苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯混合物對山藥炭疽病菌的聯(lián)合毒力測定及大田藥效

陳 建，李信申，范勁松，胡 鍵，李湘民，華菊玲，沈愛喜*

（1.江西省農業(yè)科學院 植物保護研究所，江西 南昌330200；2.江西省瑞昌市植保植檢站，江西 瑞昌332200；3.江西省瑞昌市范鎮(zhèn)農業(yè)技術推廣綜合站，江西 瑞昌332225）

【研究意義】山藥（Dioscorea oppos i te Thunb）是薯蕷科植物，又稱薯蕷，是我國藥食兼用的重要經濟作物之一。山藥在我國已有2 000多年的栽培歷史[1]，在我國南、北方及西南等地都有大面積栽培[2-5]，世界各地種植的品種大約有600種[6]。隨著山藥種植面積及復種指數(shù)提高，山藥種植中各類病害發(fā)生越趨頻繁和嚴重[7]。在全球范圍內由炭疽病菌引起的山藥炭疽病是制約山藥生產的主要因素[8-9]，為生產中發(fā)病最廣、最迅速、最易爆發(fā)成災的病害，造成山藥地上植株枯葉、死蔓甚至整株枯死，致使山藥產量嚴重下降甚至絕收，極大制約了山藥規(guī)?；a發(fā)展。目前生產上化學藥劑防治山藥炭疽病發(fā)揮著至關重要的作用。然而，長期、單一使用化學藥劑將使得病原菌不斷產生抗藥性，最終導致防治效果的下降，輪換使用不同作用機制的殺菌劑或混配制劑將有效地延緩病原菌抗藥性的產生?！厩叭搜芯窟M展】朱春暉等[10]研究了嘧菌酯與苯醚甲環(huán)唑混劑對西瓜炭疽病的作用效果，嘧菌酯與苯醚甲環(huán)唑以1∶2混配時效果最佳，對瓜類炭疽病菌菌絲生長的共毒系數(shù)（C T C）系數(shù)為242.64。張帥等[11]采用菌絲生長速率法測定11種殺菌劑對祁山藥炭疽病菌的抑制作用，室內毒力測定結果表明吡唑醚菌酯的EC50為0.040 6 mg/mL，苯醚甲環(huán)唑的EC50為1.281 2 mg/mL。張帥等[12]測定了苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯及其不同比例混合物對炭疽病菌的毒力，結果表明苯醚甲環(huán)唑與吡唑醚菌酯質量比為2∶1的混合物對抑制菌絲生長增效最為明顯，增效系數(shù)為2.41。在田間藥效試驗中，2種藥劑2∶1混用對祁山藥炭疽病的防效明顯，增產率為45.02%。黃婷[13]通過測定不同殺菌劑對山藥炭疽病病菌的毒力，得出325 g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑的EC50為0.804 0，250 g/L吡唑嘧菌酯乳油的EC50為2.600 6。張蕊蕊等[14]測定了嘧菌酯與苯醚甲環(huán)唑及2者的5個配比對水稻稻瘟病的室內毒力，并按最佳配比配制成制劑進行田間試驗，結果表明當嘧菌酯與苯醚甲環(huán)唑質量分數(shù)比為5∶2時，共毒系數(shù)為142.99，表現(xiàn)最大增效作用，且在田間試驗中該比例對水稻稻瘟病具有良好的防治效果。目前未見有苯醚甲環(huán)唑與嘧菌酯及其不同比例混合對山藥炭疽病菌的毒力報道?！颈狙芯壳腥朦c】為解決生產中山藥炭疽病化學防治的技術難題，開展苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯不同配方對山藥炭疽病菌的聯(lián)合毒力測定及大田藥效試驗?！緮M解決的關鍵問題】通過室內篩選和田間藥效試驗，明確苯醚甲環(huán)唑與嘧菌酯最佳配比，為新產品的開發(fā)提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試菌株 山藥炭疽病原菌從2018年10月從瑞昌范鎮(zhèn)山藥炭疽病葉上分離所得。經分離，柯赫氏法則驗證，確認為膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeospori oid es），菌種保存于4℃冰箱中，用時于PDA平板活化。

1.1.2 供試藥劑 97%苯醚甲環(huán)唑、97%嘧菌酯，生產商上海安譜實驗科技股份有限公司。250 g/L吡唑醚菌酯乳油，巴斯夫植物保護（江蘇）有限公司；250 g/L苯醚甲環(huán)唑乳油，瑞士先正達作物保護有限公司；250 g/L嘧菌酯懸浮劑，先正達南通作物保護有限公司，80%代森錳鋅可濕性粉劑，陶氏益農農業(yè)科技（中國）有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 殺菌劑對瑞昌山藥炭疽病菌的室內毒力測定 采用菌絲生長速率法測試定殺菌劑的抑菌作用[15]，先用甲醇分別將苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯溶解后配制成質量濃度為5 mg/mL母液,再將其按質量比混合配制，得到不同配比混合液。用5 mm直徑打孔器在長滿菌絲的PDA平板上打取菌餅，移入不同質量濃度（0，0.2，1，5，25，125μg/mL）[16-17]的含藥平板中央，以不含藥的PDA平板為對照，每處理3次重復，置于25℃恒溫培養(yǎng)7～10d后，采用十字交叉法測量菌落直徑，根據以下公式計算各不同藥劑處理對菌落生長的抑制率。

