• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    高強度聚焦超聲聯(lián)合全氟戊烷液滴在乳腺癌治療增效中的實驗研究

    2020-05-09 08:41:36余倩高乙惠許萍萍姚一靜王芮陳旖旎姜立新
    聲學技術(shù) 2020年2期
    關(guān)鍵詞:戊烷全氟液滴

    余倩,高乙惠,許萍萍,姚一靜,王芮,陳旖旎,姜立新

    高強度聚焦超聲聯(lián)合全氟戊烷液滴在乳腺癌治療增效中的實驗研究

    余倩,高乙惠,許萍萍,姚一靜,王芮,陳旖旎,姜立新

    (上海交通大學附屬第六人民醫(yī)院,上海 200030)

    探討高強度聚焦超聲(High-Intensity Focused Ultrasound, HIFU)聯(lián)合全氟戊烷液滴(Perfluoropentane droplets, PFP),對小鼠乳腺癌4T1細胞治療的增效作用。制備PFP,檢測其平均粒徑及形態(tài)結(jié)構(gòu)。試驗設(shè)立三組:HIFU假照組,單純HIFU治療組,HIFU聯(lián)合PFP治療組。流式細胞儀檢測HIFU分組治療乳腺癌細胞后細胞存活率及死亡率;體內(nèi)動物試驗分組處理后,二維超聲觀察HIFU輻照前后腫瘤回聲灰度變化情況,超聲造影劑灌注缺損面積占總面積百分比評價不同治療方式對裸鼠皮下移植瘤的消融能力。所制備的PFP平均粒徑為1.2 μm,形態(tài)呈規(guī)則球形。細胞試驗顯示,HIFU聯(lián)合PFP治療組乳腺癌細胞死亡率(23.50±1.34)%顯著高于單純HIFU治療組(14.34±0.55)%和HIFU假照組(11.76±0.62)%(<0.05);動物試驗顯示HIFU聯(lián)合PFP治療組腫瘤消融面積占總面積百分比(84.03±4.47)%顯著高于單純HIFU治療組(41.23±4.24)%(<0.05),HIFU假照組無明顯灌注缺損區(qū)域。HIFU聯(lián)合PFP可顯著增強對乳腺癌細胞及組織的消融能力。

    高強度聚焦超聲;乳腺腫瘤;全氟戊烷液滴;治療

    0 引言

    乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤,在中國城鄉(xiāng)女性常見癌癥中排第五位[1]。目前,乳腺癌的微創(chuàng)治療包括冷凍消融、射頻消融、激光消融、微波消融和高強度聚焦超聲(High-Intensity Focused Ultrasound, HIFU)消融[2-4]。

    全氟戊烷液滴(Perfluoropentane droplets, PFP)具有液氣相變的特性,其常溫下為液體狀態(tài),溫度升高或高強度超聲輻照能使其轉(zhuǎn)化為氣態(tài),該過程也被稱為聲致相變效應(Acoustic Droplet Vaporization, ADV)[5],HIFU作用下PFP可產(chǎn)生氣泡,聲波下氣泡的振蕩和破裂可增強HIFU治療空化效應,提高產(chǎn)熱能力,潛在地增強HIFU消融效率[6-7]。本試驗從細胞及動物兩個層面,探討HIFU聯(lián)合PFP在乳腺癌治療增效中的可行性及有效性。

    1 材料和方法

    1.1 儀器和試劑

    主要儀器:細胞培養(yǎng)箱(Hyclone, 美國),流式細胞分析儀(Beckman Coulter, 美國),小動物脈沖型聚焦超聲腫瘤治療儀(無錫海鷹電子醫(yī)療系統(tǒng)有限公司),超聲診斷儀(MyLabTM90, Esaote, 意大利)。

    主要試劑:RPMI-1640培養(yǎng)基(Gibco, 美國),胰蛋白酶(Gibco, 美國),PBS緩沖液(Gibco, 美國),胎牛血清(Ausbian, 澳大利亞),青霉素-鏈霉素雙抗(Hyclone, 美國),活細胞/死細胞雙染試劑盒(Calcein-AM/PI, 中國上海貝博公司),超聲造影劑(SonoVue, Milan, 意大利)。

    1.2 細胞株與細胞培養(yǎng)

    鼠源性乳腺癌4T1細胞株購于中國科學院上海典藏細胞庫,乳腺癌細胞為貼壁生長。使用RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)乳腺癌4T1細胞,培養(yǎng)基中含1%青霉素-鏈霉素雙抗溶液,9%胎牛血清,細胞放置于37°C飽和濕度及5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每2~3天傳代一次。當4T1細胞達到對數(shù)生長期時進行消化離心制備成單細胞懸液,進行細胞計數(shù),細胞實驗時使用六孔板培養(yǎng)細胞,每個孔中加入2 mL配置好的RPMI-1640培養(yǎng)基及1×105個乳腺癌4T1細胞。

