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    ADD2基因rs3755351位點(diǎn)多態(tài)性與藏、漢民族高原高血壓發(fā)生的相關(guān)性※

    2020-05-25 07:29:38汪曉洲劉玉林姚京豫邊惠萍徐效龍趙彩蓮馬占青
    關(guān)鍵詞:漢族等位基因藏族

    汪曉洲,劉玉林,姚京豫,邊惠萍,楊 蕾,徐效龍,白 潔,韓 瓊,嚴(yán) 萍,張 晶,周 茜,趙彩蓮,朵 杰,馬占青,張 偉

    (1.青海省心腦血管病??漆t(yī)院高血壓科;2.青海大學(xué)高原醫(yī)學(xué)研究中心;3.首都醫(yī)科大學(xué);4.高原醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;5.青海省高原醫(yī)學(xué)應(yīng)用基礎(chǔ)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

    內(nèi)收蛋白(adducin,ADD)是一種細(xì)胞膜骨架蛋白,Martin L等人的實(shí)驗(yàn)證明,ADD基因家族的突變能引起小鼠的高血壓,小鼠β-adducin(ADD2)缺失會(huì)導(dǎo)致血壓的改變[1]。對(duì)Milan高血壓大鼠模型的研究顯示,ADD可通過增強(qiáng)Na+-k+-ATP酶活性,增加腎小管對(duì)鈉的重吸收來造成高血壓[2]。因此,在高鹽攝入與高血壓之間的因果關(guān)系中,ADD 是候選基因之一。rs3755351是ADD2基因內(nèi)含子上一個(gè)A>C 變異位點(diǎn),對(duì)多個(gè)人群的研究提示,ADD2基因與高血壓的遺傳易感性存在一定相關(guān)性,但在不同種族和地域人群中的分布有較大的差異[3,4],本研究旨在分析ADD2基因rs3755351位點(diǎn)多態(tài)性與藏、漢民族高原高血壓(altitude-related hypertension,ARH)發(fā)生的相關(guān)性,為完善ARH發(fā)病機(jī)制研究提供新的樣本。

    1.對(duì)象與方法

    1.1 研究對(duì)象

    根據(jù)納入及排除標(biāo)準(zhǔn),選擇2017年2月至2018年12月在青海省心腦血管病??漆t(yī)院高血壓科住院治療的ARH患者,并根據(jù)民族分為藏族組和漢族組。

    排除標(biāo)準(zhǔn):①高度懷疑繼發(fā)性高血壓者;②合并其他系統(tǒng)疾病,可能對(duì)結(jié)果造成干擾者。

    本研究共納入ARH樣本128例,其中漢族74例,藏族54例;健康對(duì)照樣本256例,其中漢族148例,藏族108例。四組患者年齡、居住地海拔、性別等方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,資料具有可比性(表1、2)。

    表1 ARH組和健康對(duì)照組一般資料

    續(xù)表:

    表2 ARH組和健康對(duì)照組居住地海拔分布(%)

    1.2 方法

    1.2.1 血液標(biāo)本收集

    研究對(duì)象禁食12 h,次日6:30~7:30采肘靜脈血2 mL(EDTA抗凝,-80℃凍存)。

    1.2.2 DNA提取

    用全基因組DNA 提取試劑盒(TIANamp Genomic DNA Kit,北京天根生物科技有限公司)提取DNA。使用NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)檢測OD值。應(yīng)用1.25%瓊脂糖凝膠電泳法檢測DNA質(zhì)量。DNA質(zhì)檢合格后轉(zhuǎn)移至96孔板,置-20 ℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.3 引物設(shè)計(jì)

    針對(duì)染色體2p13區(qū)ADD2基因rs3755351位點(diǎn),采用Assay Design 3.1軟件行PCR引物和單堿基擴(kuò)展引物設(shè)計(jì),由上海英駿生物公司(Invitrogen)合成。其中rs3755351 PCR特異性擴(kuò)增引物為5′-ACGTTGGATGCACACATTTTGTGTTCAGCG-3′,5′- CGTTGGATGCTGAGATTATAAGTGGCTCC-3′,單堿基延伸引物為5′-CCCCCAGCGACAGTATCTCTTTA-3′。

    經(jīng)過統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),本文獲取的1 030篇文獻(xiàn)分別分布在30種期刊上(如圖2)。其中,刊載武術(shù)文化研究50篇以上的期刊有5本,共刊載了442篇,占據(jù)了所有文獻(xiàn)的將近一半。期刊《體育文化導(dǎo)刊》載文量最多,達(dá)到113篇,其次是《武漢體育學(xué)院學(xué)報(bào)》,發(fā)文量為104篇?!冻啥俭w育學(xué)院學(xué)報(bào)》、《北京體育大學(xué)學(xué)報(bào)》、《上海體育學(xué)院學(xué)報(bào)》的發(fā)文量都在50篇以上。并且,除了體育類期刊以外,武術(shù)文化研究的文獻(xiàn)還分布在了教育類、新聞?lì)愐约爸腥A文化研究的期刊中,比如《教育理論與實(shí)踐》、《傳媒》、《中國教育學(xué)刊》、《中華文化論壇》等??梢?,武術(shù)文化研究受到不同領(lǐng)域刊物的重視,體育類期刊對(duì)于該主題的研究更為關(guān)注。

    1.2.4 SNP分型

    利用MassARRAY?SNP分型技術(shù)對(duì)ADD2基因rs3755351位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。

