枸杞和茶花粉水提物對急性汞中毒小鼠肝腎的保護作用及機制研究

許翔　易永韜　龔健強　石俊　謝卓倫

【摘要】?目的?研究枸杞和茶花粉水提物對急性汞中毒小鼠肝腎的保護作用和機制。方法經(jīng)頸部皮下注射Hg?Cl2溶液建立小鼠急性汞中毒模型。枸杞茶花粉水提物的低、中、高?丶劑丶?量?組（2g/kg??4g/kg??8g/kg）均于每日同一時間灌胃給藥，連續(xù)給藥?7?d，同時設正常組小鼠（等體積生理鹽水）。末次灌胃給藥后小鼠禁食?12?h，測量小鼠體重，觀察小鼠的生理情況，檢測小鼠血清中血汞，同時測定血液、肝臟和腎臟中汞離子的含量，結(jié)果????與正常組小鼠比較，模型組小鼠體重顯著下降，逐漸出現(xiàn)頭痛、頭暈、嘔吐、腹瀉、乏力、寒戰(zhàn)、發(fā)熱（38～39℃），煩躁不安、失眠甚至抽搐、等癥狀，檢測小鼠血清中血汞（15μg/100?）肝臟、腎臟中汞離子含量低劑量組無明顯降低，中，高劑量組降低幅度不大。結(jié)論?枸杞和茶花粉水提物對急性汞中毒小鼠不具有良好的排汞作用，且作用效果與給藥劑量不呈正相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】枸杞??松花粉??氯化汞??排汞??修復??氧化損傷

金屬汞蒸氣的大量吸入是引起急性中毒的主要途徑。汞蒸氣吸入后，有75%～80%通過肺泡進入血液，分布全身，以腦、腎、肺貯汞量最多，貯存時間較久。金屬汞本身不能通過血腦屏障和胎盤，但進入血液后，汞會被氧化成二價汞離子，與血漿蛋白或含硫氨基酸結(jié)合進入腦組織和胎盤。汞與蛋白質(zhì)巰基有特殊親和力，與酶的巰基結(jié)合使一系列含巰基酶的活性受抑制，造成機體的代謝障礙，特別是中樞神經(jīng)系統(tǒng)和自主神經(jīng)的功能受到損害。汞化合物可經(jīng)消化道和皮膚黏膜迅速吸收，在消化道的吸收率與其在水及胃液中的溶解度有關(guān)。吸收后在血液中主要與血漿蛋白結(jié)合，小部分與血紅蛋白結(jié)合，隨血液分布于各臟器。以腎臟含量最高，80%的汞蓄積在。腎臟的近曲小管，引起腎小管上皮細胞腫脹壞死，汞離子與酶結(jié)合后，使酶活性喪失，影響細胞功能，造成中樞和自主神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂以及腎、消化道損害。兒童金屬汞中毒的臨床表現(xiàn)與汞暴露途徑、劑量和時間關(guān)系密切，?心、肺、肝、腎、脾、皮膚和淋巴結(jié)的損傷表現(xiàn)與成人金屬汞中毒相似，?但對腦和神經(jīng)系統(tǒng)的損害較為突出，?嚴重者可損害視力、聽力，?甚至影響體格和智力發(fā)育，口服升汞（主要成分為氯化汞）中毒量為0.1g，成人致死量為0.3～0.5g，小兒致死量為0.1g。氧化汞的致死量為1～1.5g。甘汞（主要成分為氯化亞汞）致死量為2～3g.汞及其化合物能通過多種途徑對機體產(chǎn)生以神經(jīng)性、肝臟和腎臟毒性為主的多系統(tǒng)損害。汞污染已成為一個全球性污染問題，?隨著汞及其化合物的污染問題日益嚴重，?如何預防及治療汞及其化合物對機體的毒性作用顯得極其重要。枸杞為茄目茄科枸杞屬植物，是當前最常見的藥用種類，具有滋補肝腎、益精明目、潤肺?等功效。現(xiàn)代醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)，枸杞子在降糖、降脂、抗腫瘤、抗氧化活性、抗動脈粥樣硬化、增強免疫力方面均有不錯的效果。而茶花粉則是近來引起廣泛關(guān)注的藥食兼用的滋補品，富含維生素C、E，并可提高?機體超氧化物歧化酶（SOD）含量，可拮抗脂質(zhì)過氧化損傷，具有較強的抗氧化活性和保肝作用。但目前對枸杞和花粉水提物具有減弱汞毒性的作用的研究較少。故研發(fā)安全、有效的汞中毒防治藥物具有深遠的意義。該實驗通過腹腔注射HgCl2溶液建立小鼠急性汞中毒模型，研究枸杞和茶花粉水提物對急性汞中毒小鼠肝腎的保護作用和機制，?以期為枸杞和花粉水提物預防和治療急性汞中毒提供科學依據(jù)。首先我們會對枸杞和茶花粉混合配制成水提物，以得最佳效果。實驗內(nèi)容主要包括四個部分，分別為預實驗、枸杞和茶花粉混合配制成水提物、小鼠染汞模型建立實驗、分組對比實驗觀察、枸杞和茶花粉水體物對小鼠肝腎的保護作用總結(jié)。

