不同產(chǎn)地中藥木瓜的質(zhì)量評價

孫 慧，賈文麗，伊星綺，張 蕾，馮 帥，顧正位

(山東中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355)

木瓜，始載于《名醫(yī)別錄》，為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai的干燥近成熟果實。國內(nèi)存在5個木瓜野生種，包括皺皮木瓜、西藏木瓜、木瓜海棠、光皮木瓜及日本木瓜[1]。而皺皮木瓜被指定為木瓜的藥用植物來源，臨床常用[2-3]。其外形多呈長圓形，曬干后的皺皮木瓜外表 呈紫紅或紅棕色，外表遍布不規(guī)則深皺紋，因而得名皺皮木瓜?！侗静輬D經(jīng)》記載:“木瓜處處有之，而宣城者為佳”，自古以來便以安徽宣城的木瓜為道地藥材[4]，但實際上，皺皮木瓜目前以栽培為主，主產(chǎn)于山東、湖北、湖南、四川、安徽、浙江、云南等地，不同產(chǎn)地皺皮木瓜化學(xué)成分含量及其活性有所不同[5]。

研究發(fā)現(xiàn)，木瓜主要含三萜類、有機(jī)酸類、糖類、鞣質(zhì)類、氨基酸類、黃酮類、皂苷類、維生素類等成分[6-7]。其活性成分齊墩果酸以單體或皂苷形式存在于木瓜中，具有消炎，增強(qiáng)免疫力，降低轉(zhuǎn)氨酶，保肝，降血脂，降血糖，還具有抗衰老，抗突變，清除自由基的作用。熊果酸具有抑菌，抗腫瘤，安定和降壓等功效[8-10]。本實驗對不同產(chǎn)地的木瓜進(jìn)行質(zhì)量評價,旨在反映目前市面上木瓜藥材的品質(zhì)。

1 儀器與試藥

1.1 樣品材料

所有供試樣本經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李峰教授鑒定，見表1。

表1 供試樣品

表1(續(xù))

1.2 儀器與試劑

儀器：日立高效液相色譜儀(ORGANIZER)，ZORBAX SB-C18(Agilent)柱，超聲波清洗機(jī)(型號：XO-5200D，南京先歐儀器制造有限公司)，電子分析天平(FA2004)，粉碎機(jī)(上海淀久中藥機(jī)械制造有限公司)，馬弗爐(MF-2.5-10A，上海篤特科學(xué)儀器有限公司)。

試藥：無水乙醇(分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號20170410)，甲醇(色譜純，山東禹王實業(yè)有限公司，批號20170213036)， 娃哈哈純凈水，齊墩果酸和熊果酸對照品(購自中國食品藥品檢定研究院(供含量測定用), 批號110709-200304)。

2 方法與結(jié)果

2.1 水分測定

藥材中水分過量會使藥材易變質(zhì)霉?fàn)€，對有效成分也會產(chǎn)生一定的影響，因此控制藥材中水分含有量對保證中藥的質(zhì)量有重要意義[11]。取供試品粉末2.0 g，按照2015年版藥典規(guī)定的水分含量測定方法(通則0832第二法)進(jìn)行水分含量測定，計算供試品中含水量(%)。實驗結(jié)果見表2。

表2 14個不同種類與品種木瓜的水分、總灰分、浸出物含量

分析數(shù)據(jù)可知所測得的14種木瓜，均符合藥典中對水分測定的標(biāo)準(zhǔn)，不超過15%。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)地為北方的木瓜含水量少，產(chǎn)地為南方的木瓜含水量多。查閱南北氣候資料，可知氣候差異是影響木瓜含水量的因素之一。

2.2 總灰分測定

取供試品2.0 g，按照2015年版藥典規(guī)定的總灰分含量測定方法(通則2302)進(jìn)行總灰分含量測定，所有藥材樣品的總灰分含量都符合藥典要求(不得過5.0%)。結(jié)果見表2。

2.3 浸出物測定

取供試品約2 g，照醇溶性浸出物測定法(通則2201)項下的熱浸法測定，均符合藥典中對浸出物測定的標(biāo)準(zhǔn)，不少于15%。結(jié)果見表2。

2.4 HPLC測定熊果酸與齊墩果酸

2.4.1 對照品溶液配制

精密稱取齊墩果酸和熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，加甲醇溶解，超聲5 min，容甁至10 mL。0.45 μm微孔濾膜即得對照品溶液。

2.4.2 供試品溶液配制

將干燥木瓜用粉碎機(jī)粉碎，過60目篩，精密稱取樣品0.5 g ，置于50 mL具塞三角瓶中，移液管精密量取甲醇25 mL，超聲處理30 min，冷卻，搖勻，過濾到25 mL容量瓶定容，取續(xù)濾液，過0.45 μm的微孔濾膜，得供試品溶液。

