• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    一種新的油桐黑斑病病原及其生物學(xué)特性研究

    2020-05-09 10:34徐紅梅鄧先珍杜洋文
    湖北林業(yè)科技 2020年1期
    關(guān)鍵詞:毒力測(cè)定生物學(xué)特性

    徐紅梅 鄧先珍 杜洋文

    摘 要:本文報(bào)道了湖北省武陵山區(qū)一種新的油桐黑斑病病原真菌,并對(duì)其開(kāi)展了生物學(xué)特性和對(duì)農(nóng)藥敏感性研究。從油桐黑斑病發(fā)病葉片中分離到的JF-4菌株生長(zhǎng)迅速,致病力強(qiáng)。菌株培養(yǎng)性狀、產(chǎn)孢特征結(jié)合核糖體rDNA基因轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)和RNA聚合酶次大亞基基因(RPB2)分析表明該菌為小新殼梭孢Neofusicoccum parvum。該病原菌對(duì)環(huán)境適應(yīng)能力較強(qiáng),對(duì)5種供試殺菌劑敏感性不同,43%戊唑醇懸乳劑抑菌率最高。

    關(guān)鍵詞:油桐黑斑病;病原鑒定;生物學(xué)特性;毒力測(cè)定

    中圖分類號(hào):S763.1 ??文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A ??文章編號(hào):1004-3020(2020)01-0027-04

    Abstract:A newly identified pathogen of Mycosphaerella aleuritidis and its biological characteristics was studied in this paper.Isolated from diseased leaves,the pathogen of JF-4 grew rapidly with strong pathogenicity.Based on cultural character,sporogenous structure,ITS with RPB2 analysis,Neofusicoccum parvum was the newly identified pathogen.The mycelia could grow under different environment with good acclimatization.Toxicity of 5 fungicides to the pathogen was tested in the lab. Different fungicides inhibited the growth of mycelia at different levels,and 43% tebuconazole SE showed best effect.

    Key words:Mycosphaerella aleuritidis;pathogen identification;biological characteristics;toxicity test

    油桐是大戟科油桐屬植物統(tǒng)稱,是中國(guó)特有的油料樹(shù)種,其種子中含有的桐油不僅是重要的工業(yè)油料,也是生物柴油的主要原料之一。油桐在中國(guó)亞熱帶地區(qū)的丘陵地帶種植范圍較廣。武陵山區(qū)自然條件適于種植油桐,歷史上一直是中國(guó)桐油中心產(chǎn)區(qū)。油桐產(chǎn)業(yè)是該區(qū)重要的特色資源產(chǎn)業(yè)[1]。

    良好的撫育管理措施是保證油桐豐產(chǎn)、高產(chǎn)的前提條件,病蟲(chóng)害防治是油桐栽培管理的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[2]。油桐黑斑病又稱為角斑病,果實(shí)黑疤病,能引起嚴(yán)重的枯果和落果。在油桐產(chǎn)區(qū)發(fā)生普遍,該病主要發(fā)生在葉片、葉柄和果實(shí)上,病葉初期出現(xiàn)褐色小點(diǎn),逐漸擴(kuò)大成圓斑或因受葉脈的限制而成多角形的病斑,多數(shù)病斑可以相互聯(lián)合成大塊斑。病害嚴(yán)重者,全株枯死。過(guò)去認(rèn)為,該病主要由油桐尾孢菌Cercospora aleuritidis Miyake.侵染所致[3-4]。

    作者對(duì)湖北省武陵山區(qū)油桐病蟲(chóng)害進(jìn)行了調(diào)查,其中油桐黑斑病發(fā)生十分嚴(yán)重。本文對(duì)該地一株新的油桐黑斑病病原進(jìn)行了鑒定和生物學(xué)特性研究,以期為病害發(fā)生規(guī)律及防治研究提供理論依據(jù)。