    1.3 實驗方法

    1.3.1 乳腺癌皮下移植瘤模型構(gòu)建

    模型采用裸鼠(Balb/c nude mice)作為實驗動物(上海西普爾-必凱實驗動物有限公司,SCXK(滬)2013-0016),約6周齡,飼養(yǎng)于上海市第六人民醫(yī)院動物房無特定病原體(Specific Pathogen Free, SPF)級屏障設(shè)施中。鼠源性乳腺癌4T1細胞作為瘤源,將對數(shù)生長期的4T1細胞制成細胞懸液,1 mL PBS重懸后用細胞計數(shù)板進行細胞計數(shù),于裸鼠背部皮下注射約每200 μL 5×106~10×106個的細胞量。用手固定小鼠,75%乙醇棉球消毒小鼠背部皮膚,后將細胞懸液注射到小鼠右側(cè)背部皮下形成皮丘,緩慢退針,確保穿刺點無液體滲出。注射后每天持續(xù)觀測瘤鼠狀態(tài)及腫瘤生長情況,定期測量裸鼠腫瘤的最長徑(單位mm)、最寬徑(單位mm)。

    1.3.2 全氟戊烷液滴制作

    實驗所用的相變?nèi)焱橐旱?PFP)制備與文獻[8-9]所用方法相同。簡而言之,25%全氟戊烷(Strem Chemicals, 美國)和75%脂質(zhì)在聲振儀細胞破碎儀(450 Digital Sonifier, 美國)中處理30 s,設(shè)置功率為10 W。所得混合溶液于4°C儲存。實驗前采用庫爾特粒度儀(Beckman Coulter, 美國)對稀釋一萬倍后的液滴數(shù)目及直徑進行測量,所測液滴的平均粒徑為1.2 μm,其中99%的粒徑小于3 μm。在用于實驗之前,使用PBS將液滴密度稀釋至每mL 1.5×107個的細胞量。顯微鏡下全氟戊烷微滴照如圖1所示。

    圖1 顯微鏡下全氟戊烷微滴照(標尺20 μm)

    1.3.3 小動物HIFU腫瘤治療儀參數(shù)

    治療探頭工作頻率:4.00 MHz,焦距:11.5 mm,焦域橫向尺寸(-6 dB):0.78 mm× 0.57 mm,焦域縱向尺寸(-6 dB):9.2 mm,最大輸出功率:29.05 W,最大聲強:8.14×103W·cm-2。

    1.3.4 細胞試驗HIFU分組治療及流式細胞儀檢測

    按上述方法將4T1細胞置于六孔板內(nèi),分為HIFU假照組,單純HIFU治療組和HIFU聯(lián)合PFP治療組,每組各6孔。實驗方法:(1) HIFU假照組,HIFU假照;(2) 單純HIFU治療組,孔內(nèi)加入生理鹽水0.1 mL,輸入前述固定參數(shù)輻照30次;(3) HIFU聯(lián)合PFP治療組,孔內(nèi)加入0.1 mL稀釋后的PFP,輸入前述固定參數(shù)輻照30次。HIFU輻照實景圖如圖2所示,為了減少六孔板內(nèi)輻照能量的衰減,避免探頭直接接觸六孔板底部,探頭與孔板之間放置厚度為5 mm的導聲墊。

    HIFU輻照后將不同分組的細胞放置于37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后,對瓶內(nèi)細胞進行消化離心(轉(zhuǎn)速為1000 r·min-1,時長為5 min),并用PBS多次洗滌細胞后,按照活細胞/死細胞染色試劑盒操作說明,加入Calcein-AM染色液避光孵育15~30 min后再加入PI染色劑孵育1~5 min,用PBS多次洗滌細胞后重懸,使用流式細胞儀上機檢測。熒光特性如下,Calcein-AM: 激發(fā)波長E=490 nm, 發(fā)射波長E=515 nm; PI:E=535 nm,E=617 nm。

    圖2 HIFU 輻照乳腺癌細胞實景圖

    1.3.5 荷瘤鼠的HIFU分組治療及超聲評價

    荷瘤裸鼠(Balb/c)30只,雌性,約6周齡,腫瘤生長至28 d(最長徑約8~10 mm,開始治療),隨機分為HIFU假照組,單純HIFU治療組和HIFU聯(lián)合PFP治療組,每組各10只。實驗方法:碘伏常規(guī)消毒后,1%無巴比妥鈉10 μL·g-1腹腔注射麻醉,麻醉起效后進行分組治療:(1) HIFU假照組,腫塊表面涂以超聲耦合劑,HIFU假照;(2) 單純HIFU治療組,尾靜脈注射生理鹽水0.1 mL,30 min后腫塊表面涂以超聲耦合劑,輸入前述固定參數(shù)輻照30次;(3) HIFU聯(lián)合PFP治療組,尾靜脈注射稀釋后的PFP 0.1 mL,30 min后腫塊表面涂以超聲耦合劑,輸入前述固定參數(shù)輻照30次。

