guān)分析顯示膠質(zhì)瘤患者的Caprin-1表達(dá)與HDGF表達(dá)呈顯著正相關(guān)性(γ=0.543,P=0.000)。當(dāng)前也有研究顯示在體外或體內(nèi)過(guò)量表達(dá)Caprin-1 能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲能力，有助于腫瘤在缺氧的微環(huán)境中生存和增殖[24-25]。本研究也存在一定的不足，沒(méi)有從細(xì)胞與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型水平分析Capirn-1與HDGF相互作用，將在后續(xù)研究中進(jìn)行分析。

表3 膠質(zhì)瘤患者Caprin-1表達(dá)與HDGF表達(dá)的相關(guān)性/例

總之，Caprin-1在膠質(zhì)瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，也可影響HDGF的表達(dá)，與膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性行為顯著相關(guān)。