雙盲臨床試驗中中藥顆粒安慰劑的制備及評價

閆曉楠 ，張紅茹

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617；2.天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司研究院分公司 天津市中藥質(zhì)量控制重點實驗室，天津 300193）

傳統(tǒng)的中藥臨床評價多為醫(yī)生在臨證實踐中對病例的經(jīng)驗總結(jié)，臨床研究往往缺乏嚴(yán)格設(shè)計，產(chǎn)生難以控制的偏倚，試驗結(jié)果不易重復(fù)，因此需使用規(guī)范化、高質(zhì)量的臨床試驗來評價中藥療效，并盡可能遵守隨機(jī)、盲法的設(shè)計原則。使用合格的安慰劑，是盲法試驗實施的關(guān)鍵[1]。安慰劑首先不得含任何活性或毒性成分，同時按照《藥物臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范》[2]規(guī)定，在雙盲臨床試驗中，試驗用藥品與對照藥品或安慰劑在外形、氣味、包裝和其他特征上均應(yīng)一致。但在中藥臨床研究中，安慰劑的制作存在很多難點，由于中藥制劑組成成分復(fù)雜，且天然藥物自身具有獨特的口味、氣味及顏色，安慰劑制備的難度要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于化學(xué)藥[3]。尤其是中藥顆粒劑，需保證固形物、水溶液二者的性狀均與原治療藥物一致，否則在臨床試驗過程中很容易被破盲，影響臨床試驗結(jié)果的客觀性。因此，針對中藥顆粒劑的多樣性和特殊性，在安慰劑的制備過程中，要根據(jù)原治療藥物的性狀、生產(chǎn)工藝、處方、輔料等情況進(jìn)行綜合考慮[1]。而對于安慰劑的效果評價，目前尚缺乏統(tǒng)一明確的標(biāo)準(zhǔn)，但結(jié)合安慰劑的定義來看，主要應(yīng)關(guān)注無治療作用和外觀性狀一致，包括有效成分評價和外觀評價[4]。

安慰劑是實施盲法的關(guān)鍵，但很多研究者對安慰劑的關(guān)注不足，往往容易在研究中忽略安慰劑的制備和評價[5]。本研究對某中藥顆粒劑的隨機(jī)、雙盲、平行對照臨床試驗中中藥顆粒劑安慰劑的制備工藝及評價方法進(jìn)行探索。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent1200型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；AL204-IC型萬分之一電子天平（梅特勒-托利多公司）；FA1604型電子天平（上海舜宇恒平）；WFH-201B紫外投射反射儀（上海精科）；HU1026B超聲儀（天津恒奧）；DK-98-II型電熱恒溫水浴鍋（天津泰斯特）；SY101-36電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津三水）。

1.2 材料

乳糖（藥品級，批號：20180115，鎮(zhèn)江康復(fù)生物工程有限公司）；麥芽糊精（藥品級，批號：20190201，西安天正藥用輔料有限公司）；焦糖色素（食品級，批號：20190411，河南新鄉(xiāng)科興添加劑有限公司）；牛奶巧克力棕（食品添加劑，批號：20418001，上海染料研究所有限公司）；蔗糖八乙酸酯（食品級，批號：20180428，武漢華龍現(xiàn)代生物工程有限公司）；檸檬酸（食品級，批號：20171201，湖南華日制藥有限公司）；苦蕎米（批號：20190412，環(huán)太生物科技有限公司）；苦瓜片（批號：20190325，亳州雅麗百花保健品有限責(zé)任公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 原治療藥物外觀性狀考察

原治療藥物處方由黃芪、當(dāng)歸、丹參等藥味組成。對其固形物及溶液的外觀、顏色、氣味等進(jìn)行觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：顆粒為棕褐色，溶解性較好，水溶液呈褐色，略有渾濁，靜置無沉淀；氣味微苦，有中藥特有的香氣；口味苦，微酸，微甜。

2.2 原料的篩選及配比

由于原治療藥物為顆粒劑且能在水中全部溶解，因此需選擇具有較好成型性及水溶性的原料，單獨使用不同原料（糊精、可溶性淀粉、乳糖、麥芽糊精）或?qū)⒁陨显习凑詹煌壤旌鲜褂?，制得顆粒，考察樣品的成型性及溶化性，結(jié)果見表1。

乳糖：麥芽糊精（5：5）混合使用時，成型性及溶化性好，溶液澄清，性狀與治療藥物最為接近，因此選用乳糖：麥芽糊精（5：5）為原料。

2.3 口味及氣味的模擬

原治療藥物味苦，微酸，微甜，且具有中藥特有的香氣，因此單純依靠矯味劑很難準(zhǔn)確模擬。本實驗采用了食品添加劑蔗糖八乙酸脂作為苦味劑、檸檬酸作為酸味劑。取具有苦味的食品苦蕎米、苦瓜，單獨或混合（1：1），粉碎成粗粉，加水煎煮3次，每次1 h，第一次加8倍量水，第二、三次分別加6倍量水。合并3次提取液，過濾，60～80℃下減壓（-0.01 MPa）濃縮，干燥后加入原料，對原治療藥物的口味和氣味進(jìn)行模擬，結(jié)果見表2。

