糖尿病合并急性心肌梗死病人血清環(huán)狀RNA-CDR1as表達(dá)及其臨床價(jià)值分析

惠麗超，邱 剛，趙 韌

近年來(lái)，隨著我國(guó)生活水平提高，人們飲食結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣改變，糖尿病患病率有所升高，此類(lèi)病人多伴血脂異常，以冠狀動(dòng)脈為代表的微血管極易受損，部分病人可出現(xiàn)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化，是合并急性心肌梗死(AMI)的基本病因，起病兇險(xiǎn)，死亡率高[1-2]。目前臨床多依賴病人癥狀、心電圖及心肌酶學(xué)結(jié)果進(jìn)行判斷，部分病人癥狀不明顯，心電圖和心肌酶學(xué)改變滯后，診斷較為困難，因此尋找針對(duì)性、敏感度及特異度更高的血液學(xué)指標(biāo)十分重要[3-4]。環(huán)狀RNA(circRNA)是一種新型非編碼RNA，其不含5′端帽子和3′端Poly(A)尾，而是由共價(jià)鍵直接形成閉環(huán)結(jié)構(gòu)，于部分植物類(lèi)病毒中首次發(fā)現(xiàn)，隨后在人HeLa細(xì)胞質(zhì)中相繼發(fā)現(xiàn)，但表達(dá)量極低，未引起足夠重視；隨著研究的不斷深入發(fā)現(xiàn)circRNA在基因表達(dá)調(diào)控中占有重要地位，與人類(lèi)疾病密切相關(guān)[5-6]。小腦變性相關(guān)蛋白1 反義轉(zhuǎn)錄物(cerebellar degeneration-related protein 1 antisense，CDR1as)是人X型染色體CDR1基因外顯子反向剪接而成的circRNA，通過(guò)與miR-7結(jié)合參與多種疾病的發(fā)生發(fā)展，在腫瘤研究中較多；在心血管方面，Geng等[7]在研究小鼠心肌梗死時(shí)發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)CDR1as可促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡，提示其與心血管疾病存在一定關(guān)系，但相關(guān)的臨床研究報(bào)道較少。本研究選取175例不同糖耐量合并AMI病人進(jìn)行研究，探討環(huán)狀RNA-CDR1as(circRNA-CDR1as)在糖尿病合并AMI病人中的表達(dá)情況，并分析其早期診斷價(jià)值、療效評(píng)估價(jià)值及近期預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2014年10月—2018年10月于錦州市中心醫(yī)院收治的175例AMI病人作為研究對(duì)象，符合歐洲心臟病學(xué)會(huì)(ESC)和美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)(ACC)聯(lián)合制定的AMI診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除合并惡性心律失常、嚴(yán)重電解質(zhì)紊亂、肝腎功能?chē)?yán)重受損、合并惡性腫瘤、癥狀出現(xiàn)24 h內(nèi)未入院者及臨床資料不全者。根據(jù)口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)將175例病人分為3組：糖尿病合并急性心肌梗死(DM-AMI)組、糖耐量異常合并急性心肌梗死(IGT-AMI)組和糖耐量正常合并急性心肌梗死(NGT-AMI)組。同期50名健康體檢者作為健康對(duì)照組。DM-AMI組80例，男49例，女31例；年齡(51.27±11.34)歲；吸煙41例。IGT-AMI組55例，男31例，女24例；年齡(52.82±11.93)歲；吸煙28例。NGT-AMI組40例，男24例，女16例；年齡(50.92±10.85)歲；吸煙23例。健康對(duì)照組50名，男28名，女22名；年齡(51.12±11.07)歲；吸煙29名。4組性別、年齡及吸煙等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)，并獲得錦州市中心醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 血清circRNA-CDR1as檢測(cè) ①標(biāo)本收集：分別于治療前后抽取研究對(duì)象5 mL空腹靜脈血于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，顛倒混勻抗凝劑，4000 r/min離心5min，留取上清血漿于EP管中，并保存于-80 ℃冰箱中。②FQ-PCR檢測(cè)：先用TRIzol試劑盒提取總RNA，后將其置于Thermo NanoDrop3000紫外分光光度計(jì)測(cè)量其濃度及純度，確保OD260/OD280比值在1.8～2.0后進(jìn)行cDNA合成(參考反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)，由上海吉?jiǎng)P科技有限公司幫助完成)，后再以cDNA為模板進(jìn)行FQ-PCR(GAPDH為內(nèi)參，具體參照SYBR Ⅱ試劑盒說(shuō)明書(shū))，檢測(cè)儀器為美國(guó)ABI公司實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)儀，以2-△△Ct表示circRNA-CDR1as相對(duì)表達(dá)水平。

1.2.2 全球急性冠狀動(dòng)脈事件注冊(cè)(GRACE)評(píng)分 根據(jù)年齡、心率、收縮壓、血肌酐、Killip分級(jí)及危險(xiǎn)因素(入院時(shí)心臟停搏、ST 段改變、心肌壞死標(biāo)記物升高)計(jì)算GRACE 評(píng)分，根據(jù)GRACE評(píng)分情況將其分為低危(≤108分)、中危(108～140分)和高危(≥140分)[8]。

1.2.3 資料收集 收集病人臨床資料，包括臨床特征(年齡、性別、吸煙史、高血壓病史、血壓、心率等)、輔助檢查結(jié)果及病人住院期間生存情況。

2 結(jié) 果

2.1 4組血清circRNA-CDR1as比較 DM-AMI組、IGT-AMI組、NGT-AMI組和健康對(duì)照組血清circRNA-CDR1as分別為4.98±1.56、4.57±1.28、2.81±0.69和1.02±0.25，4組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=18.342，P=0.000)，由高到低依次為 DM-AMI組、IGT-AMI組、NGT-AMI組和健康對(duì)照組。