    1 材料和方法

    1.1 病原物

    黑斑病發(fā)病葉片源自湖北省來(lái)鳳縣百福司鎮(zhèn)沙道灣村油桐林,供試JF-4菌株采用組織分離法分離并純化后保存于4 ℃冰箱備用。

    1.2 致病性測(cè)定

    采用離體接種法測(cè)試JF-4菌株的致病性。油桐健康葉片源自湖北省林科院九峰油桐示范林。剪取健康葉片,放入保鮮盒中,取長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿的菌絲塊緊貼在葉片表面,對(duì)照加無(wú)菌培養(yǎng)基塊,25 ℃恒溫培養(yǎng),保持90%相對(duì)濕度。48 h后觀察葉片發(fā)病情況,并記錄發(fā)病癥狀。將發(fā)病葉片進(jìn)行組織分離,獲得再分離菌株,與原接種菌株進(jìn)行對(duì)比。依照柯赫氏法則判定菌株是否為致病菌

    1.3 病原菌的培養(yǎng)性狀、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)觀察與分子測(cè)序

    將JF-4菌株接種在PDA平板上,25 ℃培養(yǎng)3 d,觀察培養(yǎng)性狀和特征,主要包括生長(zhǎng)速度、菌絲顏色、是否有氣生菌絲、菌落結(jié)構(gòu)及色素產(chǎn)生情況等;觀察病斑組織的解剖特征并將菌株接種在水瓊脂添加無(wú)菌松針(馬尾松)培養(yǎng)基,25 ℃恒溫黑暗培養(yǎng)25 d左右,近紫外光照射(誘導(dǎo)產(chǎn)孢)。挑取載孢體,在光學(xué)顯微鏡下觀察、記錄產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和孢子形態(tài)特征。

    病原物基因組提取采用微波爐裂解法。核糖體DNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS1-5.8S-ITS2)基因擴(kuò)增采用通用引物ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)和ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)[5],RNA聚合酶次大亞基基因(RPB2)擴(kuò)增采用引物RPB2bot6F(5′-GGTAGCGACGTCACTCCC-3′)和RPB2

    bot7R(5′-GGATGGATCTCGCAATGCG-3′)[6](PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件為:94 ℃預(yù)變性4 min;94 ℃變性1 min,54 ℃退火1 min,72 ℃延伸1 min,36次循環(huán);最后72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測(cè)序。病原物ITS和RPB基因序列進(jìn)行BLAST比對(duì)后獲得多個(gè)匹配的序列記錄,用CLUSTAL X軟件包進(jìn)行多序列比對(duì)。

    1.4 病原菌生物學(xué)特性研究

    1.4.1 溫度對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響

    將供試菌株在25 ℃恒溫箱中預(yù)培養(yǎng)3 d,于菌落邊緣打取直徑為5 mm的菌餅,接種于PDA平板上,分別置于10、15、20、25、30、35、40 ℃恒溫箱中培養(yǎng),每個(gè)處理重復(fù)3次,4 d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。

    1.4.2 pH值對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響

    用1 mol·L-1 HCL和1 mol·L-1 NaOH調(diào)節(jié)PDA培養(yǎng)基的pH值至4、5、6、7、8、9(酸度計(jì)測(cè)量pH值)。按1.4.1所述方法分別接種菌餅于不同pH值PDA培養(yǎng)基,置于25℃恒溫箱中培養(yǎng)。每個(gè)處理重復(fù)3次,4 d后測(cè)量菌落直徑。

    1.4.3 碳源和氮源對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響

    以查彼培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基(硝酸鉀2.0 g,磷酸氫鉀1.0 g,氯化鉀0.5 g,硫酸鎂0.5 g,硫酸亞鐵0.01 g,蒸餾水1 000 mL)。供試碳源為葡萄糖30.0 g,甘露醇27.6 g,可溶性淀粉24.55 g,麥芽糖27.25 g,蔗糖25.9 g(用量以葡萄糖30.0 g含碳量10.9 g為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行換算),滅菌后接種,以無(wú)碳源處理作為對(duì)照。每個(gè)處理重復(fù)3次,置于25 ℃恒溫箱中培養(yǎng),4 d后測(cè)量菌落直徑。

