五味子保肝泡騰顆粒劑的制備工藝研究

長春職業(yè)技術(shù)學院食品生物技術(shù)分院，吉林 長春 130033

五味子為木蘭科植物五味子[Schisandrachinesis(Turcz.)Bsill.]的干燥成熟果實，主產(chǎn)于東北和華北地區(qū)，具有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心之功效[1]。現(xiàn)代研究表明，五味子有效成分為木脂素類化合物，目前已從五味子中分離出32種木脂素單體，其中7種單體分別為五味子甲素、乙素、丙素、醇甲、醇乙、酯甲和酯乙，均屬于木脂素成分中的聯(lián)苯環(huán)辛烯類化合物[2-4]，經(jīng)藥理研究和臨床證明，均有降低肝炎患者血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平的作用，其中以五味子乙素作用最強，其次為醇甲、酯甲等[5]。20世紀70年代初我國開發(fā)出治療肝炎藥物聯(lián)苯雙酯，近年來制劑護肝片是我國用于治療肝損傷的兩種常用藥物，具有疏肝理氣、健脾、消食、降低轉(zhuǎn)氨酶的作用，用于慢性肝炎及早期肝硬化等[6-7]。

泡騰顆粒劑是一種較為新型的顆粒劑，其內(nèi)含有泡騰崩解劑，即有機酸和碳酸氫鈉，遇水后酸和堿會發(fā)生化學反應，并釋放大量二氧化碳使顆粒劑迅速崩解，顯效快，二氧化碳氣體刺激味蕾，產(chǎn)生碳酸飲料的風味，增強人們對藥物的順應性。目前，現(xiàn)代人酒精肝、脂肪肝等肝臟疾病發(fā)病率持續(xù)增高，本研究以具有補肝腎功效的五味子為對象，研制具有保肝作用的五味子保健泡騰顆粒劑，可作為現(xiàn)代人保肝護肝的日常保健用品。

1 儀器與試藥

1.1 儀器與設備 LC-20A 高效液相色譜儀(島津公司)；AUY220 分析天平(島津公司)；BYS-25 型高效濕法造粒機(哈爾濱市北方制藥設備制造有限公司)。

1.2 藥品與試劑 北五味子飲片購吉林省延邊合同飲片廠，產(chǎn)地延吉，為木蘭科植物五味子[Schisandrachinesis(Turcz.)Bsill.]的干燥成熟果實；五味子乙素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供；檸檬酸、NaHCO3、乳糖、聚乙二醇6000(PEG-6000)均為藥用級輔料；安賽蜜為食品添加劑；乙腈為色譜純；其它試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 五味子浸膏的制備 取五味子果實熱水浸泡去掉果皮，在60℃烘干，碾成粉末，取粉末加3倍量95%乙醇回流提取2次，每次3h，過濾，合并濾液，減壓濃縮成浸膏(相當于1g浸膏含有1g生藥)，干燥，制成浸膏粉，置-80℃冰箱保存，備用。

2.2 輔料及制備工藝 檸檬酸為酸源；碳酸氫鈉為堿源；PEG-6000為包裹劑；乳糖為稀釋劑；安賽蜜為矯味劑；3% 聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)無水乙醇溶液作為黏合劑。將PEG-6000 加熱熔融后，加入碳酸氫鈉，攪拌均勻，冷卻后，粉碎成細粉(過80目篩)；另將檸檬酸、乳糖等輔料分別過80目篩，混勻；將五味子及輔料粉混合均勻，用乙醇制軟材，16目篩制顆粒，濕顆粒于50℃干燥，整粒，經(jīng)含量測定合格后分裝成10g/包，即得。

2.3 高效液相色譜測定五味子乙素含量

2.3.1 五味子乙素含量測定方法

①色譜條件:Alltima C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈-水(10∶90)；流速1.2mL / min；紫外波長254 nm；柱溫為室溫。

②對照品溶液的制備:精密稱取五味子乙素對照品約10mg，用色譜甲醇定容至100 mL，搖勻，通過孔徑為0.22 μm的微孔濾膜過濾，續(xù)濾液備用。

③供試品溶液制備:取各批次樣品適量，研細，精密稱取2g，置100mL 量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度，超聲振蕩30min，10000 r·min-1離心5 min，放冷至室溫，微孔濾膜過濾，即得。

④測定法:分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μL，注入高效液相色譜儀，測定，即得。本品每包/10g計含五味子以五味子乙素(C23H28O6)，不得少于250mg。