    治療前后分別使用二維超聲觀察腫塊大小形態(tài)及回聲灰度變化情況,HIFU治療結(jié)束后即刻進行超聲造影(MyLabTM90, Esaote, Italy, 12 MHz線陣探頭)。首先,在二維模式下確定腫瘤位置,并在瘤鼠尾靜脈插入一根靜脈輸液針。隨后,混勻超聲造影劑,將0.2 mL造影劑通過尾靜脈以團狀注射方式注入,以1 mL生理鹽水沖管。選取皮下瘤最大橫截面作為觀察平面,并在造影劑注射時啟動視頻錄制。造影結(jié)束后,選取最大橫截面用Image J軟件計算腫瘤充盈缺損區(qū)域面積。

    1.4 統(tǒng)計分析

    2 實驗結(jié)果

    2.1 細胞試驗結(jié)果

    流式檢測結(jié)果圖3所示,橫坐標為Calcein-AM染色結(jié)果,陽性代表活細胞;縱坐標為PI染色結(jié)果,陽性代表死細胞。圖4的結(jié)果表明,HIFU假照組細胞存活率最高(88.62±0.62)%,死亡率最低(11.76±0.62)%,其次為單純HIFU治療組,存活率為(85.66±0.55)%,死亡率為(14.34±0.55)%,HIFU聯(lián)合PFP治療組細胞存活率最低(75.94±1.34)%,死亡率最高為(23.50±1.34)%,進行兩兩比較,各組間的細胞存活和死亡率均具有統(tǒng)計學意義(<0.05)。

    圖3 流式細胞儀檢測圖

    圖4 不同組活細胞及死細胞百分比(%)

    2.2 動物試驗結(jié)果

    單純HIFU治療組和HIFU聯(lián)合PFP治療組腫瘤消融面積百分比如圖5所示,HIFU聯(lián)合PFP治療組腫瘤充灌注損面積占總面積百分比(84.03±4.47)%,顯著高于單純HIFU治療組(41.23±4.24)% (<0.05)。圖6顯示了HIFU治療前后腫瘤的二維超聲及超聲造影圖像。3組腫瘤區(qū)域HIFU治療前,二維超聲均表現(xiàn)為形態(tài)規(guī)則,邊界清晰的均勻低回聲區(qū)。HIFU假照組超聲造影表現(xiàn)為造影劑在腫塊內(nèi)快速而均勻地強化,無灌注缺損區(qū)(圖6中a1、a2、a3);單純HIFU治療組治療后二維超聲可見腫塊內(nèi)點狀、小片狀回聲增高區(qū),超聲造影顯示腫塊中心少量灌注缺損區(qū),周圍呈環(huán)形強化(圖6中b1、b2、b3);HIFU聯(lián)合PFP治療組,HIFU輻照后二維超聲觀察到腫塊回聲的顯著變化,呈均勻高回聲,超聲造影顯示腫塊大部分區(qū)域無造影劑灌注,周邊見少量環(huán)形強化(圖6中c1、c2、c3)。

    圖5 單純HIFU治療組和HIFU聯(lián)合PFP治療組腫瘤消融面積百分比

    圖6 荷瘤鼠HIFU治療前后二維超聲及超聲造影圖像(箭頭所示為HIFU輻照區(qū)域,標尺 5 mm)

    3 討論

    HIFU消融作為乳腺癌局部微創(chuàng)治療的手段[10],與射頻消融等相比具有非侵入性的特點,其消融腫瘤組織的機制主要為機械效應、空化效應及熱效應,并可以與放療及化療等結(jié)合使用以增強腫瘤治療效果[11-12]。

    在臨床工作中,由于組織聲衰減,使得治療較大的實體腫瘤時需要更高的聲能和更長的時間,為了提高HIFU在乳腺腫瘤中的臨床效用,需要增加HIFU消融效率以及縮短治療時間,減少患者痛苦和并發(fā)癥的發(fā)生率,HIFU增效劑的研究逐漸引起重視。相變型液態(tài)氟碳材料受到研究者的關(guān)注[13],該材料可在HIFU的高聲壓和產(chǎn)熱作用下,發(fā)生相變產(chǎn)生氣泡,作為外源性空化核,能降低空化閾值促進空化發(fā)生,氣泡的非線性振動有利于超聲產(chǎn)生熱量,可在超聲作用下爆破產(chǎn)生機械效應導致細胞損傷,引起腫瘤微血管的破裂提高HIFU療效,并且氣泡相互融合可阻塞微血管,造成腫瘤內(nèi)部缺氧的同時減少腫瘤細胞進入血液循環(huán)[14]。

    Zhang等[15]使用含白蛋白的凝膠模塊,通過對白蛋白變性情況的觀察來判斷HIFU聯(lián)合相變納米乳劑治療效果,研究發(fā)現(xiàn)納米乳劑產(chǎn)生的氣泡可顯著減少凝膠模塊中蛋白變性所需的時間及聲功率。王修杰等[16]使用不同強度的HIFU處理人乳腺癌細胞MCF-7,觀察到HIFU作用下細胞增殖減少,凋亡增加及熱休克蛋白的表達增加,表明HIFU具有明顯損傷癌細胞及抑制其生長的作用。本試驗使用同等強度的HIFU輻照小鼠乳腺癌4T1細胞,增加了HIFU聯(lián)合PFP治療,結(jié)果顯示聯(lián)合治療相較于單純HIFU治療可顯著提高乳腺癌細胞死亡率,試驗表明HIFU聯(lián)合PFP治療在細胞層面具有增效作用,為進一步進行體內(nèi)驗證打下基礎(chǔ)。