    1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    2.結(jié)果

    ADD2 基因rs3755351位點(diǎn)的基因型在對(duì)照組人群中的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05),說明研究群體具有代表性(表3)。

    表3 ARH組和健康對(duì)照組的rs3755351位點(diǎn)基因型分布(%)和Hardy-Weinberg檢驗(yàn)結(jié)果

    表3顯示,在漢族ARH組中,ADD2基因rs3755351位點(diǎn)CC、CA、AA基因型分布頻率分別為47.3%、39.2%、13.5%,其中等位基因C、A的分布頻率分別為66.9%、33.1%;與同民族健康對(duì)照組比,其基因型的分布頻率和等位基因C、A的分布頻率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。在藏族ARH組中,ADD2基因rs3755351位點(diǎn)CC、CA、AA基因型分布頻率分別為20.4%、57.4%和22.2%,其中等位基因C、A的分布頻率分別為49.1%、50.9%,與同民族健康對(duì)照組比,其基因型的分布頻率和等位基因C、A的分布頻率均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。此外,藏族ARH與漢族ARH比,其基因型和等位基因分布頻率也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。在藏族ARH患者ADD2基因rs3755351位點(diǎn)基因型的分布中,C/C基因型占比較健康對(duì)照明顯為低,相應(yīng)的A/A基因型比例有所升高。

    3.討論

    高血壓是最常見的心腦血管疾病危險(xiǎn)因素,收縮壓每升高20 mmHg或舒張壓每升高10 mmHg,心、腦血管病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)倍增[6]?,F(xiàn)有的研究證據(jù)顯示[7],高原低氧地區(qū)高血壓的患病率較高,青藏高原地區(qū)高血壓的患病率為18.60%~40.68%。ARH和原發(fā)性高血壓(essential hypertension,EH)是高原地區(qū)高血壓最主要的兩種表現(xiàn)形式,其中ARH是高原地區(qū)特有的疾病,但對(duì)其發(fā)病機(jī)制研究不足。

    高原居民飲食習(xí)慣特殊,喜食高鹽食品,食鹽攝入量明顯為高。調(diào)查發(fā)現(xiàn)[8],高原居民食鹽攝入量是WHO建議量的4~5倍。

    ADD是細(xì)胞膜骨架的主要組成成分,由α、β、γ三個(gè)亞單位組成異二聚體,三個(gè)亞基分別由位于三條不同染色體上的基因ADD1、ADD2和ADD3編碼[9]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究發(fā)現(xiàn),ADD基因家族的突變可以增加腎小管基底膜Na+-K+-ATP酶活性,致腎小管上皮細(xì)胞對(duì)Na+的重吸收增加,從而導(dǎo)致高血壓[10]。遺傳流行病學(xué)研究提示,ADD可能是鹽敏感型EH的易感基因[10,11]。

    Tikhonoff等人的一項(xiàng)研究[12]認(rèn)為,ADD2基因C1797T位點(diǎn)突變與高鹽攝入人群的血壓升高有關(guān)。然而,對(duì)我國EH發(fā)病率最低的彝族和哈尼族人群的研究發(fā)現(xiàn),兩個(gè)民族的病例組和對(duì)照組均未發(fā)現(xiàn)突變純合子(TT)的分布,ADD的T等位基因突變率很低,提示彝族和哈尼族人群C1797T多態(tài)性的缺失可能與EH的發(fā)病無關(guān)[13]。

    Kato等[14]通過對(duì)高血壓的三層次、高密度的關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn),rs3755351位點(diǎn)是ADD2基因的一個(gè)A>C變異位點(diǎn),與高血壓的易感性顯著相關(guān)(P=1.7×10-5),該位點(diǎn)有AA、AC、CC三種基因型。對(duì)福建和廣東共計(jì)940例高血壓患者和944名健康體檢者rs3755351位點(diǎn)行基因分型發(fā)現(xiàn):在福建人群中攜帶AA基因型能夠顯著降低高血壓的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),而在廣東人群中,三種基因型的分布在病例組和對(duì)照組中無明顯差異,未發(fā)現(xiàn)rs3755351多態(tài)位點(diǎn)與高血壓的遺傳易感性有關(guān)[4],說明ADD2基因多態(tài)性與高血壓之間的遺傳易感性存在一定相關(guān)性,但在不同的種族和地域人群中存在差異。

    本課題對(duì)藏、漢族ARH患者和同民族健康對(duì)照者進(jìn)行ADD2基因分型研究的結(jié)果顯示,藏族ARH組患者ADD2基因的rs3755351位點(diǎn)呈陽性,AA、CA基因型比例高于健康對(duì)照組及漢族ARH組,等位基因A的分布頻率高于健康對(duì)照組和漢族ARH組,提示攜帶更多的A等位基因與青海地區(qū)藏族ARH發(fā)生相關(guān),而在該地區(qū)漢族ARH患者中,并未發(fā)現(xiàn)ADD2基因的rs3755351位點(diǎn)多態(tài)性與ARH之間的關(guān)聯(lián),說明ADD2基因多態(tài)性與ARH的遺傳易感性存在一定相關(guān)性。

    綜上所述,ADD2 rs3755351位點(diǎn)多態(tài)性可能與藏族ARH的發(fā)生有關(guān),是世居藏族ARH發(fā)生的易感基因之一;在移居漢族中未發(fā)現(xiàn)關(guān)聯(lián),移居漢族ARH的發(fā)生可能與其他基因位點(diǎn)多態(tài)性有關(guān),或與移居后對(duì)高原低氧環(huán)境適應(yīng)不全有關(guān),機(jī)制有待闡明。

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