1.2.2 兩種殺菌劑聯(lián)合毒力評價 采用Wadley法[18]進行評價。EC50（th）=（a+b）/［a/EC50（A）+b/EC50（B）］；增效系數(shù)（SR）=E C50（th）/EC50（ob）。A、B分別代表兩種藥劑，a、b分別代表藥劑的配比，ob為實際觀察值，th為理論值。SR＞1.5為增效作用，S R=0.5～1.5為相加作用，SR＜0.5為拮抗作用。

1.2.3 殺菌劑對瑞昌山藥炭疽病菌的大田藥效試驗 田間試驗于2019年8月在江西省瑞昌市范鎮(zhèn)進行。山藥種薯在種植地過冬的種植方式栽種，開始試驗時山藥炭疽病零星發(fā)生，處于發(fā)病初期，每畝種植密度為3 000株。試驗共設8個處理（均按有效成分計）：250 g/L苯醚甲環(huán)唑乳油（EC），250 g/L嘧菌酯懸浮劑（SC），250 g/L苯醚甲環(huán)唑乳油EC和250 g/L嘧菌酯懸浮劑（SC）混配（質量比1∶1.6、1∶2、1∶3），250 g/L吡唑醚菌酯乳油（EC），80%代森錳鋅可濕性粉劑（WP）和清水對照。試驗小區(qū)采用隨機區(qū)組排列，每組處理重復3次，小區(qū)面積為24 m2。本試驗共施藥3次，第1次藥時間為2019年8月20日，第2次施藥為8月27日，第3次施藥為9月4日，采用背負式電動噴霧器施藥，各小區(qū)均勻噴霧。本試驗共進行2次病情調查：在第3次施藥后7d和14d調查，每小區(qū)隨機4點取樣，每點調查3株，每株上中下各調查10片葉。記錄病葉數(shù)和病級數(shù)。根據山藥葉片病斑面積占整個葉面積的百分率進行病情分級，病情分級標準[19]如下：0級：無病斑；1級：病斑面積占整個葉面積的5%以下；3級：病斑面積占整個葉面積的6%～10%；5級：病斑面積占整個葉面積的11%～25%；7級：病斑面積占整個葉面積的26%～50%；9級：病斑面積占整個葉面積的51%以上。

CK0與Pt0分別為藥前空白對照區(qū)及藥劑處理區(qū)的病指；CK1與Pt1分別為藥后空白對照區(qū)及藥劑處理區(qū)的病指。

1.3 數(shù)據處理

試驗數(shù)據采用DPS 7.05版進行統(tǒng)計分析，求出毒力回歸方程、相關系數(shù)和EC50值。用Excel計算山藥炭疽病菌大田藥效試驗的病情指數(shù)及防效，再經DPS軟件采用鄧肯新復極差法進行差異顯著性檢驗。

2 結果與分析

2.1 苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯混合物對山藥炭疽病菌絲的生長抑制作用

由表1可知，苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯不同配比的混合物及單劑對炭疽病菌菌絲生長表現(xiàn)不同程度抑制作用。其中D+A（1∶1.6）效果最好，E C50值為2.88μg/mL；D+A（1.3∶1）、D+A（1∶2）效果次之，EC50值分別為3.42μg/mL和4.89μg/mL，D+A（1.6∶1）抑制效果最差，E C50值達17.10μg/mL。

表1 苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯混合物對山藥炭疽病菌菌絲的生長抑制作用Tab.1 Inhibitory effect of difenoconazole and azoxystrobin mixtures on mycelial growth of Colletotrich um gl oeosporioid es

圖1 苯醚甲環(huán)唑對山藥炭疽病原菌的毒力測定Fig.1 Virulence determination of difenoconazole on Colletotri chum gloeospori oi des

圖2 嘧菌酯對山藥炭疽病原菌的毒力測定Fig.2 Virulence determination of azoxystrobin on Colle totr ichum gl oe osporioid es

圖3 苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯混劑D+A（1：1.6）對山藥炭疽病原菌的毒力測定Fig.3 Virulence determination of difenoconazole and azoxystrobin mixtures（1：1.6）on Colle totr ic hum gl oe osporioid es

2.2 苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯混合物對山藥炭疽病菌絲的聯(lián)合毒力測定

苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯不同質量配比的混合物對炭疽病菌菌絲聯(lián)合毒力測定表明，質量比1∶1.6、1∶2、1.3∶1混合后對炭疽病菌菌絲生長均有增效作用，質量比1∶2.7、1.6∶1混合后對炭疽病菌菌絲生長具有相加作用。其中質量比1∶1.6效果最好，增效系數(shù)為4.75；1∶2、1.3∶1效果次之，增效系數(shù)分別為2.73、3.58。（表2）。

