SPF 金黃倉鼠乳主要營養(yǎng)成分及氨基酸組成分析

范方玲, 夏 爽, 甘 露, 夏 放

(成都生物制品研究所有限責(zé)任公司, 成都610023)

金黃倉鼠(Mesocricetus auratus; Golden hamster)又稱敘利亞倉鼠，屬哺乳綱嚙齒目倉鼠科倉鼠亞科動(dòng)物，來源于1930年從敘利亞Aleppo地區(qū)捕獲的3 只野生倉鼠。世界上育成的金黃倉鼠近交系38 個(gè), 部分近交系8 個(gè), 突變系17 個(gè)，封閉群38個(gè)，目前使用的金黃倉鼠大部分屬于封閉群[1]。金黃倉鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的時(shí)間短于大鼠和小鼠，但現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生理學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)、傳染病學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)和營養(yǎng)學(xué)等諸多生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域[2]。本公司于2003 年率先在國內(nèi)建立疫苗生產(chǎn)用SPF 金黃倉鼠種群，種群質(zhì)量長期保持穩(wěn)定[3-4], 并用微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)SPF 金黃倉鼠進(jìn)行遺傳檢測(cè)[5]。謝夏陽等[2]對(duì)于SPF 金黃倉鼠的主要生物學(xué)特性進(jìn)行了詳細(xì)的研究報(bào)道。但目前國內(nèi)外尚無關(guān)于無菌倉鼠種群的相關(guān)研究報(bào)道，本文通過采集SPF 金黃倉鼠乳, 對(duì)其主要營養(yǎng)成分和氨基酸進(jìn)行檢測(cè), 并與文獻(xiàn)報(bào)道的小鼠乳[6-8]、大鼠乳[7,9,10]、豚鼠乳[6-7]、兔乳[11-13]、牛乳[14-15]及嬰兒配方乳[16]的主要成分進(jìn)行比較，以便為創(chuàng)建無菌金黃倉鼠配方乳提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

SPF 級(jí)金黃倉鼠乳：采自成都生物制品研究所有限責(zé)任公司飼養(yǎng)的SPF 金黃倉鼠種群[SCXK(川)2016-126]。動(dòng)物飼養(yǎng)在萬級(jí)屏障設(shè)施中，環(huán)境溫度控制在20～26 ℃，相對(duì)濕度40%～70%，每日光照12 h，定期更換籠具和清潔消毒，飼養(yǎng)間內(nèi)保持清潔、安靜、通風(fēng)良好。金黃倉鼠妊娠哺乳期間自由采食全價(jià)顆粒飼料, 飼料主要營養(yǎng)成分符合國家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合飼料標(biāo)準(zhǔn)GB14924.1-2001 和GB14924.3-2010。

1.2 方法

1.2.1 乳汁的采集 共選取了160只分娩后1～10 d的哺乳期雌鼠(70～90 日齡，體質(zhì)量170～200 g)。每批選取10 只，先將幼崽與母鼠分籠飼養(yǎng)4 h 以上，同時(shí)保持母鼠水料充足。4 h 后給母鼠腹腔注射3%戊巴比妥鈉0.6 mL/只，再注射獸用縮宮素(寧波市三生藥業(yè)有限公司, 2 mL: 10單位/支)0.3 mL/只。待母鼠處于完全麻醉放松狀態(tài)后，暴露乳頭, 用溫水清潔乳頭皮膚并輕柔按摩, 用自制電動(dòng)吸奶裝置收集乳汁, 隔日1次, 連續(xù)3～5次，每只金黃倉鼠采取乳汁總量約6～10 mL，每次采集完畢立即凍存于-26 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 基本營養(yǎng)成分和礦物質(zhì)元素的測(cè)定 將所凍存的金黃倉鼠乳汁(混合樣品)低溫運(yùn)送至廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心有限公司[該公司是擁有美國病理學(xué)會(huì)(College of American Pathologists，CAP)和ISO15189 雙認(rèn)可的第三方醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室]，由該公司按照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行基本營養(yǎng)成分和礦物質(zhì)元素的檢測(cè)。粗蛋白含量測(cè)定參照GB/T6432-1994，采用自動(dòng)凱氏定氮儀法；粗脂肪測(cè)定參照GB/T 6433-2006，采用石油醚提取法；乳糖測(cè)定參照GB/T 6433-2006，采用萊茵-埃農(nóng)氏法；灰分測(cè)定參照GB 5009.4-2016，采用灼燒法；水分測(cè)定參照GB 5009.3-2016，采用直接干燥法；鉀、鋅、鈣、鐵、鈉、銅、鎂、硒測(cè)定參照G B 5009.268-2016，采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)；磷測(cè)定參照GB/T 5009.87-2016，采用鉬藍(lán)分光光度法。

1.2.3 氨基酸測(cè)定 將凍存的金黃倉鼠乳汁(混合樣品)低溫運(yùn)送至中國廣州分析測(cè)試中心，由該中心按照國家標(biāo)準(zhǔn)GB5009.124-2016，使用氨基酸檢測(cè)儀檢測(cè)。

1.3 其他動(dòng)物乳及嬰兒配方乳主要營養(yǎng)成分

通過文獻(xiàn)檢索獲取其他動(dòng)物乳及嬰兒配方乳主要營養(yǎng)成分資料。嬰兒配方奶粉的主要營養(yǎng)成分和礦物質(zhì)元素參照雅士利奶粉a 金裝1 段。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 基本營養(yǎng)成分