    供試氮源為硝酸鉀10.0 g,尿素3.0 g,硫酸銨6.6 g,甘氨酸7.5 g,硝酸銨4.0 g(用量以硝酸鉀10.0 g的含氮量1.4 g為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行換算),滅菌后接種,以無(wú)氮源處理作為對(duì)照。每個(gè)處理重復(fù)3次,置于25 ℃恒溫箱中培養(yǎng),4 d后測(cè)量菌落直徑。

    1.4.4 不同殺菌劑對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的毒力測(cè)定

    在無(wú)菌操作條件下,將供試殺菌劑分別用無(wú)菌水稀釋成所需濃度10倍于供試濃度的5個(gè)系列濃度梯度的藥液。向培養(yǎng)皿中加入藥液1 mL,再加入9 mL冷卻至50~60 ℃的PDA培養(yǎng)基,充分混勻,最終配制成所需濃度的含藥培養(yǎng)基,以不含藥劑的培養(yǎng)基作為對(duì)照,每個(gè)濃度重復(fù)4次。供試藥劑和使用濃度見(jiàn)表1。

    采用生長(zhǎng)速率法對(duì)菌絲生長(zhǎng)進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定[7]:在每個(gè)含藥劑平板中央接入一塊直徑為5 mm的菌餅,25 ℃恒溫箱中培養(yǎng)4 d后測(cè)量菌落直徑,根據(jù)以下公式計(jì)算各藥劑濃度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率。所得數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,求出各藥劑毒力回歸方程、EC50及相關(guān)系數(shù)。

    抑菌率(%)=對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑對(duì)照菌落直徑-菌病直徑×100

    2 結(jié)果和分析

    2.1 病原物致病性

    葉片接種JF-4菌株3 d后出現(xiàn)褐色病斑,病斑形狀不規(guī)則,在25 ℃恒溫和高濕環(huán)境下,病斑擴(kuò)展迅速,15 d后部分供試嫩葉整葉褐化壞死。發(fā)病葉片組織分離后所得再分離菌株與接種菌株特征一致,符合柯赫氏法則。

    JF-4菌株引起葉片產(chǎn)生黑斑病,為油桐黑斑病病原真菌。

    2.2 病原物的培養(yǎng)性狀、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)觀察及分子鑒定

    JF-4菌株在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)迅速,氣生菌絲發(fā)達(dá);生長(zhǎng)初期菌落呈白色,后逐步轉(zhuǎn)為灰色。在野外病株和人工接種病斑組織中觀察不到該菌有性或無(wú)性繁殖結(jié)構(gòu),而該菌在誘導(dǎo)培養(yǎng)(含無(wú)菌松針的水瓊脂+近紫外照射)條件下可產(chǎn)生子實(shí)體。分生孢子器梨形或球形,分生孢子單胞,近橢圓形。

    PCR產(chǎn)物瓊脂糖電泳結(jié)果顯示,ITS和RPB2基因片段大小均在500bp左右。BLAST序列對(duì)比表明這兩個(gè)基因序列與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中多個(gè)Neofusicoccum菌株的相似性達(dá)到100%。

    結(jié)合JF-4菌株培養(yǎng)性狀、產(chǎn)孢特征以及核糖體rDNA基因轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)和RNA聚合酶次大亞基基因(RPB2)序列分析[8-10],將該病原菌鑒定為小新殼梭孢N.parvum,該菌是葡萄座腔菌科Botryosphaeriaceae菌物的無(wú)性型。

    2.3 病原菌生物學(xué)特性

    2.3.1 溫度對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響

    該菌在10~40 ℃溫度范圍均能生長(zhǎng),25~30 ℃菌絲生長(zhǎng)較快,其中25 ℃為最適生長(zhǎng)溫度,培養(yǎng)4 d后菌落平均直徑為85.0 mm。高溫和低溫均不利于菌絲生長(zhǎng)。當(dāng)溫度低于10 ℃或者高于40 ℃時(shí),菌絲生長(zhǎng)速度緩慢(見(jiàn)圖1)。

    2.3.2 pH值對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響

    該菌在pH值4~9范圍內(nèi)生長(zhǎng)速度均較快,培養(yǎng)4d后菌落平均直徑為54.3~85.0 mm;其中pH值為7是最適生長(zhǎng)pH值,菌落平均直徑為85 mm,pH值8~9時(shí)菌落生長(zhǎng)速度稍微降低,菌落直徑為72.7~80 mm(見(jiàn)圖2)。由此可見(jiàn),該菌對(duì)環(huán)境酸堿性適應(yīng)性強(qiáng)。