    Gao等[17]通過超聲造影評價臨界溫度聚焦超聲(sub-threshold focused ultrasound, FUS)消融裸鼠皮下瘤效果,與MRI相較,超聲造影具有實時動態(tài)顯像,簡便易操作及耗時短等優(yōu)點,并且造影劑無灌注區(qū)能很好地顯示腫瘤內(nèi)部壞死區(qū)域。陳莉等[18]使用超聲造影劑評價高強度聚焦超聲治療骨腫瘤的療效,治療區(qū)域顯示為造影劑灌注缺損區(qū),而未治療的腫瘤組織仍有超聲造影劑灌注,結(jié)果表明超聲造影成像能清楚地顯示腫瘤范圍及治療后灌注缺損區(qū)的大小。本研究利用二維超聲及超聲造影評價裸鼠皮下移植瘤HIFU治療效果,結(jié)果顯示相同HIFU治療參數(shù)下,HIFU聯(lián)合PFP治療后腫瘤內(nèi)部灌注缺損面積占總腫瘤面積百分比顯著高于單純HIFU治療,試驗表明HIFU聯(lián)合PFP治療在動物體內(nèi)具有增效可行性。

    綜上所述,本試驗通過細胞及動物兩個層面驗證了HIFU聯(lián)合PFP在乳腺癌治療增效中的可行性及有效性,為臨床實踐提供理論基礎(chǔ)。

    4 結(jié)語

    本研究針對相同HIFU輻照參數(shù)聯(lián)合相同濃度PFP對乳腺腫瘤消融的影響,未涉及HIFU強度變化及PFP濃度變化。在后續(xù)研究中,可設(shè)置不同HIFU輻照強度與不同PFP濃度的組合,進一步對HIFU聯(lián)合PFP消融乳腺癌細胞及組織的最佳協(xié)同劑量進行研究。

    [1] GUAN L M, XU G. Damage effect of high-intensity focused ultrasound on breast cancer tissues and their vascularities[J]. World J Surg Oncol, 2016, 14(1): 153-153.

    [2] OKITA K, NARUMI R, AZUMA T, et al. Effects of breast structure on high-intensity focused ultrasound focal error[J]. J Ther Ultrasound, 2018(6): 4-16.

    [3] 衛(wèi)剛. 高強度聚焦超聲治療乳腺癌的臨床研究[D]. 合肥: 安徽醫(yī)科大學, 2014.

    WEI Gang. Clinical research of high intensity focused ultrasound treatment of breast cancer[D]. Hefei: Anhui Medical University, 2014.

    [4] HAAR G T. HIFU Tissue ablation: concept and devices[J]. Adv Exp Med Biol, 2016, 880: 3-20.

    [5] LIN C Y, PITT W G. Acoustic droplet vaporization in biology and medicine[J]. Biomed Res Int, 2013: 404361.

    [6] 朱媚莉, 張愛麗, 向昱, 等. 全氟戊烷微滴乳劑增強HIFU療效的研究[J]. 中國醫(yī)療器械雜志, 2013, 37(3): 169-172.

    ZHU Meili, ZHANG Aili, XIANG Yi, et al. Perfluoropentane droplets enhanced HIFU therapeutic effect[J]. Chinese Journal of Medical Instrumentation, 2013, 37(3): 169-172.

    [7] ALIABOUZAR M, KUMAR K N, SARKAR K. Acoustic vaporization threshold of lipid-coated perfluoropentane droplets[J]. J. Acoust. Soc. Am., 2018, 143(4): 2001.

    [8] FABIILLI M L, HAWORTH K J, FAKHRI N H, et al. The role of inertial cavitation in acoustic droplet vaporization[J]. IEEE Trans Ultrason Ferroelectr Freq Control, 2009, 56(5): 1006-1017.

    [9] ZHU M L. JIANG M L, FABIILLI A, et al. Treatment of murine tumors using acoustic droplet vaporization-enhanced high intensity focused ultrasound[J]. Phys Med Biol, 2013, 58(17): 6179-6191.

    [10] MAURI G L, NICOSIA Z, XU S, et al. Focused ultrasound: tumour ablation and its potential to enhance immunological therapy to cancer[J]. Br J Radiol, 2018, 91(1083): 20170641.

    [11] MALONEY E, HWANG J H. Emerging HIFU applications in cancer therapy[J]. Int J Hyperthermia, 2015, 31(3): 302-309.

    [12] van den BIJGAART R J, D C EIKELENBOOM, HOOGENBOOM M. et al. Thermal and mechanical high-intensity focused ultrasound: perspectives on tumor ablation, immune effects and combination strategies[J]. Cancer Immunol Immunother, 2017, 66(2): 247-258.