2.4.3 色譜條件

色譜柱 Agilent ZORBAX SB-C18柱(mm*mm)；流動相 甲醇∶水=85∶15；柱溫 25℃；流速 0.6 mL/min；檢測波長 210 nm；進(jìn)樣量 20 μL，此方法分離效果較好。

2.4.4 線性關(guān)系的考察

精密吸取齊墩果酸和熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液母液0.1、0.2、0.4、0.5、0.6、0.8 mL分別置于 1 mL定容瓶里，稀釋定容。進(jìn)樣量為20 μL，以對照品濃度為橫坐標(biāo)(x)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)(y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見圖1、圖2。

圖1 熊果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4.5 精密度實驗

取齊墩果酸和熊果酸對照品混合溶液按“2.4.3”方法進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣5次。測得齊墩果酸峰面積積分平均值，RSD<1%，熊果酸峰面積積分平均值，RSD<1%，表明儀器精密度良好。

2.4.6 重復(fù)性實驗

等量取5份同一種供試品按“2.4.2”方法制備供試品溶液，按“2.4.3”方法進(jìn)入色譜儀測得齊墩果酸和熊果酸的RSD<3%說明該方法重復(fù)性良好。

2.4.7 穩(wěn)定性實驗

吸取同一供試品溶液，室溫下分別于0，1，4，8，12，16，20，24 h，按照“2.4.3”方法測定齊墩果酸與熊果酸峰面積，計算RSD<3%，說明穩(wěn)定性能良好。

2.4.8 加樣回收實驗

精密稱取同一批次木瓜粉末0.50 g， 按照“2.4.2”相下方法制備6 份溶液，分別加入等量的齊墩果酸、熊果酸，進(jìn)樣量20 μL，按照上述條件進(jìn)入高效液相色譜儀，以測量的峰面積計算RSD。結(jié)果顯示熊果酸和齊墩果酸的平均回收率分別為100.2%、100.0%；RSD分別為0.9%、1.1%(n=6)。

2.4.9 熊果酸與齊墩果酸含量

供試品測定齊墩果酸和熊果酸的含量見表3，14份木瓜藥材均符合藥典規(guī)定。

表3 14個不同種類與品種木瓜齊墩果酸和熊果酸的含量

3 討論與總結(jié)

查閱制約木瓜擴(kuò)大發(fā)展的資料中發(fā)現(xiàn)，市場中木瓜質(zhì)量參差不齊，質(zhì)量差異較大是制約木瓜發(fā)展的因素之一，因此本實驗在水分，灰分，浸出物，齊墩果酸與熊果酸等方面對14批不同產(chǎn)地的木瓜藥材進(jìn)行測定。實驗發(fā)現(xiàn)水分具有地域性差異，北方產(chǎn)地的木瓜含水量相對少一些，南方產(chǎn)地的木瓜含水量相對多一些。相對于灰分，浸出物則沒有明顯的規(guī)律變化。但這14批正品木瓜在水分，灰分，浸出物，齊墩果酸與熊果酸含量方面都符合藥典的要求。

目前已知的用于木瓜齊墩果酸的提取方法主要有五種，分別為：乙醇/酯溶劑提取法、超聲波提取法、微波提取法、索氏提取法、冷浸提取法。本文采用純甲醇提取熊果酸和齊墩果酸，實驗比較了不同濃度的乙醇、甲醇等提取溶劑, 結(jié)果純甲醇提取的樣品色譜峰形對稱, 基線穩(wěn)定, 因此選擇純甲醇作為提取溶劑。參考2015年版《中國藥典》有關(guān)木瓜高效液相的部分可知，藥典中采用流動相為甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(265∶35∶0.1∶0.05)，檢測波長為210 nm，柱溫為16～18℃的條件，由于三乙胺對色譜柱會產(chǎn)生不可逆的影響，有損色譜柱的壽命，所以本文有關(guān)高效液相的實驗沒有使用藥典中所規(guī)定的流動相。通過考察陳亮[11]、孟瑞麗[12]、趙亮[13]、李維霞[14]、侯廣月[15]等人有關(guān)高效液相的流動相條件以及在實驗中不斷的摸索和對實驗條件的不斷改進(jìn)，最終采用流動相為水∶甲醇=18∶85的條件，該方法簡便快捷，線性范圍寬，分離效果較好，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，符合色譜定量分析的要求。

現(xiàn)有的研究也提出：不同產(chǎn)地皺皮木瓜主要化學(xué)成分熊果酸含量及抗氧化活性以及 α-葡萄糖苷酶的抑制活性等方面存在差異，與本研究結(jié)果相符[16]。所以本實驗對木瓜基礎(chǔ)生藥學(xué)特征進(jìn)行研究，為建立不同產(chǎn)地木瓜藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了可靠的實驗依據(jù)，對臨床使用木瓜中藥材具有一定的參考價值，以期對木瓜的更深入研究提供基礎(chǔ)支持。