    2.3.3 碳源和氮源對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響

    該菌在供試5種碳源培養(yǎng)基中均能生長(zhǎng),菌落生長(zhǎng)速度遠(yuǎn)大于缺碳對(duì)照,在葡萄糖培養(yǎng)基上菌落直徑最大,培養(yǎng)4 d后菌落平均直徑為85.0 mm,其次是蔗糖、淀粉和麥芽糖、甘露醇。總體說(shuō)來(lái),該菌利用環(huán)境中碳源能力很強(qiáng)。不同碳源培養(yǎng)基上菌落培養(yǎng)性狀差異不大,葡萄糖為該菌菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源(見(jiàn)圖3)。

    從圖4可以看出,該菌在供試5種氮源培養(yǎng)基中均能生長(zhǎng),菌落生長(zhǎng)速度遠(yuǎn)大于缺氮對(duì)照,在硫酸銨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度最快,培養(yǎng)4 d后菌落菌落平均直徑達(dá)到85.0 mm,其次是尿素、硝酸銨、硝酸鉀和甘氨酸??傮w說(shuō)來(lái),該菌利用環(huán)境中氮源能力很強(qiáng)。不同氮源培養(yǎng)基上菌落培養(yǎng)性狀差異不大,硫酸銨為該菌菌絲生長(zhǎng)的最佳氮碳源。

    2.3.4 不同殺菌劑對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響

    室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明,供試5種殺菌劑對(duì)該病原菌毒力不同,從大到小依次為:43%戊唑醇懸乳劑﹥50%多菌靈超微可濕性粉劑﹥12.5%氟環(huán)唑懸乳劑﹥70%代森錳鋅可濕性粉劑﹥75%百菌清可濕性粉劑。43%戊唑醇懸乳劑對(duì)該病原菌的抑制效果最好,75%百菌清可濕性粉劑效果最差,各殺菌劑對(duì)油桐枯萎病的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

    3 結(jié)論與討論

    本文報(bào)道了湖北省武陵山區(qū)一種新的油桐黑斑病病原真菌,并開(kāi)展了病原菌生物學(xué)特性和對(duì)農(nóng)藥敏感性等研究,為研究該病害的發(fā)生規(guī)律和防治提供理論依據(jù)。

    從油桐黑斑病發(fā)病材料中分離到的JF-4菌株生長(zhǎng)迅速,致病力強(qiáng)。培養(yǎng)性狀、產(chǎn)孢特征結(jié)合核糖體rDNA基因轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)和RNA聚合酶次大亞基基因(RPB2)分析表明該菌為小新殼梭孢。

    生物學(xué)特性研究表明,該病原菌在10~40 ℃溫度范圍均能生長(zhǎng),最適生溫度為25~30 ℃;病原菌在pH值4~9范圍內(nèi)生長(zhǎng)速度均較快,表明病原菌對(duì)環(huán)境酸堿度適應(yīng)能力較強(qiáng),在酸性、中性和堿性土壤條件下均能快速生長(zhǎng)。該病原菌能利用環(huán)境中的多種碳源和氮源,葡萄糖和硫酸銨分別為該菌菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源和氮源,在生產(chǎn)管理中應(yīng)注意合理施肥。總體說(shuō)來(lái),該油桐黑斑病病原菌對(duì)環(huán)境適應(yīng)能力很強(qiáng),生長(zhǎng)迅速,該生物學(xué)特性為其快速侵染和傳播奠定了基礎(chǔ)。

    室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明,供試5種殺菌劑對(duì)該病原菌毒力不同。毒力較強(qiáng)殺菌劑為:43%戊唑醇懸乳劑、50%多菌靈超微可濕性粉劑和12.5%氟環(huán)唑懸乳劑;毒力較差殺菌劑為:75%百菌清可濕性粉劑和70%代森錳鋅可濕性粉劑。生產(chǎn)過(guò)程中可以參考本研究結(jié)果,選擇43%戊唑醇懸乳劑等殺菌劑防治此類油桐黑斑病。

    參 考 文 獻(xiàn)

    [1]姚茂華.振興武陵山區(qū)油桐產(chǎn)業(yè)的思考[J].凱里學(xué)院學(xué)報(bào),2011,29(6):87-89.