    [13] SHPAK O, VERWEIJ M, VOS H J, et al. Acoustic droplet vaporization is initiated by superharmonic focusing[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2014, 111(5): 1697-1702.

    [14] XIN Y, ZHANG A, XU L X, et al. The effects on thermal lesion shape and size from bubble clouds produced by acoustic droplet vaporization[J]. Biomed Eng Online, 2018, 17(1): 163-163.

    [15] ZHANG P, KOPECHEK J A, PORTER T M. The impact of vaporized nanoemulsions on ultrasound-mediated ablation[J]. J Ther Ultrasound, 2013(1): 2-2.

    [16] 王修杰, 袁淑蘭, 張潔, 等. 高強度聚焦超聲對人乳腺癌細胞的生長抑制作用及機理研究[J]. 四川大學學報(醫(yī)學版), 2004, 01: 60-63.

    WANG Xiujie, YUAN Shulan, ZHANG Jie, et al. A study of the inhibition effect of HIFU and its mechanism of action on the proliferation of human breast cancer cells[J]. J Sichuan Univ (Med Sci Edi), 2004, 35(1): 60-63.

    [17] GAO Y H, WU L, WANG R, et al. Contrast-enhanced ultrasound evaluation of pancreatic cancer xenografts in nude mice after irradiation with sub-threshold focused ultrasound for tumor ablation[J]. Oncotarget, 2017, 8(23): 37584-37593.

    [18] 陳莉, 姜立新, 胡兵. 超聲造影早期評價HIFU治療兔移植性骨腫瘤的初步研究[J]. 聲學技術(shù), 2016, 35(5): 430-434.

    CHEN Li, JIANG Lixin, HU Bing. Preliminary research on evaluating efficacy of HIFU treatment for transplantable VX2 bone tumor with contrast-enhanced ultrasound[J]. Technical Acoustics, 2016, 35(5): 430-434.

    Treatment of breast cancer using perfluoropentane droplets enhanced high-intensity focused ultrasound: an experimental study

    YU Qian, GAO Yihui, XU Pingping, YAO Yijing, WANG Rui, CHEN Yini, JIANG Lixin

    (Shanghai Jiaotong University Affiliated Sixth People's Hospital, Shanghai 200030, China)

    To investigate the synergistic effect of high-intensity focused ultrasound (HIFU) combined with perfluoropentane droplets (PFP) on the treatment of mouse breast cancer 4T1 cells.PFP were prepared and their average particle size and morphology were examined. Three groups were set up in the experiment: blank control group, HIFU treatment group, HIFU combined with PFP treatment group, and the ability of HIFU combined with PFP for increasing the efficacy of 4T1 cells therapy in vitro was detected by flow cytometry; B-mode ultrasound was used to observe the gray changes before and after HIFU ablation and the percentage of perfusion defect in contrast-enhanced ultrasound to evaluate the synergistic ablation ability of HIFU combined with PFP for subcutaneously transplanted tumors in nude mice.The average particle size of the prepared PFP was 1.2 μm, and the shape was regular spherical. Cell tests showed that 4T1 cells mortality (23.50 ± 1.34)% in the HIFU combined with PFP treatment group was significantly higher than that in the HIFU-treated group alone (14.34 ± 0.55)% and that in the HIFU sham group (11.76 ± 0.62)%, (P <0.05). Animal experiments showed that the percentage of tumor necrotic area in the HIFU combined with PFP treatment group (84.03 ± 4.47)% was significantly higher than that in the HIFU treatment group alone (41.23 ± 4.24)%, (P <0.05), there was no obvious perfusion defect in the blank control group.HIFU combined with PFP can significantly enhance the ablation ability of breast cancer cells and tissues.

    high-intensity focused ultrasound; breast cancer; perfluoropentane droplets; treatment

    TB559

    A

    1000-3630(2020)-02-0195-05

    10.16300/j.cnki.1000-3630.2020.02.012

    2020-01-02;

