免疫組化技術(shù)在制作病理組織切片中的應(yīng)用價(jià)值分析

李家梁　孔繼光

【摘要】 目的 分析免疫組織化學(xué)（免疫組化）技術(shù)在病理組織切片制作中的臨床價(jià)值。方法 80片（80例）組織標(biāo)本[40片宮頸組織標(biāo)本和40片（40例）乳腺組織標(biāo)本]作為研究對(duì)象， 以隨機(jī)數(shù)字表法分為觀察組與對(duì)照組， 各40片各（40例）。對(duì)照組采用傳統(tǒng)方法制作病理組織切片， 觀察組采用免疫組化技術(shù)制作病理組織切片。比較兩組制片效果和確診率。結(jié)果 觀察組制片優(yōu)良率為95.00%， 高于對(duì)照組的72.50%， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.440， P=0.006<0.05）。觀察組確診率92.50%高于對(duì)照組的70.00%， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.646， P=0.010<0.05）。結(jié)論 免疫組化技術(shù)在病理組織切片制作中應(yīng)用價(jià)值較高， 通過(guò)對(duì)免疫組化技術(shù)質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格控制利于提高制片質(zhì)量、提升病理檢驗(yàn)診斷水平， 為臨床診斷提供有力依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 免疫組化技術(shù);病理組織切片;制片;優(yōu)良率;確診率

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.11.087

病理組織檢查為臨床診斷疾病常用的一種手段， 范圍較廣。近年來(lái)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)不斷進(jìn)步與發(fā)展， 免疫組化技術(shù)逐漸應(yīng)用于病理組織檢查中， 其應(yīng)用明顯提高了病理組織診斷水平[1]。免疫組化技術(shù)又稱(chēng)免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)， 為現(xiàn)代生物學(xué)及醫(yī)學(xué)中廣泛應(yīng)用的一種技術(shù)， 指用標(biāo)記的特異性抗體或抗原在組織細(xì)胞原位通過(guò)免疫反應(yīng)及組織化學(xué)的呈色反應(yīng)， 對(duì)相應(yīng)抗體或抗原進(jìn)行定位、定量、定性測(cè)定[2]。免疫組化技術(shù)環(huán)環(huán)相扣， 若任一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題均會(huì)對(duì)制片質(zhì)量造成嚴(yán)重影響， 進(jìn)而影響臨床病理組織診斷結(jié)果， 因此在制片過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格控制制片質(zhì)量。本研究將免疫組化技術(shù)用于病理組織切片制作中， 旨在研究其應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2017年4月～2019年7月本科采集的80片（80例）組織標(biāo)本[40片（40例）宮頸組織標(biāo)本和40片（40例）乳腺組織標(biāo)本]作為研究對(duì)象， 以隨機(jī)數(shù)字表法分為觀察組與對(duì)照組， 各40片（各40例）。對(duì)照組宮頸組織標(biāo)本19片， 乳腺組織標(biāo)本21片;患者年齡26～63歲， 平均年齡（45.12±6.38）歲。觀察組宮頸組織標(biāo)本21片， 乳腺組織標(biāo)本19片;患者年齡27～65歲， 平均年齡（45.15±6.62）歲。兩組一般資料比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均經(jīng)活檢或穿刺確診為乳腺癌及宮頸癌[或?qū)m頸上皮不典型增生（CIN）病變]， 無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移現(xiàn)象;患者對(duì)標(biāo)本采集及相關(guān)研究均知情， 并簽署同意書(shū);研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：近期接受放療、化療或內(nèi)分泌治療者;精神疾病者;臨床資料不完善者;對(duì)研究不知情或不同意者。