    [2]方嘉興,何方.中國(guó)油桐[M].北京:中國(guó)林業(yè)出版社,1998.

    [3]陳鵬,劉宏屏,王達(dá)明,等.云南油桐黑斑病危險(xiǎn)性分析[J].林業(yè)調(diào)查規(guī)劃,2006,31(2):116-118.

    [4]和波益,白如禮.福貢縣油桐林油桐黑斑病的成因及防治措施[J].云南林業(yè)科技,1999,(3):45-47.

    [5]White TJ,Bruns S,Lee S,et a.Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics[M].Innis M A,Gelfand D H,Sninsky J J.(eds.)PCR Protocols:A Guide to Methods and Applications,New York,Academic Press.1990:315-322.

    [6]Pavlic D,Slippers B,Coutinho TA,et a.Multiple gene genealogies and phenotypic data reveal cryptic species of the Botryosphaeriaceae:a case study on the Neofusicoccum parvum/N.ribis complex.Molecular Phylogenetics and Evolution,2009(51):259-268.

    [7]FAO.Recommended methods for the detection and measurement of resistance of agricultural pests to pestcides[J].FAO Plant Prot Bull,1982,30(2):30-36.

    [8]邵力平,沈瑞祥,張素軒,等.真菌分類學(xué)[M].北京:中國(guó)林業(yè)出版社,1984.

    [9]張中義,冷懷瓊,張志銘,等.植物病原真菌學(xué)[M].成都:四川科學(xué)技術(shù)出版社,1988.

    [10]袁志林,陳益存,汪陽(yáng)東.一種新發(fā)生的油桐葉枯病病原真菌[J].菌物學(xué)報(bào),2011,30(4):658-662.

    (責(zé)任編輯:唐 嵐)