金黃倉鼠乳汁中主要成分有蛋白質(zhì)、脂肪 、水、乳糖和礦物質(zhì) (無機(jī)鹽類)，與其他哺乳動(dòng)物乳汁的營養(yǎng)成分相似，各成分含量見表1。金黃倉鼠乳汁與小鼠、豚鼠、大鼠這幾種小型嚙齒類動(dòng)物乳汁相比(表1)，其蛋白質(zhì)和脂肪含量均較低，水分含量較高。金黃倉鼠乳汁與兔乳、牛乳、嬰兒配方奶粉相比(表1)，其蛋白質(zhì)含量遠(yuǎn)低于兔乳和嬰兒配方奶粉，是兔乳的51%，嬰兒配方奶粉的57%，但高于牛乳，是牛乳的2 倍;脂肪含量也遠(yuǎn)低于兔乳和嬰兒配方奶粉，略低于牛乳；乳糖含量也低于牛乳和嬰兒配方奶粉，但高于兔乳。與牛乳相比，金黃倉鼠乳具有高蛋白、低脂肪、低乳糖的特點(diǎn)。

2.2 礦物質(zhì)元素

金黃倉鼠乳汁的礦物質(zhì)成分主要由鈣、磷、鉀、鈉、鎂、鋅、銅等組成(表2)。從表2 可見，金黃倉鼠乳中的鈣和磷含量與大多數(shù)嚙齒動(dòng)物和其他哺乳動(dòng)物乳中鈣磷含量相當(dāng)。此外，金黃倉鼠乳中的鈣磷比(Ca∶P)為1.46，接近其他幾種嚙齒動(dòng)物乳(1.2～1.85)，屬于適合產(chǎn)后生長的鈣磷比范圍(1.5～2.0)。金黃倉鼠乳中礦物質(zhì)成分的含量均低于嬰兒配方奶粉；但鉀含量比兔乳高，鈣磷鈉鎂的含量和兔乳相差不大；除鋅、銅外，其他元素含量和牛奶較為接近。

表1 金黃倉鼠乳汁與其他動(dòng)物乳汁主要營養(yǎng)成分比較Table 1 Comparison of the major nutrients of golden hamster’s milk with other animal milk (g/kg)

表2 金黃倉鼠乳汁與其他動(dòng)物乳汁礦物質(zhì)含量比較Table 2 Comparison of the mineral composition of golden hamster’s milk with other animal milk

2.3 氨基酸組成

金黃倉鼠乳汁中有天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸等16 種氨基酸(表3)。其中每千克乳汁中水解氨基酸總含量為61 g，必需氨基酸(EAA)含量24.4 g 。EAA 與總氨基酸(TAA)含量比值為0.4，EAA 與非必需氨基酸(NEAA)比值為0.667，與FAO/WHO提出的EAA/TAA為0.400，EAA/NEAA為0.600[17]相接近。以上結(jié)果說明，金黃倉鼠乳是一種優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)。金黃倉鼠乳中谷氨酸含量最高，達(dá)14.5 mg/g，占氨基酸總量的23.77%；其次為亮氨酸，含量為6.3 mg/g ，占氨基酸總量的10.32%。金黃倉鼠乳的16 種氨基酸總量是牛乳的2 倍，是嬰兒配方乳的31%，是小鼠乳的51%，也低于大鼠乳和兔乳。各氨基酸含量均比牛乳高，但均低于嬰兒配方乳，與小鼠乳、大鼠乳、兔乳相比存在較大差異。

3 討論

無菌動(dòng)物(germfree)，是指不能檢出任何活的微生物和寄生蟲的動(dòng)物。由于無菌動(dòng)物體內(nèi)外不攜帶任何生物體，由此可排除生物對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，從而明顯提高實(shí)驗(yàn)的敏感性、重復(fù)性，并有利于探究生命活動(dòng)基本規(guī)律，目前已在生物、醫(yī)學(xué)等方面有廣泛的應(yīng)用[18]。無菌動(dòng)物主要通過無菌剖宮產(chǎn)手術(shù)或無菌胚胎移植進(jìn)行無菌化而獲得，并且利用無菌飼養(yǎng)方法維持于無菌隔離器中[19]。目前國內(nèi)無菌金黃倉鼠正處于研發(fā)階段，所以通過無菌剖宮產(chǎn)手術(shù)方法獲得無菌金黃倉鼠前，必須對(duì)無菌金黃倉鼠營養(yǎng)需求進(jìn)行研究，篩選出滿足無菌金黃倉鼠營養(yǎng)需求的人工配方乳，才能提高無菌金黃倉鼠乳鼠的成活率，這也是能否成功培育無菌金黃倉鼠的關(guān)鍵所在。文獻(xiàn)報(bào)道[20-21]，根據(jù)大鼠乳的營養(yǎng)成分，配制的大鼠人工配方乳能夠成功飼養(yǎng)大鼠乳鼠，其營養(yǎng)成分完全符合大鼠乳鼠的營養(yǎng)需求，人工配方乳是能夠替代鼠乳飼喂乳鼠的。因而，通過了解金黃倉鼠乳汁營養(yǎng)成分對(duì)配制無菌金黃倉鼠人工配方乳至關(guān)重要。金黃倉鼠乳汁中蛋白質(zhì)、脂肪、乳糖等基本營養(yǎng)成分、礦物質(zhì)元素以及16種氨基酸的含量與牛乳、嬰兒配方乳、兔乳、小鼠乳、大鼠乳、豚鼠乳的含量都存在著較大差異，因而不能使用一種乳作為代乳品，但可以參照其營養(yǎng)成分加以調(diào)配。

表3 金黃倉鼠乳汁與其他動(dòng)物乳汁氨基酸組成比較Table 3 Comparison of amino acid composition of golden hamster’s milk with other animal milk (g/kg)