一、材料與方法

（一）預實驗

分別取0.05%，0.1%，0.15%濃度的氯化汞對小鼠進行急性汞中毒的預實驗。

取18只小鼠分三組。

對三組小鼠以不同濃度的氯化汞經(jīng)頸部皮下注射0.5mg/kg?bw，連續(xù)3d。

觀察小鼠的生理活動情況，通過觀察找出最有效的濃度為0.1%。

（二）枸杞和茶花粉混合配制成水提物

首先取25g枸杞和25g茶花粉，然后加入500mL去離子水。?85℃提取3h，離心取上清液，提取2次;合并上清液，濃縮、凍干即得枸杞和茶花粉水提物。

（三）小鼠染汞模型的建立

取年齡相同、體重接近、相同品種的健康KM小鼠40只，將小鼠適應性飼養(yǎng)1周，對其中30只小鼠進行染汞模型的建立，以氯化汞經(jīng)頸部皮下注射0.5mg/kgbw，連續(xù)3d，建立急性汞中毒模型。另外10只小鼠注射等量的生理鹽水溶液。為確保建模的準確性，在建模的過程中，小鼠逐漸出現(xiàn)頭痛、頭暈、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、乏力、全身酸痛、寒戰(zhàn)、發(fā)熱（38～39℃），嚴重者情緒激動、煩躁不安、失眠甚至抽搐、昏迷或精神失常等癥狀則說明建模成功。

（四）分組實驗及給藥

首先將40只實驗小鼠隨機分為四組每組10只，分別為對照組、實驗組（低劑量組、中劑量組、高劑量組）分組后將其都置于同一環(huán)境下實驗培養(yǎng)，實驗預期7d;保持室溫（24±2）℃，相對濕度（45±3）%，每日光照12h。

空白組：不作任何處理，正常飼養(yǎng)，觀察小鼠的生理活動情況，并做好記錄。

對照組：每天早晚灌胃等量的生理鹽水，觀察小鼠的生理活動情況，并做好記錄。

低劑量組：每天早晚灌胃提取物各一次，每次劑量為2g/kg，觀察小鼠的生理活動情況，并做好記錄。

中劑量組：每天早晚灌胃提取物各一次，每次劑量為4gkg，觀察小鼠的生理活動情況，并做好記錄。

高劑量組：每天早晚灌胃提取物各一次，每次劑量為8g/kg，觀察小鼠的生理活動情況，并做好記錄。

（五）實驗動物指標測定

末次灌胃給藥后各組小鼠禁食12h，?收集12h的尿液用于測定尿汞，LDH和ALP的含量或活性，在此期間停止食物供應，但給予去離子水喂養(yǎng)。尿液收集12h后，用乙醚麻醉小鼠，將小鼠以仰臥位固定在手術(shù)操作臺上，剪開腹部皮毛，然后腹主動脈取血，靜置1h，以3000r/min離心10min，分離得到血清，用于測定血汞、測定血液、肝臟和腎臟中汞離子的含量。