1. 3 方法

1. 3. 1 材料及設(shè)備 研究所用試劑包括蘇木精、甲醛、無(wú)水乙醇、二甲苯、碘酸鈉、硫酸鋁、石蠟（廣州秀威貿(mào)易有限公司提供）及相關(guān)免疫組化試劑（深圳市安陽(yáng)科技有限責(zé)任公司提供）。使用儀器包括HE340E輪轉(zhuǎn)式半自動(dòng)組織切片機(jī)、HistoStar包埋機(jī)、ASP300S全自動(dòng)脫水機(jī)、組織攤片機(jī)、全自動(dòng)封片機(jī)等， 科室按照程序招標(biāo)購(gòu)買(mǎi)設(shè)備， 采用日本OLYMPUS圖像分析儀， 應(yīng)用GZX-9070MBE電熱鼓風(fēng)干燥恒溫烤箱。

1. 3. 2 觀察組 采用免疫組化技術(shù)制作病理組織切片， 具體方法為：①于室溫下行常規(guī)脫蠟切片， 隨后將組織標(biāo)本置入3%的雙氧水內(nèi)浸泡， 時(shí)間約20 min， 之后應(yīng)用磷酸鹽緩沖液（PBS）對(duì)組織切片進(jìn)行沖洗， 沖洗次數(shù)為3次， 沖洗5 min/次， 持續(xù)沖洗15 min;②將700 ml檸檬酸緩沖液（pH=6）置入1000 ml燒杯內(nèi)， 對(duì)其進(jìn)行加熱至沸騰， 隨后放入標(biāo)記有Ki-67、人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER-2）、P16、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）抗體的切片于溶液內(nèi)， 再持續(xù)加熱溶液15 min， 于每片切片上滴加一抗， 置于40℃冰箱內(nèi)過(guò)夜孵育;③應(yīng)用PBS（pH=7.4）對(duì)切片沖洗3次， 沖洗5 min/次;④于室溫下在每片組織切片上滴加二抗， 并孵育15 min， 再次應(yīng)用PBS對(duì)組織切片沖洗3次， 沖洗5 min/次;⑤將組織切片置于顯色劑內(nèi)顯色5～10 min， 之后以蘇木精進(jìn)行襯染、水洗， 應(yīng)用脫水透明中型樹(shù)膠封固組織切片。

1. 3. 3 對(duì)照組 采用傳統(tǒng)方法制作病理組織切片， 具體方法為：①于組織標(biāo)本離體后0.5 h內(nèi)對(duì)其進(jìn)行固定處理， 將組織標(biāo)本置入固定液內(nèi)， 或行低溫儲(chǔ)存。之后將組織標(biāo)本置入10%的中性緩沖甲醛溶液內(nèi)， 時(shí)間8～24 h， 行固定處理;②應(yīng)用熱修復(fù)法對(duì)固定后的標(biāo)本行抗原修復(fù)， 利用熱效應(yīng)對(duì)抗原進(jìn)行引導(dǎo)， 抗原修復(fù)溫度應(yīng)≥100℃， 修復(fù)液pH為7.5～8.5， 修復(fù)時(shí)間3～15 min;③嚴(yán)格按照操作步驟制作病理組織切片， 要求脫蠟時(shí)間充足， 試劑足量、均勻增加試劑， 試劑面積需超出切片組織0.05～0.35 cm。避免出現(xiàn)邊緣效應(yīng)。

1. 4 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)

1. 4. 1 制片效果 對(duì)兩組病理組織切片制作質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)， 于顯微鏡下觀察， 切片分為優(yōu)質(zhì)片、良質(zhì)片、差質(zhì)片。優(yōu)質(zhì)片：組織結(jié)構(gòu)完全， 厚薄均勻， 無(wú)裂痕損害現(xiàn)象， 細(xì)胞形態(tài)較清楚， 染色明顯， 易于觀察;良質(zhì)片：組織結(jié)構(gòu)無(wú)損壞， 有較少褶皺， 無(wú)污染或氣泡， 無(wú)非特異性著色、脫片等情況， 較易觀察;差質(zhì)片：編號(hào)不清晰， 組織結(jié)構(gòu)存在損害， 有較多褶皺或氣泡， 對(duì)比不顯著， 不易于觀察。制片優(yōu)良率=（優(yōu)質(zhì)片+良質(zhì)片）/總例數(shù)×100%。

1. 4. 2 記錄兩組確診率， 確診率=確診例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。