    猜你喜歡
    毒力測(cè)定生物學(xué)特性
    一株野生側(cè)耳屬菌株的分離鑒定與生物學(xué)特性
    煙蚜對(duì)6種殺蟲(chóng)劑敏感基線的建立
    咖啡炭疽病菌生物學(xué)特性及其毒力測(cè)定
    氰氟蟲(chóng)腙與醚菊酯混配對(duì)水稻縱卷葉螟的增效作用與防治效果束兆林
    膠紅酵母(Rhodotorula mucilaginosa)對(duì)梨果采后青霉病、灰霉病的控制效果
    海南椰子堅(jiān)蚜對(duì)五種殺蟲(chóng)劑的敏感性比較
    9種殺菌劑對(duì)茄子褐紋病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定
    国产熟女xx| 国产精品久久视频播放| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 人人澡人人妻人| 精品久久久久久成人av| 久久国产精品人妻蜜桃| 9色porny在线观看| 在线国产一区二区在线| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产精品综合久久久久久久免费 | 51午夜福利影视在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 欧美日韩黄片免| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产亚洲av高清不卡| 激情视频va一区二区三区| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产成人av激情在线播放| 色综合婷婷激情| 老熟妇仑乱视频hdxx| 欧美黄色片欧美黄色片| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产精品 欧美亚洲| 成人黄色视频免费在线看| 99在线视频只有这里精品首页| 国产成人啪精品午夜网站| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 在线观看免费视频网站a站| 国产伦人伦偷精品视频| 国产亚洲欧美精品永久| 国产精品国产高清国产av| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲少妇的诱惑av| 色老头精品视频在线观看| 丝袜美足系列| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 欧美日韩乱码在线| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 日韩欧美三级三区| 99riav亚洲国产免费| 高清在线国产一区| 国产精品98久久久久久宅男小说| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲五月婷婷丁香| xxx96com| 欧美日韩亚洲高清精品| 午夜福利在线免费观看网站| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲自拍偷在线| 90打野战视频偷拍视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 美女福利国产在线| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产av精品麻豆| 国产成人av教育| 色综合站精品国产| 人人妻人人澡人人看| 丁香六月欧美| 精品电影一区二区在线| 久久中文字幕人妻熟女| 高清av免费在线| 手机成人av网站| 日本 av在线| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产精品永久免费网站| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲,欧美精品.| 久久性视频一级片| 美女福利国产在线| 在线视频色国产色| 中文字幕人妻丝袜制服| 中出人妻视频一区二区| 国产精品国产高清国产av| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美日韩av久久| 国产av一区二区精品久久| 亚洲国产欧美一区二区综合| 男女高潮啪啪啪动态图| 欧美乱色亚洲激情| 韩国精品一区二区三区| 久久久国产精品麻豆| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久国产精品影院| 老汉色av国产亚洲站长工具| 美女 人体艺术 gogo| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲伊人色综图| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 波多野结衣av一区二区av| 男女之事视频高清在线观看| 日本三级黄在线观看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 在线免费观看的www视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 午夜久久久在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲av美国av| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 99re在线观看精品视频| 欧美精品一区二区免费开放| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 午夜福利欧美成人| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 欧美在线一区亚洲| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产三级在线视频| 国产黄色免费在线视频| 国产1区2区3区精品| 乱人伦中国视频| 18禁美女被吸乳视频| 日本三级黄在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 男人舔女人下体高潮全视频| 色综合婷婷激情| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美黄色淫秽网站| 国产精品电影一区二区三区| 欧美人与性动交α欧美软件| 999久久久国产精品视频| 在线观看一区二区三区激情| 国产一区在线观看成人免费| 男女床上黄色一级片免费看| 操出白浆在线播放| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 午夜福利免费观看在线| 欧美一级毛片孕妇| 麻豆久久精品国产亚洲av | 日韩免费高清中文字幕av| 欧美在线黄色| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 脱女人内裤的视频| 真人做人爱边吃奶动态| 色婷婷久久久亚洲欧美| 1024香蕉在线观看| 日本wwww免费看| 日韩国内少妇激情av| 婷婷六月久久综合丁香| 免费在线观看黄色视频的| av电影中文网址| 男女下面进入的视频免费午夜 | 另类亚洲欧美激情| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 一级毛片女人18水好多| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 超碰成人久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲美女黄片视频| 国产一区二区激情短视频| 黄片大片在线免费观看| 麻豆一二三区av精品| 国产一区在线观看成人免费| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 欧美最黄视频在线播放免费 | 无人区码免费观看不卡| www日本在线高清视频| 宅男免费午夜| 午夜老司机福利片| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 99香蕉大伊视频| 午夜免费观看网址| 亚洲人成77777在线视频| 少妇的丰满在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产高清激情床上av| 欧美人与性动交α欧美软件| 在线观看www视频免费| 黄色 视频免费看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 老汉色av国产亚洲站长工具| a在线观看视频网站| 精品久久久久久成人av| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 69av精品久久久久久| 怎么达到女性高潮| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 