    2020-02-15

    國家自然科學基金面上項目(81771850)、上海交通大學醫(yī)工交叉基金(YG2017MS19)資助項目。

    余倩(1993-), 女, 重慶人, 碩士研究生, 研究方向為腫瘤的超聲治療。

    姜立新, E-mail: jinger_28@sina.com

    猜你喜歡
    戊烷全氟液滴
    全氟烷基化合物暴露與成年人抑郁癥間的關(guān)系:基于NHANES 2005~2018
    環(huán)戊烷產(chǎn)品萃取精餾及提純工藝分析
    碳五烷烴裂解制低碳烯烴反應性能的分析
    化工學報(2021年10期)2021-10-31 23:36:50
    液滴間相互碰撞融合與破碎的實驗研究
    噴淋液滴在空氣環(huán)境下的運動特性
    LNG脫苯回收再利用異戊烷的應用探討
    輕烴分離裝置混合戊烷深加工探索
    1種制備全氟聚醚羧酸的方法
    1種制備全氟烯醚磺酰氟化合物的方法
    一種用于光降解全氟有機酸的摻雜二氧化鈦炭鐵復合材料的制備方法
    中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 欧美高清成人免费视频www| 自线自在国产av| 高清毛片免费看| 三上悠亚av全集在线观看 | 国产黄片美女视频| 久久久久国产网址| 国产午夜精品一二区理论片| 午夜免费男女啪啪视频观看| 久久久久久久久久成人| 久久久久国产网址| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲精品aⅴ在线观看| 中国三级夫妇交换| 在现免费观看毛片| 一级爰片在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产av国产精品国产| 妹子高潮喷水视频| 久久鲁丝午夜福利片| 国产黄频视频在线观看| 成人特级av手机在线观看| 五月天丁香电影| 成人美女网站在线观看视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲内射少妇av| 国产精品嫩草影院av在线观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲av二区三区四区| av福利片在线| 国产免费视频播放在线视频| 久久精品国产亚洲av天美| 黄色一级大片看看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲不卡免费看| 国产在线免费精品| 日韩中字成人| 在线观看免费高清a一片| 亚洲精品456在线播放app| 日韩成人伦理影院| 国产一区二区三区av在线| 在线观看国产h片| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产欧美日韩精品一区二区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 啦啦啦在线观看免费高清www| 亚洲综合精品二区| 中文在线观看免费www的网站| 成人亚洲精品一区在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国模一区二区三区四区视频| 麻豆乱淫一区二区| 免费看av在线观看网站| 亚洲精品国产av成人精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 日韩亚洲欧美综合| 在线免费观看不下载黄p国产| 亚洲精品456在线播放app| 中文在线观看免费www的网站| 国产乱人偷精品视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 欧美高清成人免费视频www| 久久久久久久亚洲中文字幕| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 免费av中文字幕在线| 五月玫瑰六月丁香| 两个人免费观看高清视频 | 国产亚洲最大av| √禁漫天堂资源中文www| 久久精品久久精品一区二区三区| 久久6这里有精品| 亚洲成人手机| 乱系列少妇在线播放| 妹子高潮喷水视频| 国产色爽女视频免费观看| 午夜免费观看性视频| 国产伦在线观看视频一区| 国产黄片美女视频| 这个男人来自地球电影免费观看 | 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 中国国产av一级| 啦啦啦啦在线视频资源| 日韩,欧美,国产一区二区三区| av福利片在线| 国产精品嫩草影院av在线观看| 成年女人在线观看亚洲视频| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产成人a∨麻豆精品| 国产乱来视频区| 久久亚洲国产成人精品v| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚州av有码| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲伊人久久精品综合| 国产美女午夜福利| 国产成人精品福利久久| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 秋霞在线观看毛片| 三级经典国产精品| 色哟哟·www| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 黄色一级大片看看| 久久久久久伊人网av| 99久久精品国产国产毛片| 久久狼人影院| 一区在线观看完整版| 久久韩国三级中文字幕| 精品久久久噜噜| 久久热精品热| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲图色成人| 欧美精品一区二区大全| 久久6这里有精品| 涩涩av久久男人的天堂| 国产成人精品无人区| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲精品第二区| 久久精品国产亚洲av涩爱| 视频区图区小说| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产淫语在线视频| 亚洲av中文av极速乱| 久久精品久久精品一区二区三区| 男人添女人高潮全过程视频| 欧美bdsm另类| 下体分泌物呈黄色| 黄色一级大片看看| 夫妻午夜视频| 久久精品国产亚洲av天美| 制服丝袜香蕉在线| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产91av在线免费观看| av网站免费在线观看视频| 我要看日韩黄色一级片| 极品少妇高潮喷水抽搐| 中文天堂在线官网| 国产av国产精品国产| 国产色爽女视频免费观看| 久久久亚洲精品成人影院| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久久久久久亚洲中文字幕| 街头女战士在线观看网站| 六月丁香七月| 少妇被粗大的猛进出69影院 | www.av在线官网国产| 一级毛片 在线播放| 人妻少妇偷人精品九色| www.av在线官网国产| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 女性被躁到高潮视频| 日韩成人伦理影院| av又黄又爽大尺度在线免费看| 一级黄片播放器| 亚洲欧美日韩东京热| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲欧美日韩东京热| 丰满人妻一区二区三区视频av| 免费黄色在线免费观看| 波野结衣二区三区在线| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲人成网站在线播| 高清黄色对白视频在线免费看 | 大陆偷拍与自拍| 男女边吃奶边做爰视频| 性色av一级| 亚洲性久久影院| 亚洲人成网站在线播| 六月丁香七月| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 99久久精品一区二区三区| 久久国产精品大桥未久av | 纯流量卡能插随身wifi吗| 午夜免费观看性视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲av成人精品一二三区| 国产综合精华液| 久久国内精品自在自线图片| 三上悠亚av全集在线观看 | 精品少妇久久久久久888优播| 少妇熟女欧美另类| 内射极品少妇av片p| 日本与韩国留学比较| 一级二级三级毛片免费看| 韩国高清视频一区二区三区| 欧美性感艳星| 黄色毛片三级朝国网站 | 