滿藥柞樹皮對番瀉葉致瀉大鼠的藥效學(xué)研究

張笑梅，陳光暉

（承德醫(yī)學(xué)院河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，河北 承德）

0 引言

滿藥柞樹皮（mongolian oak bark），為殼斗科植物蒙櫟的樹皮，味微苦，澀，平。主要分布于華北、東北及山東等地，資源豐富?！都种胁菟帯泛汀度珖胁菟巺R編》中有記載：柞樹皮具有清熱解毒，消腫利濕的效用，主治細菌性痢疾，急性胃腸炎，小兒消化不良，黃疸，急慢性支氣管炎等疾病[1]。本實驗通過研究柞樹皮對番瀉葉致瀉大鼠的治療作用，來探究柞樹皮的止瀉藥效效果。

1 實驗材料及儀器

1.1 實驗動物

SD 大鼠60 只，雌雄各半，體重（240±20）g，SPF 級，購自遼寧長春生物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK（遼）2010-0001。于承德醫(yī)學(xué)院動物中心屏障環(huán)境內(nèi)飼養(yǎng)。

1.2 藥物與試劑

柞樹皮，由承德醫(yī)學(xué)院中藥藥理教研室提供。番瀉葉，購自北京同仁堂藥店。藿香正氣水，太極牌，批號：18011024023。

1.3 實驗儀器

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（N-1100），低溫冷卻循環(huán)泵（DLSB-10/20），循環(huán)水式真空泵（SHZ-D Ⅲ），凍干機（LGJ-22D），ExcelsiorTM E S 全自動組織脫水機，Histocentre 3TM 組織包埋機等。

2 實驗方法

2.1 藥物制備

2.1.1 柞樹皮凍干粉的制備

取750g 柞樹皮生藥煎成水煎劑，藥液抽吸過濾后進行減壓濃縮放入凍干機，凍干48h 得到柞樹皮凍干粉71.944g（1g 凍干粉相當(dāng)于10.425g 生藥）。

2.1.2 番瀉葉凍干粉的制備

取250g 番瀉葉生藥放入燒杯內(nèi)，加入四倍沸水1000mL 浸沒30min，兩層紗布濾過后再加入四倍沸水浸沒30min，將兩次濾液合并減壓濃縮放入凍干機，凍干48h 得到番瀉葉凍干粉70.098g （1g 凍干粉相當(dāng)于3.566g 生藥）。

2.2 分組

將60 只大鼠按隨機數(shù)字表法隨機分為6 組，每組十只，雌雄各半。六組分別為：正常組（NC），模型組（Model），陽性對照組（PC），柞樹皮低劑量組（L），柞樹皮中劑量組（M）和柞樹皮高劑量組（H）。

2.3 大鼠腹瀉模型的制備

各組適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后開始進行實驗，除NC 組使用生理鹽水灌胃外，其余五組每天使用番瀉葉進行灌胃（1.5g 生藥/kg），連續(xù)一周造成嚴(yán)重腹瀉模型。

2.4 柞樹皮對腹瀉模型的治療

造模第七天在番瀉葉灌胃1h 后，NC 組使用生理鹽水灌胃，PC 組使用藿香正氣水灌胃（1.8mL/kg），三個治療組分別用不同劑量柞樹皮水煎劑進行灌胃（L 組1g 生藥/Kg，M 組2g 生藥/Kg，H組3g 生藥/Kg，分別相當(dāng)于臨床劑量10g，20g，30g）。灌胃后將大鼠放置于鋪有定性濾紙的代謝籠內(nèi)，觀察大鼠一般行為及腹瀉情況，并定時更換濾紙。最終計算6 小時內(nèi)的腹瀉指數(shù)作為評價指標(biāo)[2-4]。（腹瀉指數(shù)＝稀便率×稀便級。其中稀便率為每只大鼠所排稀便數(shù)與總便數(shù)之比，稀便級：根據(jù)稀便污染濾紙上的污跡范圍大小分為4 級：1 級：污跡直徑＜1cm，2 級：污跡直徑＜1～1.9cm，3 級：污跡直徑＜2～3cm，4 級污跡直徑＞3cm。）

