兒童呼吸道感染流感嗜血桿菌的檢驗(yàn)及耐藥性分析

李曉紅

（太倉市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 太倉 215400）

流感嗜血桿菌屬于機(jī)會(huì)性致病菌，在人類上呼吸道中定植，其感染易發(fā)生于免疫力相對低下的人群，如嬰幼兒、老年人，主要引發(fā)呼吸道感染、支氣管肺部感染，感染后如未能及時(shí)治療，可繼發(fā)腦膜炎等全身感染，增加死亡風(fēng)險(xiǎn)，是致5歲以下兒童死亡的一個(gè)主要原因[1]。近年來，不斷提升流感嗜血桿菌的檢出率，加之廣泛的應(yīng)用抗菌藥物，也隨之逐年升高該菌株的耐藥率，一定的影響了其臨床治療效果[2]。本研究即以本院接受的呼吸道感染患兒為研究對象，觀察流感嗜血桿菌的檢出情況，并分析分離出的菌株的耐藥性，為臨床合理選擇抗菌藥物提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象選取本院收治的561例呼吸道感染患兒，收治時(shí)間2019年1月～2019年12月，男341例，女220例；年齡32 d～13歲，平均（5.2±2.8）歲；發(fā)病季節(jié)：春季145例，夏季93例，秋季168例，冬季155例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）與呼吸道感染診斷標(biāo)準(zhǔn)相符；（2）以咳嗽、發(fā)熱、咳痰等為主要癥狀表現(xiàn)；（3）年齡14歲以下；（4）病程3～14 d；（5）知情同意，自愿參與；（6）剔除重復(fù)菌株。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）抗生素治療在標(biāo)本采集前已經(jīng)開展；（2）細(xì)菌、病毒感染已經(jīng)明確存在；（3）合并血液系統(tǒng)疾病、免疫缺陷疾病。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集：按照規(guī)定的操作規(guī)程采集呼吸道分泌物標(biāo)本，采集前2h，指導(dǎo)患兒用生理鹽水漱口，如患兒無法自主漱口，指導(dǎo)患兒家長正確的利用生理鹽水清潔口腔，2h后利用無菌棉簽在患兒口腔內(nèi)取呼吸道分泌物，取出后在無菌器皿內(nèi)放置棉簽，或者呼吸道痰液標(biāo)本利用低壓吸引器負(fù)壓吸取，取出后在無菌試管內(nèi)放置，及時(shí)的向?qū)嶒?yàn)室運(yùn)送標(biāo)本，開展細(xì)菌檢驗(yàn)。

1.2.2 細(xì)菌檢驗(yàn)與鑒定[3]：（1）巧克力培養(yǎng)基：由鄭州安圖生物工程股份有限公司提供的流感嗜血桿菌培養(yǎng)基瓊脂。（2）流感嗜血桿菌的培養(yǎng)和鑒定：先開展涂片鏡檢，顯微鏡利用低倍鏡檢查時(shí)，每個(gè)視野內(nèi)鱗狀上皮細(xì)胞不超過10個(gè)、白細(xì)胞超過25個(gè)則可判定為樣本合格；在巧克力平板、血平板內(nèi)分別接種，完成后放入培養(yǎng)箱中，使用的培養(yǎng)箱要含5%CO2，溫度35℃，給予24 h的孵育。血平板不生長，巧克力平板上的可疑菌落（無色、透明、具有光滑的表面和整齊的邊緣、濕潤）進(jìn)行涂片，給予革蘭染色后，陰性短小桿菌可見。在普通瓊脂平板上接種可以菌種（0.5麥?zhǔn)蠞岫龋L因子貼三種，分別是V、X、X+V，35℃環(huán)境下進(jìn)行24h孵育，細(xì)菌僅在X+V周圍生長，而X、V周圍不成長的然后采取由法國Bio-Merieux公司提供的VITEK-2 Compact全自動(dòng)微生物鑒定儀。

1.2.3 藥敏試驗(yàn)[4]：采取由法國Bio-Merieux公司提供的VITEK-2 Compact全自動(dòng)微藥敏系統(tǒng)，由英國Oxoid公司提供的抗菌藥物藥敏紙片。β-內(nèi)酰胺酶采用頭孢硝噻吩紙片。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)（n）和率（%）表示計(jì)數(shù)資料，利用x2檢驗(yàn)；利用WGONET5.6軟件開展耐藥性分析，P＜0.05表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 流感嗜血桿菌檢出情況