表1 原料及其配比篩選結(jié)果

表2 食品原料及矯味劑篩選結(jié)果

表3 矯色劑篩選結(jié)果

試驗中發(fā)現(xiàn)蔗糖八乙酸脂用量過大易產(chǎn)生苦澀的口感，且沒有藥物的香氣，加入具有苦味的食品原料后能獲得較好的效果。苦蕎米具有類似藥物的香氣，但苦味不明顯，采用苦瓜：苦蕎米（1：1）提取物，同時加入蔗糖八乙酸脂0.15 ‰、檸檬酸5 ‰可較好地模擬原治療藥物的口味和氣味。

2.4 顏色的模擬

在原料基礎(chǔ)上加入矯色劑模擬安慰劑顏色，考察不同矯色劑（焦糖色素、巧克力棕色素）單獨使用或按不同比例混合使用，制得顆粒劑原型及溶液的顏色情況見表3。

根據(jù)篩選結(jié)果，確定加入1.5 %焦糖色素：巧克力棕色素（7：3），制得的安慰劑原型及溶液顏色與原治療藥物最為接近。

2.5 安慰劑處方

根據(jù)以上研究，確定安慰劑處方為：乳糖，麥芽糊精，苦瓜：苦蕎米（1：1）提取物8 %，蔗糖八乙酸脂0.15 ‰，檸檬酸5 ‰，焦糖色素：巧克力棕色素（7：3）1.5 %。

2.6 安慰劑評價

2.6.1 人工打分評價 由于本次臨床研究中安慰劑與原治療藥物采用統(tǒng)一的規(guī)格及包裝，因此對安慰劑的評價主要集中于其外觀、顏色、口味是否容易被辨識出來從而導(dǎo)致破盲。本次試驗采用人工打分的評價方法，為保證測試結(jié)果不受個體差異影響，選擇10個以上志愿者進(jìn)行測試[6]并進(jìn)行兩次獨立的評分。

評價方法：取原治療藥物作為對照樣品，另分別取原治療藥物與安慰劑，隨機(jī)標(biāo)注為A樣品和B樣品，請20名參與評價的人員分別打分。分?jǐn)?shù)設(shè)定參考金冠欽[7]、王云飛等[8]研究者采用的方法，與對照品完全一致記為10分，比較一致記為7.5分，不能確定記為5.0分，差別較大記為2.5分，完全不一致記為0分。實驗數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，使用Origin 9.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析并做圖，組間比較使用單因素方差分析（One-Way ANOVA）。統(tǒng)計分析結(jié)果見表4。由表4可見，治療藥物與安慰劑進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。因此認(rèn)為安慰劑不易破盲，可用于臨床試驗。

表4 實驗數(shù)據(jù)分析結(jié)果

2.6.2 指標(biāo)成分測定 按原治療藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對安慰劑進(jìn)行薄層鑒別和含量測定，結(jié)果均為陰性，表明安慰劑中不存在原治療藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的指標(biāo)成分。

3 討論

3.1 原治療藥物具有微甜的味道，在安慰劑制備中使用了自身帶有微弱甜味的乳糖作為原料，能較好地模擬原治療藥物的口味，因此未額外加入其他甜味劑。

3.2 目前中藥安慰劑制備的難點，主要在于氣味和口味的模擬，因中藥復(fù)方制劑由多種藥物組成，具有獨特的復(fù)合型的香氣和味道，很難僅通過輔料和矯味劑來達(dá)到一致。因此加入5 %～10 %原治療藥物是常用的做法，但大部分的中藥量效關(guān)系并不十分明顯，如采用加入原治療藥物的方法，則應(yīng)確認(rèn)其沒有治療作用，不干擾受試藥物的臨床試驗結(jié)果。

3.3 如使用藥食同源的食品作為原料制備安慰劑，也應(yīng)關(guān)注該原料是否具有與原治療藥物相近或相左的藥理活性。如常見的酸味來源山楂，具有消食健胃、行氣散瘀等作用，藥典規(guī)定用量為9～12 g，由于其通常都作為食品食用，往往容易被研究者所忽視。

3.4 隨著近年來檢測技術(shù)和手段的進(jìn)步，已有一些學(xué)者采用智能感官技術(shù)[1,9]，如機(jī)器視覺技術(shù)、電子鼻和電子舌等，對安慰劑及其治療藥物的一致性進(jìn)行評價。這種方法在一定程度上能實現(xiàn)對中藥安慰劑性狀的客觀評價，避免了人工評分所導(dǎo)致的主觀因素的影響，有一定的推廣價值，但其評價結(jié)果仍需通過其他評價方法進(jìn)行驗證，以保證準(zhǔn)確性。