国产成人freesex在线| 精品熟女少妇av免费看| 国产一区二区在线观看日韩| 99九九线精品视频在线观看视频| 人妻少妇偷人精品九色| 久久久a久久爽久久v久久| 大香蕉久久网| 国产极品天堂在线| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产精品久久久久久久久免| 国产在线视频一区二区| 少妇人妻一区二区三区视频| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产精品伦人一区二区| 国产免费福利视频在线观看| 国产免费视频播放在线视频| 国产在线男女| 最近最新中文字幕免费大全7| 在线观看www视频免费| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 视频区图区小说| 亚洲欧美一区二区三区国产| 插逼视频在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 午夜免费观看性视频| 精品国产一区二区久久| 美女视频免费永久观看网站| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久国产精品大桥未久av | 国产精品一区二区在线观看99| 97在线视频观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 亚洲国产精品一区二区三区在线| 午夜福利视频精品| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产精品国产三级国产专区5o| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 精品少妇内射三级| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 三上悠亚av全集在线观看 | 高清毛片免费看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 精品人妻熟女av久视频| 国产男女超爽视频在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 99国产精品免费福利视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国产 精品1| 久久久国产精品麻豆| 色哟哟·www| 精品人妻一区二区三区麻豆| 又大又黄又爽视频免费| 如何舔出高潮| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产精品熟女久久久久浪| 女性生殖器流出的白浆| av国产精品久久久久影院| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲怡红院男人天堂| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久人妻熟女aⅴ| 91久久精品国产一区二区成人| 日韩成人伦理影院| 国产亚洲最大av| 精品久久久噜噜| 一区二区av电影网| 亚洲人成网站在线播| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲电影在线观看av| 久久 成人 亚洲| 国产精品人妻久久久久久| 亚州av有码| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 中文欧美无线码| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产av码专区亚洲av| 91久久精品国产一区二区三区| 成人二区视频| .国产精品久久| 久久亚洲国产成人精品v| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲内射少妇av| 香蕉精品网在线| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产精品女同一区二区软件| av在线app专区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 日韩成人av中文字幕在线观看| 老熟女久久久| 美女大奶头黄色视频| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产在线一区二区三区精| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 一级二级三级毛片免费看| 亚洲av在线观看美女高潮| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久久综合国产亚洲精品| 又爽又黄a免费视频| 22中文网久久字幕| 久久精品久久精品一区二区三区| 一个人免费看片子| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 精品少妇久久久久久888优播| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久6这里有精品| 欧美一级a爱片免费观看看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 午夜老司机福利剧场| a级一级毛片免费在线观看| 视频区图区小说| 黄色视频在线播放观看不卡| 高清视频免费观看一区二区| 久久久久久伊人网av| 午夜激情福利司机影院| 黄色日韩在线| 综合色丁香网| av黄色大香蕉| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产成人免费无遮挡视频| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲美女黄色视频免费看| 一级二级三级毛片免费看| 乱人伦中国视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 人人澡人人妻人| 亚洲人成网站在线播| 99视频精品全部免费 在线| 国产男女内射视频| 丝袜在线中文字幕| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 国国产精品蜜臀av免费| 自线自在国产av| 亚洲精品自拍成人| 精品国产国语对白av| 亚洲精品视频女| 久久99热这里只频精品6学生| 免费少妇av软件| 欧美日韩在线观看h| 免费观看的影片在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 99久久中文字幕三级久久日本| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产av码专区亚洲av| 日韩成人av中文字幕在线观看| videos熟女内射| 久久99精品国语久久久| 最后的刺客免费高清国语| 岛国毛片在线播放| 91精品伊人久久大香线蕉| 看免费成人av毛片| 六月丁香七月| 国产精品久久久久久久电影| 日本欧美国产在线视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 人妻少妇偷人精品九色| 最新的欧美精品一区二区| 狂野欧美激情性bbbbbb| 2022亚洲国产成人精品| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产亚洲5aaaaa淫片| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 男女边摸边吃奶| 一级黄片播放器| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 妹子高潮喷水视频| av福利片在线| 十八禁高潮呻吟视频 | 少妇被粗大的猛进出69影院 | 黄片无遮挡物在线观看| 久热久热在线精品观看| 亚洲av成人精品一二三区| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲av成人精品一二三区| 乱人伦中国视频| 亚洲伊人久久精品综合| 一个人免费看片子| 国产精品免费大片| kizo精华| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲久久久国产精品| 嫩草影院新地址| 黄色一级大片看看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 最近中文字幕2019免费版| 丰满少妇做爰视频| 成人毛片60女人毛片免费| 熟女人妻精品中文字幕| 这个男人来自地球电影免费观看 | 日韩,欧美,国产一区二区三区| 久久6这里有精品| 色94色欧美一区二区| 美女内射精品一级片tv| 永久网站在线| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 日本色播在线视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲国产精品专区欧美| 国产成人精品一,二区| 少妇的逼好多水| 久久毛片免费看一区二区三区| 久久午夜综合久久蜜桃| 欧美日本中文国产一区发布| 久久午夜福利片| 最近中文字幕2019免费版| av不卡在线播放| 亚洲av欧美aⅴ国产| 少妇熟女欧美另类| av福利片在线| 国产色爽女视频免费观看| 高清av免费在线| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久青草综合色| av有码第一页| 美女cb高潮喷水在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲天堂av无毛| 成年av动漫网址| 十分钟在线观看高清视频www | www.