貴州獐牙菜抗小鼠脂肪肝作用研究

郭佳晨 沈開靜 王延

摘要 [目的]探討不同劑量的貴州獐牙菜對(duì)高脂飲食所致的小鼠脂肪肝的防治作用。[方法]采用高脂飼料（基礎(chǔ)飼料78.39%+膽固醇10%+豬油10%+蛋黃粉10%+丙硫氧嘧啶0.61%）連續(xù)喂養(yǎng)28 d KM小鼠建立脂肪肝模型。用貴州獐牙菜水煎液灌胃給藥28 d后，摘取小鼠肝臟觀察制作石蠟切片和HE染色，比較各小鼠肝細(xì)胞的病理學(xué)變化;并測定小鼠血清中的總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）的含量。[結(jié)果]根據(jù)HE染色和切片結(jié)果，與空白組相比，模型組肝臟細(xì)胞結(jié)構(gòu)變性;且模型組的血清TC、TG、LDL-C指數(shù)明顯升高，HDL-C指數(shù)降低。貴州獐牙菜組的HE染色切片與模型組相比病理程度減輕，血清TC、TG、LDL-C指數(shù)表達(dá)量降低，HDL-C指數(shù)升高。[結(jié)論]貴州獐牙菜具有抗小鼠高脂血癥及緩解脂肪肝的作用。

關(guān)鍵詞 貴州獐牙菜;高血脂;脂肪肝;防治

Abstract [Objective] The research aimed to explore the effect of Swertia kouitchensis in different doses on fatty liver of mice induced by high fat diet. [Methods] KM mice were fed with high fat diet （Basic feed 78.39% + Cholesterol 10% + Lard 10% + Yolk powder 10% + Propylthiouracil 0.61%） for 28 days to establish fatty liver model. After 28 days of oral administration of Swertia kouitchensis water decoction， the liver of mice was extracted to observe and make paraffin section and HE staining， and the pathological changes of liver cells of mice were compared. The contents of four items of blood lipids （TC， TG， HDLC， LDLC） in serum of mice were measured. [Result]According to the results of HE staining and sectioning， compared with the blank group， the liver cell structure of the model group was degenerated; and the serum TC， TG， and LDLC indexes of the model group were significantly increased， and the HDLC index was decreased.Compared with the model group， the HE stained sections of Swertia kouitchensis group had less pathological degree， the expression levels of serum TC， TG， LDLC index decreased， and HDLC index increased.[Conclusion]Swertia kouitchensis has the effects of anti hyperlipidemia and alleviating fatty liver in mice.

Key words Swertia kouitchensis Franch;High blood fat;Fatty liver;Prevention and cure

每年死于心腦血管疾病的人數(shù)全球高達(dá)1 500萬人，居各種死因之首[1-2]。其中血脂異常的人比其他人更具有患心腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)，目前1/3的成年人血脂普遍偏高，每年導(dǎo)致中風(fēng)的病人近350萬人，高血脂癥已成為人類健康的第一隱形殺手[3]。其中血脂異常為主要因素引起的脂肪肝是由多種疾病和病因引起的脂肪肝，是多種慢性肝病以及心腦血管疾病共同的病理基礎(chǔ)與特征，又稱為非酒精性脂肪肝，尤其以肥胖病人常見[4]。該病發(fā)生率極高，若不及時(shí)干預(yù)，則會(huì)導(dǎo)致其他心血管疾病的發(fā)生，現(xiàn)在脂肪肝的發(fā)生嚴(yán)重威脅人類的健康，全世界超過一大半的人群存在發(fā)生該病的危險(xiǎn)。

貴州獐牙菜（Swertia kouitchensis Franch）在現(xiàn)代藥理活性研究中顯示其具有突出的調(diào)節(jié)血脂、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝以及清肝利膽等作用[5]，顯示出較強(qiáng)的抗動(dòng)脈粥樣硬化潛力[6]。大多數(shù)貴州苗藥都為地方的老百姓使用，且其藥用價(jià)值有待于未來藥理發(fā)展的研究。因此，該試驗(yàn)在遵循中醫(yī)藥理論研究的基礎(chǔ)上，探討貴州獐牙菜對(duì)治療小鼠脂肪肝的療效。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。雄性KM小鼠60只，體重18～20 g，由貴州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2 主要藥品與試劑。血脂康膠囊（北京北維信生物科技有限公司，批號(hào)20171212）;總膽固醇（南京建成生物工程研究所，批號(hào)20181102）;甘油三酯（南京建成生物工程研究所，批號(hào)20181102）;高密度脂蛋白（南京建成生物工程研究所，批號(hào)0181031）;低密度脂蛋白（南京建成生物工程研究所，批號(hào)20181102）;丙硫氧嘧啶片（上海朝暉藥業(yè)有限公司，批號(hào)20180324）;蛋黃粉（源葉生物，批號(hào)20180911）;膽固醇（源葉生物，批號(hào)20180921）。病理切片用HE染色（索萊寶，批號(hào)20181021）;無水乙醇（國藥集團(tuán)，批號(hào)20180827）;載玻片（世泰，批號(hào)20180911）;蓋玻片（世泰，批號(hào)20180911）;中性樹膠（國藥集團(tuán)，批號(hào)20180910）;石蠟（國藥集團(tuán)，批號(hào)20181024）;包埋盒（國藥集團(tuán)，批號(hào)20180822）。