561例呼吸道分泌物標(biāo)本中，共分離出67株流感嗜血桿菌，檢出率11.9%。流感嗜血桿菌在不同性別中的檢出率基本相同（P＞0.05）；但在不同年齡段、不同季節(jié)中的檢出率存在明顯差異（P＜0.05）。見表1。

表1 流感嗜血桿菌檢出情況n（%）

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析

藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，耐藥率占據(jù)前三位的抗菌藥物分別為復(fù)方新諾明、氨芐西林、頭孢克洛，耐藥率分別為74.6%、73.1%、55.2%，具體見表2（剔除重復(fù)菌株）。

3 討 論

1982年時(shí)，流感嗜血桿菌首次被發(fā)現(xiàn)，這之后世界范圍內(nèi)不斷的檢出該病菌[5]。流感嗜血桿菌屬于革蘭陰性短小桿菌，呈多形性，可在人與人之間傳播，傳播途徑為密切接觸和空氣飛沫，感染后可引起多種原發(fā)性和繼發(fā)性的疾病，如腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、中耳炎、敗血癥，在我國該致病菌感染則多見于肺炎中[6]。在應(yīng)用流感嗜血桿菌疫苗之前，流感嗜血桿菌可引起嚴(yán)重感染，且有著較高的病死率，據(jù)報(bào)道，流感嗜血桿菌感染死亡病例中，絕大多數(shù)為5歲以下兒童，因而該致病菌感染對少年兒童的健康有著嚴(yán)重威脅。分析原因，5歲以下兒童尚不具備健全的免疫系統(tǒng)，體內(nèi)特異性抗體水平也不高，一旦患有呼吸道感染，該病菌在呼吸道中的定植風(fēng)險(xiǎn)提高，容易誘發(fā)感染。

表2 2019年度耐藥情況分析

近年來，隨著細(xì)菌培養(yǎng)與鑒定技術(shù)的提高，不斷提升流感嗜血桿菌的檢出率，本研究561例樣本中，檢出67株流感嗜血桿菌，檢出率可達(dá)到11.9%。本研究進(jìn)一步分析了該病菌在不同性別、年齡、季節(jié)中的檢出情況，結(jié)果顯示，在不同性別中的檢出率基本相同，不過，由于本研究樣本量較少，流感嗜血桿菌檢出率在不同性別患兒中是否存在區(qū)別還需要開展進(jìn)一步的研究；在不同年齡段中，3歲以上小兒的檢出率明顯低于3歲以小兒，這是因?yàn)樾耗挲g不足3歲時(shí)，鼻毛清除細(xì)菌的能力較差，自身免疫功能也不強(qiáng)，再加上基本不進(jìn)行大范圍的活性，增加了該病菌的感染風(fēng)險(xiǎn)；在不同季節(jié)中，冬季和春季的檢出率明顯更高，原因是這兩個(gè)季節(jié)氣候干燥、氣溫低，導(dǎo)致降低氣道黏膜局部的免疫功能，弱化清除細(xì)菌能力，再加上小兒多數(shù)時(shí)間處于通風(fēng)不良的室內(nèi)，容易傳播、擴(kuò)散此病菌。

目前，臨床治療呼吸道感染患兒時(shí)，主要采用抗菌藥物治療，但抗菌藥物種類眾多，并不是所有藥物都能獲得理想的治療效果，還需選擇敏感抗生素，促進(jìn)患兒盡早康復(fù)。本研究藥敏分析結(jié)果顯示，在選擇的11種抗生素中，耐藥率占據(jù)前三位的抗菌藥物分別為復(fù)方新諾明、氨芐西林、頭孢克洛，這可能與臨床中較為廣泛的使用這三種抗菌藥物密切相關(guān)。本研究中的β-內(nèi)酰胺酶耐藥率較高達(dá)62.7%，表示需要重視流感嗜血桿菌耐藥性。本研究藥敏分析結(jié)果說明，并不適合采用氨芐西林和復(fù)方新諾明治療呼吸道感染患兒，可選擇頭孢噻肟、氧氟沙星等具有較低耐藥性的抗菌藥物，實(shí)際選用中，還要根據(jù)患兒特點(diǎn)來選擇，避免具有較大副作用的藥物，如氯霉素，以保證患兒用藥安全。

綜上，呼吸道感染患兒中較為常見流感嗜血桿菌感染，臨床治療此疾病患兒時(shí)，應(yīng)積極的開展流感嗜血桿菌檢驗(yàn)工作，明確是否存在流感嗜血桿菌感染，如存在則開展進(jìn)一步的藥敏試驗(yàn)，據(jù)此選擇敏感的、安全性高的抗菌藥物，增強(qiáng)臨床用藥的合理性，促進(jìn)患兒疾病盡早康復(fù)。