二、結(jié)果

對照組小鼠的體重增高，血汞，肝臟中的汞離子，尿汞，LDH，ALP都在正常值里波動，低劑量組小鼠的體重下降明顯，測得血汞，肝臟中的汞離子含量高，尿汞和LDH，ALP的含量高。中劑量組小鼠體重基本保持穩(wěn)定，血汞和肝臟中的汞離子含量偏高，尿汞，LDH，ALP，的含量也偏高，高劑量組小鼠的體重下降，血汞，肝臟中的汞離子，尿汞，LDH，ALP，的含量高于正常值。

三、討論

本實驗是以急性汞中毒的小鼠來探討枸杞和茶花粉的水提物是否有抗氧化和保護肝臟的作用。寧夏枸杞Lycium?barbarum?L.是一種藥食同源的名貴植物，?屬于茄科枸杞屬落葉灌木，?主要分布于我國的西北地區(qū)，?具有很高的藥用和食用價值。寧夏枸杞是唯一載入2010年版《中國藥典》的枸杞品種，其中，其根，莖，葉，花，果實都有很好的保健效果，具廣泛的藥理作用，有抗氧化性，抗腫瘤，保肝，神級保護等功能，而蜂花粉是蜜蜂從植物花藥上采集花粉并添加了少量唾液后加工而形成的餅狀物[11]，?素有“天然營養(yǎng)庫”之稱。已有研究表明蜂花粉中含有250多種物質(zhì)，?包括脂質(zhì)?（甘油三酯）?、脂肪酸、氨基酸、維生素、礦物質(zhì)?包括脂質(zhì)?（甘油三酯）?、脂肪酸、氨基酸、維生素、礦物質(zhì)、酚類以及類黃酮等物質(zhì)，?具有抗氧化、抑菌、抗病毒、抗炎以及增強免疫力等功效。因此，?蜂花粉作為傳統(tǒng)藥物和保健食品已經(jīng)得到廣泛應用。茶花粉是蜂花粉的一種，?主產(chǎn)于中國，?因其具有味甜可口、氣味清香等特點，?深受消費者的青睞。Kao等的研究發(fā)現(xiàn)，?茶花粉具有較強的抗氧化活性，?并含有多種酚類及黃酮類化合物，并含有多種酚類及黃酮類化合物，?如沒食子酸、阿魏酸、咖啡酸、兒茶素和蘆丁等。Yildiz等[13]證明天然食物中的多酚和黃酮類物質(zhì)與其保肝的活性有關(guān)，?但是到目前為止，?關(guān)于茶花粉保肝功效的研究鮮見報。而國內(nèi)外還沒有很多對枸杞茶花粉水提物作用的研究。

本實驗的結(jié)果表明枸杞和茶花粉的水提物對急性汞中毒小鼠的抗氧化和保肝作用不明顯。

參考文獻：

[1]孫德興，達春和.一起群體性兒童急性汞中毒事故的調(diào)查分析[J].工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病，2017，43（05）：396+399.

[2]王登強，陳林，林麗穎，俞永熹.兒童汞中毒10例分析[J].海峽預防醫(yī)學雜志，2006，（06）：84-85.

[43]臧琳，姜登東.汞對人體的危害及其預防[J].中國勞動防護用品，1999，（01）：39-40.

[4]劉東寬，楊進.急性汞中毒肝臟損害1例報告[J].中國工業(yè)醫(yī)學雜志，2005，（03）：142.

[5]鄭捷，鄭宇翔，肖鳳霞，林勵，林靖然.土茯苓對急性汞中毒大鼠的保護作用研究[J].中國實驗方劑學雜志，2014，20（04）：163-166.

[6]雷建武，米佳，羅青，張林鎖，張曦燕，閆亞美.枸杞中類胡蘿卜素及體外抗氧化活性研究[J].食品工業(yè)，2015，36（12）：5-8.

[7]蔣艷，姜孝新.枸杞多糖對肝癌荷瘤小鼠的抗腫瘤作用及其機制[J].腫瘤藥學，2011，1（04）：391-394.

[8]尹長江，楊坤寶，張學軍，宋鴻儒.枸杞總多糖對2型糖尿病大鼠的降糖作用研究[J].中成藥，2014，36（08）：1750-1753.