色视频.com| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲精品国产色婷婷电影| 中文资源天堂在线| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产av码专区亚洲av| 久久久久精品性色| 一区二区三区精品91| 极品教师在线视频| 久久久久久久久大av| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 欧美国产精品一级二级三级 | 春色校园在线视频观看| 国产精品久久久久久久电影| 好男人视频免费观看在线| 国产成人freesex在线| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产高清三级在线| 精品久久久久久电影网| 中国美白少妇内射xxxbb| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 水蜜桃什么品种好| 国产有黄有色有爽视频| 久久久久久久精品精品| 国产在线男女| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 欧美三级亚洲精品| 国产黄片视频在线免费观看| 蜜桃在线观看..| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 精品久久久久久久久亚洲| 少妇熟女欧美另类| 亚洲精品自拍成人| 嘟嘟电影网在线观看| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产成人精品一,二区| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲欧美日韩东京热| 一区二区三区乱码不卡18| 人妻夜夜爽99麻豆av| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 这个男人来自地球电影免费观看 | 不卡视频在线观看欧美| 一级毛片我不卡| 22中文网久久字幕| 国产精品久久久久久久久免| 色吧在线观看| 国产精品国产av在线观看| 国精品久久久久久国模美| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲真实伦在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 777米奇影视久久| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产成人免费无遮挡视频| 欧美xxⅹ黑人| 丰满饥渴人妻一区二区三| 草草在线视频免费看| 男女无遮挡免费网站观看| 久久影院123| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲四区av| 在线观看免费日韩欧美大片 | 女人久久www免费人成看片| 国产精品熟女久久久久浪| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 人妻系列 视频| 一区二区三区精品91| 天堂俺去俺来也www色官网| 久久人妻熟女aⅴ| 一本大道久久a久久精品| 九九在线视频观看精品| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲国产日韩一区二区| av国产精品久久久久影院| 黄色配什么色好看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产精品99久久久久久久久| 99九九线精品视频在线观看视频| 欧美高清成人免费视频www| 搡老乐熟女国产| 国产精品人妻久久久久久| 成人影院久久| 国产精品不卡视频一区二区| 18禁在线播放成人免费| 亚洲性久久影院| 色视频在线一区二区三区| 一区二区三区精品91| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲欧美精品专区久久| 91精品国产九色| 99热国产这里只有精品6| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 99久久精品热视频| 在线观看人妻少妇| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | av国产精品久久久久影院| 国产av精品麻豆| 乱系列少妇在线播放| 精品国产乱码久久久久久小说| 男人添女人高潮全过程视频| 久久97久久精品| 交换朋友夫妻互换小说| 国产91av在线免费观看| √禁漫天堂资源中文www| 岛国毛片在线播放| a 毛片基地| 成人黄色视频免费在线看| 午夜影院在线不卡| 国产黄片视频在线免费观看| 国产成人精品无人区| 特大巨黑吊av在线直播| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 看免费成人av毛片| 曰老女人黄片| 精品久久久久久久久亚洲| 国产免费又黄又爽又色| 91在线精品国自产拍蜜月| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲国产精品专区欧美| 午夜福利,免费看| 亚洲四区av| 日韩中字成人| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产爽快片一区二区三区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 亚洲经典国产精华液单| 久久久久国产精品人妻一区二区| 精品一区二区免费观看| 亚洲国产精品999| 日韩免费高清中文字幕av| 国产一区二区三区av在线| 中文字幕久久专区| 91精品伊人久久大香线蕉| 这个男人来自地球电影免费观看 | 高清黄色对白视频在线免费看 | 日韩av免费高清视频| 三级经典国产精品| 国产乱来视频区| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 亚洲国产日韩一区二区| 狂野欧美激情性bbbbbb| 我的女老师完整版在线观看| 十八禁网站网址无遮挡 | 婷婷色综合大香蕉| 久久久精品免费免费高清| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久99蜜桃精品久久| 成人美女网站在线观看视频| 国产成人免费无遮挡视频| freevideosex欧美| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 丝袜喷水一区| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 欧美激情极品国产一区二区三区 | 大香蕉97超碰在线| 国产一区二区在线观看日韩| 人人妻人人看人人澡| 免费观看的影片在线观看| 少妇丰满av| 国产精品不卡视频一区二区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 日韩成人伦理影院| 精品一区二区三区视频在线| 精品久久久久久电影网| 99国产精品免费福利视频| 国产成人aa在线观看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 下体分泌物呈黄色| 美女国产视频在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| av有码第一页|