久9热在线精品视频| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 一区二区三区精品91| 久久精品国产综合久久久| 丰满的人妻完整版| aaaaa片日本免费| 一二三四在线观看免费中文在| 国产精品一区二区三区四区久久 | 免费观看人在逋| svipshipincom国产片| 999精品在线视频| 欧美激情高清一区二区三区| 窝窝影院91人妻| 欧美在线黄色| 精品无人区乱码1区二区| 国产精品免费视频内射| 黄频高清免费视频| 99精品在免费线老司机午夜| av视频免费观看在线观看| 一区在线观看完整版| 亚洲国产精品合色在线| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产av一区在线观看免费| 纯流量卡能插随身wifi吗| 一夜夜www| 黄片播放在线免费| 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲成人免费电影在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 真人做人爱边吃奶动态| 欧美黑人精品巨大| 在线av久久热| ponron亚洲| 大型av网站在线播放| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产精品国产av在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 女同久久另类99精品国产91| 日本免费a在线| 91老司机精品| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产97色在线日韩免费| 18禁观看日本| 国产精品久久视频播放| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 淫秽高清视频在线观看| 午夜免费鲁丝| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久人人精品亚洲av| 国产精品成人在线| 手机成人av网站| 90打野战视频偷拍视频| 看免费av毛片| 久久精品国产清高在天天线| www.精华液| www.自偷自拍.com| 一区在线观看完整版| av免费在线观看网站| 国产av精品麻豆| 一级毛片女人18水好多| 日韩欧美三级三区| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲伊人色综图| 青草久久国产| 黄色成人免费大全| 久久精品人人爽人人爽视色| 黄色a级毛片大全视频| 国产真人三级小视频在线观看| 三级毛片av免费| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产精品野战在线观看 | 精品高清国产在线一区| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 免费看a级黄色片| tocl精华| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲人成电影观看| 欧美不卡视频在线免费观看 | 久久中文字幕一级| 美女扒开内裤让男人捅视频| 免费看a级黄色片| tocl精华| 亚洲精品在线美女| 麻豆av在线久日| 又黄又粗又硬又大视频| 午夜福利在线免费观看网站| 麻豆一二三区av精品| 免费在线观看完整版高清| 少妇的丰满在线观看| 精品电影一区二区在线| 久9热在线精品视频| 国产亚洲av高清不卡| 99国产精品一区二区蜜桃av| 成人永久免费在线观看视频| 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 岛国视频午夜一区免费看| 免费观看人在逋| 免费在线观看亚洲国产| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲片人在线观看| 日韩大码丰满熟妇| 国产成人啪精品午夜网站| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲自拍偷在线| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 中文字幕高清在线视频| 国产av在哪里看| 久久久国产精品麻豆| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美国产精品va在线观看不卡| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲欧美精品综合久久99| 97碰自拍视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 久热爱精品视频在线9| 丁香欧美五月| av网站免费在线观看视频| 免费在线观看日本一区| 久热这里只有精品99| 涩涩av久久男人的天堂| 视频区图区小说| 中文亚洲av片在线观看爽| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲精品久久午夜乱码| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产精品一区二区免费欧美| 国产成年人精品一区二区 | 啦啦啦 在线观看视频| 搡老乐熟女国产| 日本 av在线| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 午夜精品在线福利| 亚洲精品国产区一区二| 久久精品亚洲av国产电影网| 999久久久精品免费观看国产| 日韩高清综合在线| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 日韩国内少妇激情av| 国产亚洲精品久久久久5区| 色综合婷婷激情| 在线天堂中文资源库| 久久久久久久久免费视频了| 日本精品一区二区三区蜜桃| 免费观看精品视频网站| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲在线自拍视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 久久精品国产清高在天天线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久狼人影院| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| av网站在线播放免费| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产区一区二久久| 亚洲成人免费av在线播放| 极品人妻少妇av视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 久久人人97超碰香蕉20202| 久9热在线精品视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 操出白浆在线播放| 亚洲伊人色综图| 日本wwww免费看| 亚洲专区中文字幕在线| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲黑人精品在线| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 欧美日韩国产mv在线观看视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 香蕉久久夜色| cao死你这个sao货| 麻豆成人av在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 电影成人av| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 男人的好看免费观看在线视频 | 很黄的视频免费| av天堂在线播放| 免费不卡黄色视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 中文字幕色久视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 伦理电影免费视频| 99国产精品免费福利视频| 国产精品电影一区二区三区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲色图综合在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲情色 制服丝袜| 岛国视频午夜一区免费看| 午夜免费鲁丝| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美乱色亚洲激情| a级毛片在线看网站| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久欧美精品欧美久久欧美| 中出人妻视频一区二区| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 嫩草影院精品99| 