粘液型細(xì)菌的菌懸液配制及與非粘液型細(xì)菌的耐藥性分析

吉維民

(江蘇省寶應(yīng)縣人民醫(yī)院，江蘇 寶應(yīng))

0 引言

臨床實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常見到粘液型細(xì)菌生長，粘液型細(xì)菌較常見的有，肺炎克雷伯菌，銅綠假單胞菌，肺炎鏈球菌，少見的有，腦膜炎奈瑟菌，流感嗜血桿菌，金黃色葡萄球菌。粘液型細(xì)菌的粘液組成，主要是細(xì)菌的莢膜，由粘多糖構(gòu)成主要成份[1]，因?yàn)檎骋河衅涫杷?，?xì)菌懸濁液0.5 麥?zhǔn)蠁挝唬瑴?zhǔn)確配制有實(shí)際困難。我們根據(jù)多年的經(jīng)驗(yàn)，進(jìn)行一些實(shí)驗(yàn)，以便能在實(shí)驗(yàn)中有所發(fā)現(xiàn)，找出簡便可行的辦法。

1 材料和方法

取我院近年來培養(yǎng)出的，很明顯的粘液型細(xì)菌，用無菌棉簽沾取目標(biāo)菌，與無菌生理鹽水充分混勻，孵育一定時間進(jìn)行比濁，比濁儀使用梅里埃產(chǎn)品。配制一定濁度的粘液型細(xì)菌菌懸液，在37度孵育時間與濁度變化，如表1。常見粘液型細(xì)菌與非粘液型同期同種細(xì)菌，體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較，結(jié)果見表2。藥敏結(jié)果判讀按CLSIC2018，微生物實(shí)驗(yàn)操作按《全國臨床檢測操作規(guī)程》第4版操作規(guī)范。統(tǒng)計學(xué)方法：采用SSPS 20.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析。

2 結(jié)果

表1 主要粘液型細(xì)菌菌懸液在37℃孵育時間與濁度變化(n=20，濃度：麥?zhǔn)蠁挝?

結(jié)果表明：孵育30 分后，所配菌懸液，混合較均勻，可調(diào)至0.5麥?zhǔn)蠁挝?，無肉眼可見凝塊，統(tǒng)計學(xué)分析有顯著意義P＜0.05。沒有孵育的或孵育時間較短的樣本，不易形成均勻菌懸液，孵育時間過長，菌懸液的濃度不易掌握，臨床實(shí)驗(yàn)室操作起來也不方便。因此建議對粘液型細(xì)菌菌懸液的配制采用本方法。粘液狀細(xì)菌其折光強(qiáng)粘液樣的外層為莢膜層，莢膜是由疏水性多肽糖物質(zhì)構(gòu)成，是細(xì)菌的毒力因子。

3 討論

細(xì)菌在感染人體時，會產(chǎn)生或丟失一部份莢膜，也就是常說的細(xì)菌的毒力變異，在革蘭染色中，有一層厚厚的折光層，莢膜幫助細(xì)菌抵制外來因素，從而逃避藥物的作用[2]，使感染細(xì)菌的毒力增強(qiáng)，它又稱為毒力因子。我們在工作中發(fā)現(xiàn)，莢膜厚度與毒力呈正相關(guān)，而在實(shí)驗(yàn)檢測中，因?yàn)榕渲茟覞嵋号c普通易散于生理鹽水中的細(xì)菌，不一樣的是，直接做藥敏試驗(yàn)，無論是K-B 法還是MIC法，結(jié)果都有一定影響，通過孵育能使實(shí)驗(yàn)配制菌懸液操作容易些，還可使一部份細(xì)菌增加親水性，孵育與否的結(jié)果，兩者有一定差異[3]。按照本方法，使用生理鹽水配制，以防富營養(yǎng)物質(zhì)促使細(xì)菌分裂生長，使得濃度不易掌握，又能使得細(xì)菌分散開來，雖然不能洗脫外層莢膜，但能使細(xì)菌表層的莢膜變小。

粘液型病原菌，相對同種非粘液型對抗生素較敏感，在三代頭孢菌素上表現(xiàn)的更明顯，差異有顯著性，大多數(shù)抗生素相對粘液型細(xì)菌更敏感，總體來看還是比較接近[4]，粘液型細(xì)菌藥敏試驗(yàn)，一致性較難掌握，實(shí)驗(yàn)須更加細(xì)心，特別是懸制液的配制，起著很重要的作用。我們采取的方法能很好的解決這部分問題，具體規(guī)范化還需進(jìn)一步研究，以使實(shí)驗(yàn)重復(fù)性達(dá)到要求[5]。回顧性分析本院的粘液型細(xì)菌檢出率有增加趨勢。粘液層使細(xì)菌耐受環(huán)境的能力變強(qiáng)，對藥物滲透入細(xì)菌形成障礙，可表現(xiàn)為藥敏試驗(yàn)?zāi)退幮栽鰪?qiáng)。而實(shí)驗(yàn)室藥物統(tǒng)計分析并非如此，耐藥性分析的結(jié)果，反而是粘液型細(xì)菌較敏感，統(tǒng)計學(xué)分析有顯著意義P＜0.05。原因可能是粘液型細(xì)菌大多數(shù)是野生菌株所致。

表2 主要常見粘液型細(xì)菌與非粘液型同期同種細(xì)菌藥敏結(jié)果比較(耐藥率%)

據(jù)報道肺炎克雷伯菌的拉絲長度和它的毒力強(qiáng)度呈正相關(guān)[6]，我們工作中發(fā)現(xiàn)有一定道理。我們發(fā)現(xiàn)銅綠假單的水溶性色素和粘液呈負(fù)相關(guān)，水滴狀的銅綠少見明顯金屬光澤的色素，偶見有粘液樣的金黃色葡萄球菌，鏡下并不見像其它幾種水滴樣細(xì)菌有厚厚的折光層，根據(jù)本文可得出，經(jīng)過37℃孵育30 分鐘的菌懸液效果最好，因此，一般工作中可采用37℃孵育30 分鐘。有莢膜細(xì)菌大都屬野生菌株，且在多種標(biāo)本中都算病原菌，比如痰，分泌物等，臨床屬病原菌[7]，根據(jù)對這幾種臨床常見病原菌的耐藥性分析，區(qū)分粘液型與否對感染病原菌與否，對毒性分析，對藥物敏感性都有價值。

綜上所述，粘液型細(xì)菌是值得重視的病原菌，本文所用方法，所統(tǒng)計的結(jié)果，在臨床上用一定的應(yīng)用價值，對感染性疾病的治療，預(yù)后都有指導(dǎo)意義。