⑤標準曲線:精密稱取五味子乙素對照品，加入甲醇分別配成0.05mg/mL、0.100 mg/mL、0.150mg/mL、0.200 mg/mL和0.250 mg/mL對照品溶液。分別進樣各10 μL，計算五味子乙素的峰面積，以五味子乙素的質(zhì)量濃度為橫坐標，其相應的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，求得線性回歸方程為：Y=1415.5X-32.81(R2= 0.999 9)。結(jié)果表明：五味子乙素在0.05 ～0.250mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 五味子乙素含量測定結(jié)果

①加樣回收試驗:取同一批號樣品 5份，精密稱定，分別放入錐形瓶中，各加入五味子乙素對照品溶液(0.1560 mg/mL)10mL，然后照供試品溶液的制備方法處理，進樣測試其中五味子乙素的含量，計算回收率，測定結(jié)果見表1。

表1 五味子乙素加樣回收試驗結(jié)果

②穩(wěn)定性試驗:取供試品溶液一份，于配制后的0h、2h、4h、6h和8h，分別精密吸取20 μL進樣測試其中五味子乙素的峰面積，計算峰面積平均值為10575.5，RSD為0.86%，結(jié)果表明泡騰顆粒中保肝成分五味子乙素在8h內(nèi)基本穩(wěn)定。

③重現(xiàn)性試驗:取同一批號的供試品5份，分別精密稱定，然后按照供試品溶液的制備方法處理，并依照色譜條件進樣測試其中五味子乙素的峰面積。計算其中五味子乙素的含量，測定結(jié)果見表2。求得其平均含量為26.1 mg/g，RSD為0.73%。

表2 重現(xiàn)性試驗結(jié)果

2.4 工藝優(yōu)化

2.4.1 正交試驗設計 采用 L9(34) 表進行實驗來優(yōu)化泡騰顆粒劑中聚乙二醇6000的用量及碳酸氫鈉與檸檬酸最佳配比、PVP-K30用量等。所選因素水平(見表3)，評價指標為泡騰顆粒劑的溶化時間(s)和粒度。正交試驗結(jié)果見表4，粒度及溶化時間方差分析結(jié)果見表5、表6。

表3 因素水平

表4 處方優(yōu)選正交試驗結(jié)果

表5 粒度方差分析

表6 溶化時間方差分析

由方差分析結(jié)果可知，對指標粒度，因素A的影響有顯著性，參考極差分析結(jié)果，選取A2水平，BC因素的水平任選；對指標粒度，因素C的影響有顯著性，參考極差分析結(jié)果，選取C3水平，AB因素的水平任選，綜合分析確定泡騰顆粒的最佳工藝條件是A2B2C3。既檸檬酸與碳酸氫鈉的配比0.8∶1，聚乙二醇

6000量為3%，PVP-K30的量為2.0%。

2.4.2 優(yōu)化處方驗證 將優(yōu)化的五味子泡騰顆粒劑處方按“1.3.2項”下制備條件進行 3 批試驗，所制得的顆粒劑按 2.1.1 項下評價方法進行驗證，見表7。結(jié)果表明樣品各項指標的檢測結(jié)果均符合標準規(guī)定，產(chǎn)品合格，質(zhì)量穩(wěn)定，證明該處方的優(yōu)化合理、可行。

表7 處方優(yōu)化驗證結(jié)果

3 結(jié)論

五味子浸膏粉有較強的吸濕性，受潮后酸源和二氧化碳源會發(fā)生泡騰反應，導致成品失去泡騰效果，這也是長期以來五味子泡騰顆粒劑研制受阻的原因，為此，本研究采用PEG6000包裹二氧化碳源，有效地隔離了酸源與二氧化碳源，保證制劑的穩(wěn)定性。還在制劑中選擇吸濕性較弱的乳糖作為稀釋劑，采用 PVP-K30 無水乙醇溶液制粒，并降低生產(chǎn)環(huán)境的濕度等方法，來提高五味子護肝保健泡騰顆粒的生產(chǎn)和使用中的穩(wěn)定性。

本研究采用正交試驗設計以泡騰顆粒的粒度和溶化時間為指標綜合分析得到五味子泡騰顆粒的最佳生產(chǎn)工藝條件。同時采用精密度較高的高效液相色譜法檢測泡騰顆粒中的五味子乙素含量及其穩(wěn)定性，實現(xiàn)了對五味子泡騰顆粒中保肝成分的質(zhì)量控制，保障了產(chǎn)品的有效性。