表2 苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯混合物對山藥炭疽病菌聯(lián)合毒力Tab.2 Co-toxicity of difenoconazole and azoxystrobin mixtures on Coll et otrichum gloeos por ioides

2.3 不同藥劑對瑞昌山藥炭疽病病菌的大田防效

大田試驗結果表明，供試藥劑對瑞昌山藥炭疽病均有一定抑制效果。第3次藥后7d和14d，250 g/L苯醚甲環(huán)唑EC和250 g/L嘧菌酯SC混用的防效均顯著性高于250 g/L嘧菌酯SC和80%代森錳鋅WP的防效。第3次藥后7d，250 g/L苯醚甲環(huán)唑EC和250 g/L嘧菌酯SC混用的防效分別為70.56%、66.79%、65.46%；第3次藥后14d，250 g/L苯醚甲環(huán)唑EC和250 g/L嘧菌酯SC混用的防效分別為66.54%、61.08%、60.91%，防效高于其他藥劑處理（表3）。

表3 不同藥劑對瑞昌山藥炭疽病病菌的大田防治效果Tab.3 Field trialscontrol efficacy of fungicides on yam athracnose

3 討 論

植物病原物抗藥性的進化對農作物保護造成了持續(xù)的威脅[20]，長期、單一使用化學藥劑極易引發(fā)抗藥性病害的大發(fā)生，進而導致藥劑防效下降，化學防治的失敗。國內外有關病原菌對苯醚甲環(huán)唑的抗藥性鮮有報道，但對嘧菌酯的抗藥性有過報道。何秀娟等[21]檢測了來自湖北羅田板栗產區(qū)14株栗疫病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性，結果表明苯醚甲環(huán)唑對14株栗疫病菌株EC50范圍為0.027 9～0.124 0μg/mL，平均為0.064 5μg/mL。劉娟等[22]測定了106株蘋果樹腐爛病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性，結果表明不同菌株的EC50區(qū)間在0.003～0.123μg/mL，敏感性頻率分布呈連續(xù)性單峰曲線，同時發(fā)現(xiàn)不同地理來源、不同年份的菌株對苯醚甲環(huán)唑的敏感性有顯著性差異。索朗拉姆[23]選用對植物病原菌有顯著抑制作用但作用機制不同的苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯兩種藥劑進行了蘋果樹腐爛病菌室內藥劑敏感性檢測，苯醚甲環(huán)唑對48株蘋果樹腐爛病菌的E C50值范圍為0.000 141～0.193μg/mL，平均值為0.035μg/mL。48株蘋果樹腐爛病菌對嘧菌酯敏感性檢測，EC50值范圍為0.051～0.248μg/mL，平均值是0.155μg/mL。嘧菌酯對該病原菌的EC50值明顯高于苯醚甲環(huán)唑，說明該病原菌對苯醚甲環(huán)唑較嘧菌酯敏感。本項研究結果也表現(xiàn)了相一致的趨勢，在本項研究中，山藥炭疽病菌對苯醚甲環(huán)唑的EC50值為10.21μg/mL，對嘧菌酯的E C50值為16.48μg/mL。王喜娜[24]對來自遼寧省北鎮(zhèn)市等8個我國主要葡萄生產區(qū)域采集2373個葡萄霜霉菌標本進行了檢測，結果顯示抗性菌株共1567株，敏感菌株806株，總抗性頻率為66%。周連柱[25]對采自我國2017—2018年間18個葡萄產區(qū)1 515株葡萄霜霉病菌進行了嘧菌酯的抗藥性檢測，發(fā)現(xiàn)2017、2018年份我國葡萄霜霉病菌對嘧菌酯的總體抗性頻率分別為55.4%和67.4%。

為提高苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯的防治效果，延長兩類殺菌劑的使用壽命、擴大殺菌譜、應對多病并發(fā)、獲得增效作用，國內外不少企業(yè)將以上兩類殺菌劑混配，開發(fā)出新的殺菌劑品種，廣泛地運用防治多種作物的真菌病害。以防治西瓜炭疽病為例，國內登記的以苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯單劑混配的品種有325 g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑（125∶200）、48%苯甲·嘧菌酯懸浮劑（18∶30）、33%苯甲·嘧菌酯懸浮劑（14∶19）、35%苯甲·嘧菌酯懸浮劑（15∶20）、325 g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑（217∶108）、26%苯甲·嘧菌酯懸浮劑（10∶16）共6個配方品種，但絕大多數(shù)企業(yè)登記的是325 g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑（125∶200）這個品種，這與本項研究相一致，當苯醚甲環(huán)唑與嘧菌酯配方比例為1∶1.6（125∶200=1∶1.6）時，增效系數(shù)最大，大田對山藥炭疽病的防效最好。

炭疽病是山藥上最常見的病害之一，目前國內外有7家企業(yè)在我國登記了殺菌劑防治該病害，其中6家企業(yè)登記的都是咪鮮胺單劑，未見有苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯對山藥炭疽病防治的單劑或混劑。本研究表明，苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯混配對山藥炭疽病的防治具有明顯的增效作用，這一研究結果或許為企業(yè)登記殺菌劑防治山藥炭疽病提供了一個新的思路。