1.1.3 主要儀器。包埋機(jī)（Lecia，型號(hào)EG1150H）;切片機(jī)（Lecia，型號(hào)RM2265）;分析天平（上海卓精電子科技有限公司，型號(hào)BSM-3200）;離心機(jī)（湖南湘立科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)TD5A-WS）;酶標(biāo)儀（Thermo，型號(hào)Multiskan）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 分組與造模。將60只KM小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、貴州獐牙菜高劑量（2.275 00 g/kg）組、中劑量（1.137 50 g/kg）組、低劑量（0.568 75 g/kg）組、陽性藥物（血脂康膠囊）組。除空白組給予正常飼料外，各組小鼠均給予高脂飼料（基礎(chǔ)飼料78.39%+膽固醇10%+豬油10%+蛋黃粉10%+丙硫氧嘧啶0.61%）[7]連續(xù)喂養(yǎng)28 d，誘導(dǎo)脂肪肝形成。每周稱一次體重，觀察小鼠的體重變化。

1.2.2 檢測。給藥28 d后，用摘眼球取血的方法將各組小鼠的血清移至1.5 mL的EP管中靜置2 h后離心，將肝臟浸泡在提前配制好的10%福爾馬林溶液中固定24 h。

1.2.2.1 血脂4項(xiàng)檢測。將已經(jīng)備好的血清取出，嚴(yán)格按照試劑盒說明書，測定各組小鼠血脂4項(xiàng)含量。

1.2.2.2 肝組織病理學(xué)檢查。將浸泡在福爾馬林中的肝臟常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片，并進(jìn)行HE染色，最后用封固劑封片，顯微鏡下觀察，最后進(jìn)行拍照留存。

1..3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 22. 0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±S）表示，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)表示。計(jì)量資料的組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用LSD法。以P<0. 05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[8-10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠體重 由圖1可見，各組小鼠的體重呈不同幅度增長。模型組小鼠的體重較給藥前體重增長明顯，給藥后高劑量組體重出現(xiàn)下降，陽性組及中劑量組體重略微下降。模型組小鼠較空白組小鼠活動(dòng)度減少。在取材摘取小鼠肝臟時(shí)可見肝的整體外觀上切面肥大腫脹，模型組小鼠肝臟上呈現(xiàn)白色顆粒狀，肝臟均比正常組肥大，顏色較其余各組的顏色淺，切面有油膩感。

2.2 檢測結(jié)果

2.2.1 小鼠血脂4項(xiàng)檢測結(jié)果。從圖2a可以看出，模型組白組相比，有了明顯升高;貴州獐牙菜高、中、低劑量組和陽性藥物組與模型組相比，模型組血清中TC升高明顯。上述各項(xiàng)指標(biāo)與模型組比較，貴州獐牙菜高、中、低劑量組脂肪肝病理程度減輕，其中，高劑量組的效果最優(yōu)。

2.2.2 小鼠肝臟病理切片檢測結(jié)果。

經(jīng)過組織切片，HE染色鏡檢，由圖3可見，空白組小鼠肝細(xì)胞排列緊密均勻各一，肝組織結(jié)構(gòu)正常。與空白組相比，模型組小鼠肝臟細(xì)胞腫脹，形態(tài)模糊，組織內(nèi)易見大量脂肪空泡且呈彌散性分布，肝細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)明顯紊亂，包漿疏松明顯，符合脂肪肝組織病理學(xué)改變。貴州獐牙菜（原生藥）低、中、高劑量的肝組織內(nèi)可見少量的肝細(xì)胞脂肪變性，肝細(xì)胞中脂肪空泡得到一定的改善，肝組織結(jié)構(gòu)大致正常，結(jié)果提示小鼠脂肪肝在疾病過程得到一定的緩解，病理學(xué)表現(xiàn)與陽性藥物組相似，且高劑量組的肝細(xì)胞的改善最明顯。

3 結(jié)論與討論

該試驗(yàn)通過外源性給予改良后高脂飼料28 d模擬人類攝取食物方式造模，隨機(jī)抽取小鼠測定血脂4項(xiàng)，可見TC、TG、LDL-C含量升高，HDL-C含量減少;且通過病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，肝臟細(xì)胞發(fā)生了明顯的脂質(zhì)和炎癥浸潤現(xiàn)象，說明造模成功。隨后再給予貴州獐牙菜水煎液取高、中、低3個(gè)劑量來灌胃給藥28 d，給藥后的小鼠血清中血脂4項(xiàng)變化明顯，從HE染色結(jié)果提示不同劑量的貴州獐牙菜水煎液對(duì)小鼠脂肪肝起到一定的干預(yù)作用，且高劑量的水煎液的效果最優(yōu)。

通過上述試驗(yàn)研究結(jié)果表明，不同劑量的貴州獐牙菜水煎液能夠緩解不同程度的小鼠脂肪肝，能使小鼠血清中TC、 TG、LDL-C降低，HDL-C升高;在肝組織化學(xué)的病理程度上則能改變肝臟細(xì)胞的脂質(zhì)以及炎癥的浸潤現(xiàn)象，能改善肝組織中的脂質(zhì)累積，使肝細(xì)胞變性得到不同程度的改善，緩解脂肪肝的發(fā)展過程。該研究為貴州獐牙菜用于脂肪肝的預(yù)防及新藥的研究開發(fā)提供依據(jù)。

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