2.5 大鼠結(jié)腸HE 染色

將各組大鼠注射20%烏拉坦麻醉處死后立即切開腹腔，每只取遠端結(jié)腸組織約1cm 用生理鹽水沖洗干凈后放入4%多聚甲醛中進行固定。充分固定48 小時以上使用PBS 浸泡1h 后進行常規(guī)脫水、透明、浸蠟和石蠟包埋，包埋后進行切片，片厚5μm。烘片2h 后經(jīng)二甲苯脫蠟，不同濃度乙醇脫水，進行常規(guī)蘇木素-伊紅染色，染色后脫水透明行中性樹膠封片。在光鏡下對大鼠結(jié)腸組織切片進行觀察并拍照。

2.6 統(tǒng)計學(xué)處理

使用軟件SPSS 19.0 對各組實驗數(shù)據(jù)進行處理，結(jié)果用均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）進行表示，各組間差異采用單因素方差分析。若P＜0.05，代表組間數(shù)據(jù)對比差異明顯，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 實驗結(jié)果

3.1 模型制備結(jié)果

使用番瀉葉連續(xù)灌胃一周后，對比空白組，造模大鼠腹瀉率達到100%，肛周可見黃色稀便附著，毛色稍顯晦暗，行為無明顯改變，說明造成大鼠腹瀉模型成功[5]。

3.2 柞樹皮治療作用

表1 各組腹瀉指數(shù)數(shù)據(jù)表

通過對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，可以發(fā)現(xiàn)，使用柞樹皮水煎劑治療后的模型大鼠無論是稀便次數(shù)還是腹瀉指數(shù)等指標(biāo)與單純造模的大鼠相比都具有顯著差異（P＜0.05），對照組與柞樹皮各劑量組對模型大鼠都具有一定的止瀉作用，其中柞樹皮中、高劑量組腹瀉指數(shù)下降更為明顯（P＜0.01，F(xiàn)=7.432）。

3.3 HE 染色結(jié)果

通過在光鏡下觀察各組結(jié)腸組織HE 染色切片，可以發(fā)現(xiàn)正常組大鼠腸粘膜結(jié)構(gòu)完整，絨毛排列整齊，未見到組織壞死脫落，而造模后大鼠結(jié)腸腸壁黏膜部分有淋巴細胞浸潤和輕度充血水腫。實驗中在使用柞樹皮水煎劑治療后，對比模型組，大鼠結(jié)腸組織充血水腫情況有一定改善，黏膜組織結(jié)構(gòu)未見明顯異常。

4 討論

腹瀉作為一種臨床常見癥狀，常由于各種感染性因素及非感染性因素引起，主要是指便次增多超過平日習(xí)慣的頻率，糞質(zhì)稀薄，含水量增加，每天排便量超過200 g， 或含未消化食物或膿血、黏液。通常還伴有排便急迫感、肛門不適、失禁等癥狀[6-7]。臨床治療通常采取補液糾正電解質(zhì)紊亂并應(yīng)用抗生素抑制腸道感染，長期使用易產(chǎn)生耐藥性，而濫用抗生素還可能會導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)，引發(fā)藥源性腹瀉。中藥因其療效確切、毒副作用小等因素故而在治療急慢性腹瀉方面有著其獨到的優(yōu)勢[8]。

表2 各組大鼠結(jié)腸組織HE 染色結(jié)果（HE 染色＊400）

滿藥作為民族醫(yī)藥的一種，也是中國傳統(tǒng)中醫(yī)藥的重要組成部分，現(xiàn)已錄入滿族非物質(zhì)文化遺產(chǎn)。熱河是滿族的第二故鄉(xiāng)，在進行當(dāng)?shù)厮幉钠詹橹邪l(fā)現(xiàn)民間有使用柞樹皮來治療腹瀉的療法，后在對已有文獻的研究中也發(fā)現(xiàn)有運用柞樹皮煎劑治療牲畜腹瀉及小兒腹瀉的臨床案例存在[9-10]。通過本實驗的研究可以發(fā)現(xiàn)，柞樹皮的確具有良好的腹瀉治療作用，實驗中治療組在用藥后可明顯改善大鼠的稀便次數(shù)和稀便程度，對比模型組腹瀉指數(shù)有顯著下降，通過病理切片觀察還可以發(fā)現(xiàn)柞樹皮可以改善腸黏膜狀態(tài)，對腸道的后續(xù)恢復(fù)也有一定效果。