无限看片的www在线观看| 满18在线观看网站| 水蜜桃什么品种好| 日韩高清综合在线| 国产高清视频在线播放一区| 女人精品久久久久毛片| 精品一品国产午夜福利视频| 黄片播放在线免费| 成人免费观看视频高清| 日日爽夜夜爽网站| 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美一级毛片孕妇| 婷婷六月久久综合丁香| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产精品九九99| 99国产精品99久久久久| 欧美激情高清一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产精品 国内视频| 亚洲欧美激情在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲男人的天堂狠狠| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 精品一区二区三区av网在线观看| 午夜福利免费观看在线| 男男h啪啪无遮挡| 欧美日韩乱码在线| 成年版毛片免费区| 欧美精品一区二区免费开放| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲精品一二三| 免费在线观看日本一区| 精品国产乱码久久久久久男人| 色老头精品视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 国产精品电影一区二区三区| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 美女大奶头视频| 免费不卡黄色视频| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 波多野结衣一区麻豆| 亚洲三区欧美一区| 免费看十八禁软件| 欧美国产精品va在线观看不卡| 精品久久久久久久毛片微露脸| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 久热这里只有精品99| 极品人妻少妇av视频| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 午夜影院日韩av| 午夜老司机福利片| 丝袜在线中文字幕| 又大又爽又粗| 精品福利观看| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 国产亚洲欧美在线一区二区| 一级毛片精品| 免费高清视频大片| 91老司机精品| 日韩欧美三级三区| 男女高潮啪啪啪动态图| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 三级毛片av免费| 午夜影院日韩av| 免费av中文字幕在线| 日本精品一区二区三区蜜桃| 黑人操中国人逼视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美成人午夜精品| 视频区图区小说| 国产真人三级小视频在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 久久人人97超碰香蕉20202| 婷婷丁香在线五月| 99热只有精品国产| 色综合婷婷激情| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 国产深夜福利视频在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 深夜精品福利| 中文字幕高清在线视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲人成伊人成综合网2020| 丁香欧美五月| 黑人欧美特级aaaaaa片| 99国产综合亚洲精品| 激情在线观看视频在线高清| 夜夜爽天天搞| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 水蜜桃什么品种好| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 无遮挡黄片免费观看| 国产人伦9x9x在线观看| 天天添夜夜摸| 欧美日韩精品网址| 午夜免费激情av| 大型黄色视频在线免费观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 在线天堂中文资源库| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 精品福利永久在线观看| 亚洲熟女毛片儿| 国产成人av教育| 美女午夜性视频免费| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 99精国产麻豆久久婷婷| 一二三四在线观看免费中文在| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 色在线成人网| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产av精品麻豆| 中文亚洲av片在线观看爽| 精品一区二区三区四区五区乱码| avwww免费| 国产1区2区3区精品| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 桃色一区二区三区在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 色播在线永久视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 这个男人来自地球电影免费观看| 乱人伦中国视频| 黑人猛操日本美女一级片| 欧美激情极品国产一区二区三区| 曰老女人黄片| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲片人在线观看| 在线国产一区二区在线| 亚洲一区二区三区欧美精品| 男人舔女人的私密视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产一区二区在线av高清观看| 手机成人av网站| 人人妻人人澡人人看| 久久亚洲精品不卡| 男男h啪啪无遮挡| 又大又爽又粗| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲情色 制服丝袜| 51午夜福利影视在线观看| 丝袜在线中文字幕| 91麻豆av在线| 久久久水蜜桃国产精品网| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 麻豆国产av国片精品| 一级a爱片免费观看的视频| xxxhd国产人妻xxx| 夜夜爽天天搞| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲精品国产一区二区精华液| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 一本大道久久a久久精品| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美在线黄色| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲五月天丁香| 久久久久亚洲av毛片大全| 黑人猛操日本美女一级片| av在线天堂中文字幕 | 久久香蕉国产精品| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 一级毛片高清免费大全| 俄罗斯特黄特色一大片| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产精品免费视频内射| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产深夜福利视频在线观看| 国产亚洲欧美98| 亚洲美女黄片视频| 成人国语在线视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| 在线av久久热| 一区福利在线观看| 校园春色视频在线观看| 另类亚洲欧美激情| 脱女人内裤的视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| a在线观看视频网站| 亚洲全国av大片| 欧美丝袜亚洲另类 | 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 成人黄色视频免费在线看| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美黑人欧美精品刺激| 一级毛片精品| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲专区国产一区二区| 欧美日韩一级在线毛片| 精品久久久久久,| 亚洲国产中文字幕在线视频| 99国产精品免费福利视频| 精品福利观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 |