2.2 血清circRNA-CDR1as對(duì)糖尿病合并AMI的診斷價(jià)值 繪制ROC曲線，曲線下面積是0.819(95%CI0.694～0.998，P=0.018)，截?cái)嘀禐?.28，敏感度和特異度分別為98.3%和60.0%。詳見(jiàn)圖1。

圖1 血清circRNA-CDR1as診斷糖尿病合并AMI的ROC曲線圖

2.3 血清circRNA-CDR1as的療效評(píng)估價(jià)值 與治療前比較，治療后DM-AMI組、IGT-AMI組和NGT-AMI組血清circRNA-CDR1as均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；DM-AMI組、IGT-AMI組和NGT-AMI組血清circRNA-CDR1as治療前后差值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=8.975，P<0.05)，其改變程度由大到小依次為DM-AMI組、IGT-AMI組和NGT-AMI組。詳見(jiàn)表1。

表1 各組治療前后血清circRNA-CDR1as比較(±s)

與同組治療前比較，①P<0.05。

2.4 血清circRNA-CDR1as水平、GRACE評(píng)分與生預(yù)后的關(guān)系 住院期間，175例AMI病人中35例死亡，140例生存。與生存病人比較，死亡病人血清circRNA-CDR1as水平明顯升高，且GRACE評(píng)分中危+高危者占比較高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 血清circRNA-CDR1as水平和GRACE評(píng)分與預(yù)后的關(guān)系

2.5 血清circRNA-CDR1as水平與GRACE評(píng)分的相關(guān)性 經(jīng)Spearman法分析顯示，血清circRNA-CDR1as水平與GRACE評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.729，P<0.05)。

3 討 論

近年來(lái)，糖尿病的發(fā)病率不斷增長(zhǎng)，以2型糖尿病為主，預(yù)計(jì)2030年全球2型糖尿病人將達(dá)4.39億人，主要集中在發(fā)展中國(guó)家，以中老年人為主[9]。而糖尿病病人極易合并AMI，近遠(yuǎn)期死亡率均較高，早期明確診斷并進(jìn)行危險(xiǎn)分層以選取最佳治療方式對(duì)減少病人并發(fā)癥及改善預(yù)后十分重要[10]。GRACE是目前預(yù)測(cè)急性冠脈綜合征近遠(yuǎn)期死亡率及主要心血管事件的重要方法，被多個(gè)臨床指南認(rèn)可并推崇[11]。circRNA進(jìn)化過(guò)程中高度保守，在人類(lèi)不同組織器官中穩(wěn)定存在，且不易降解，主要通過(guò)充當(dāng)“miRNA海綿”、調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄、調(diào)控蛋白生成、翻譯蛋白質(zhì)及調(diào)控蛋白質(zhì)翻譯等影響疾病的發(fā)生及進(jìn)展[12]。CDR1as首次被Memczak等[13]發(fā)現(xiàn)，序列相對(duì)保守，含有74個(gè)與miR-7結(jié)合的位點(diǎn)，可與miR-7競(jìng)爭(zhēng)調(diào)控miR-7靶基因和靶蛋白活性；有研究發(fā)現(xiàn)，miR-7a/b靶基因多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[Poly(ADP-ribose)polymerase-1，PARP-1]和特異性蛋白1(specific protein 1，SP1)在AMI發(fā)展中可保護(hù)心肌細(xì)胞不受損害，而體外過(guò)表達(dá)CDR1as可增加心肌梗死面積，與miR-7作用相反[7]。

本研究結(jié)果顯示，DM-AMI組、IGT-AMI組、NGT-AMI組和健康對(duì)照組血清circRNA-CDR1as比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且呈依次降低趨勢(shì)，這與Zhang等[14]研究結(jié)果基本一致，說(shuō)明circRNA-CDR1as與糖尿病合并AMI具有一定的關(guān)聯(lián)性。隨后，繪制血清circRNA-CDR1as診斷糖尿病合并AMI的ROC曲線圖發(fā)現(xiàn)，曲線下面積為0.819(95%CI0.694～0.998，P<0.05)，截?cái)嘀禐?.28，敏感度和特異度分別為98.3%和60.0%，提示血清circRNA-CDR1as診斷糖尿病合并AMI的敏感性較好，但特異度較低，可考慮合并心肌酶學(xué)及心電圖等提高其特異性。本研究發(fā)現(xiàn)，治療后病人血清circRNA-CDR1as水平明顯降低(P<0.05)，其改變程度由大到小依次為DM-AMI組、IGT-AMI組和NGT-AMI組，說(shuō)明血清circRNA-CDR1as改變?cè)谔悄虿『喜MI中更明顯，可作為糖尿病合并AMI病人療效評(píng)估的有效指標(biāo)。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)死亡者血清circRNA-CDR1as水平和GRACE評(píng)分中高危病人占比明顯高于生存病人(P<0.05)，且血清circRNA-CDR1as水平與GRACE評(píng)分呈明顯正相關(guān)(r=0.729，P<0.05)，提示與GRACE評(píng)分一樣，血清circRNA-CDR1as水平檢查可作為急性冠脈綜合征預(yù)后估測(cè)的重要指標(biāo)，但本研究未探討兩者聯(lián)合的預(yù)測(cè)價(jià)值，有待后續(xù)繼續(xù)研究。

綜上所述，AMI病人血清circRNA-CDR1as水平明顯升高，糖耐量不同其表達(dá)各不相同，有望成為糖尿病合并AMI病人早期診斷、療效評(píng)估及住院期間死亡預(yù)測(cè)的有效指標(biāo)。