越南廣平和順化兩省豬場(chǎng)分離副豬嗜血桿菌的抗生素耐藥表型和耐藥基因之間的相關(guān)性研究

Cho Nguyen Vn, 張麗君 , Tm Vu Thi Thnh, Hung Phm Hong Son, Tun Trn Ngo,黃琦,e,f,*, 周銳,e,f,*

a State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China

b Faculty of Animal Science and Veterinary Medicine, University of Agricultural and Forestry, Hue University, Hue 53000, Viet Nam

c Mientrung Institute for Scientific Research, Vietnam Academy of Science and Technology, Hue 53000, Viet Nam

d Guangdong Provincial Key Laboratory of Marine Biology, Shantou University, Shantou 515063, China

e Cooperative Innovation Center of Sustainable Pig Production, Wuhan 430070, China

f International Research Center for Animal Diseases, The Ministry of Science and Technology, Wuhan 430070, China

1. 引言

副豬嗜血桿菌（H. parasuis）是一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）依賴性革蘭氏陰性細(xì)菌，可引起豬的格拉瑟氏?。℅l?sser's disease），表現(xiàn)為肺炎、關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性漿膜炎和腦膜炎等癥狀，給全世界的養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[1-3]。據(jù)報(bào)道，近幾年由該病原菌引起的疫情在歐洲、亞洲和北美洲急劇增加[4-8]。副豬嗜血桿菌存在大量不可分型菌株和血清型多樣性，導(dǎo)致疫苗的交叉免疫保護(hù)較差[2]。

在目前，抗生素治療仍然是控制豬格拉瑟氏病的有效治療方法之一。大量的抗菌藥物，包括β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素類、四環(huán)素類、喹諾酮類和磺胺類藥通過加入到飼料、飲水或注射的方式被用于豬格拉瑟氏病的防控。低劑量的抗菌藥物也被廣泛用于促生長(zhǎng)和疾病防控[9]。但是，這些大量的抗菌藥物的使用被認(rèn)為是抗生素耐藥性積累的主要原因[10-12]。目前已經(jīng)有了一些關(guān)于不同區(qū)域的副豬嗜血桿菌的耐藥性和相關(guān)耐藥基因的報(bào)道[13-17]。這些研究結(jié)果表明，副豬嗜血桿菌擁有β-內(nèi)酰胺類藥物抗性（耐藥基因包括blaROB-1、blaTEM-1等）[18]、四環(huán)素類藥物抗性（耐藥基因包括tetB、tetC、tetH等）[17]、磺酰胺類藥物抗性（耐藥基因包括sulI、sulII等）[19]以及氟喹諾酮類藥物抗性[耐藥基因包括qnrA1、qnrB6、aac(6′)-Ib-cr、gyrA、gyrB等] [20]。

越南是全球第五大生豬生產(chǎn)國(guó)。目前尚沒有關(guān)于越南副豬副嗜血桿菌分離株的耐藥性表型與耐藥性基因之間相關(guān)性的報(bào)道。在本研究中，我們檢測(cè)了從越南廣平省和順化省豬中分離的56株副豬嗜血桿菌對(duì)25種抗菌藥物的敏感性以及相關(guān)的耐藥性基因的存在情況，并分析了耐藥表型與耐藥基因之間的相關(guān)性。這些結(jié)果首次揭示了越南中部地區(qū)副豬嗜血桿菌耐藥性流行情況，對(duì)越南格拉瑟氏病的臨床防控，以及對(duì)制定相關(guān)政策和提供臨床用藥指導(dǎo)以減少越南養(yǎng)豬業(yè)中抗生素耐藥性具有重要意義。

2. 材料與方法

2.1. 細(xì)菌分離株

本研究共使用了56株副豬嗜血桿菌。這些菌株于2017年6～9月從越南中部（順化省和廣平?。┑酿B(yǎng)豬場(chǎng)和屠宰場(chǎng)的豬中分離得到，菌株的信息已經(jīng)在我們之前的研究中進(jìn)行了詳細(xì)描述[21]。副豬嗜血桿菌使用含有10 μg·mL-1NAD和5%牛血清的胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA, BD DifcoTM, BD Biosciences, USA）進(jìn)行培養(yǎng)。

2.2. 抗菌藥物敏感性測(cè)定

本研究使用美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）推薦的肉湯微量稀釋方法測(cè)定副豬嗜血桿菌分離株的最低抑菌濃度（MIC）[22]?？偣彩褂昧?5種抗菌藥物，分別是慶大霉素（GEN）、卡那霉素（KAN）、鏈霉素（STR）、妥布霉素（TOB）、壯觀霉素（SPE）、阿莫西林（AMX）、頭孢氨芐（CFL）、頭孢呋辛（CFX）、青霉素（PEN）、恩諾沙星（ERF）、諾氟沙星（NOR）、環(huán)丙沙星（CIP）、泰妙菌素（TIA）、泰樂菌素（TYL）、紅霉素（ERY）、林可霉素（LIN）、氯霉素（CHL）、氟苯尼考（FFC）、磺胺甲嘧啶（SDM）、磺胺甲惡唑/甲氧芐氨嘧啶（TXT）、強(qiáng)力霉素（DOX）、四環(huán)素（TET）、金霉素（CTET）、黏菌素（CL）。抗菌藥物的折點(diǎn)是根據(jù)CLSI指南設(shè)置[22]。實(shí)驗(yàn)記錄了菌株的耐藥性范圍以及MIC50和MIC90值。使用流感嗜血桿菌ATCC 49247作為質(zhì)控菌株。將對(duì)兩種及兩種以上不同類型的抗菌素耐藥的菌株定義為多重耐藥（MDR）菌株。

2.3. 耐藥基因擴(kuò)增

利用常規(guī)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)了32個(gè)耐藥基因的存在情況，包括8個(gè)氨基糖苷類耐藥基因、2 個(gè)β-內(nèi)酰胺類耐藥基因、7個(gè)氟喹諾酮類耐藥基因、4個(gè)大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因、5個(gè)氯霉素類耐藥基因、2個(gè)磺胺類耐藥基因和4個(gè)四環(huán)素類耐藥基因。耐藥基因、引物序列以及擴(kuò)增片段大小見表1 [17,19,23-29]。PCR體系總體積為25 μL，包括12.5 μL 2×Taq PCR預(yù)混液（CW Biotech, China）、上下游引物各1 μL（25 μmol·L-1）、超純水8.5 μL以及2 μL gDNA（＞ 10 ng·μL-1）。使用Eppendorf熱循環(huán)儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增條件針對(duì)每個(gè)目標(biāo)基因進(jìn)行優(yōu)化（表 1）。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后，在紫外成像系統(tǒng)中觀察電泳條帶。

2.4. 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS軟件（IBM SPSS Statistics version 18.0,IBM, USA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并記錄必要的變量以進(jìn)行統(tǒng)計(jì)建模。主要結(jié)果和反應(yīng)變量包括檢測(cè)率超過2%的單個(gè)抗性基因。將對(duì)兩種或兩種以上抗菌藥物耐藥的菌株定義為多重耐藥菌株，將單一菌株中具有兩種或兩種以上耐藥基因的菌株定義為多重耐藥基因菌株。特異性耐藥基因與耐藥性表型之間的相關(guān)性采用卡方檢驗(yàn)和費(fèi)歇爾精確檢驗(yàn)進(jìn)行分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)差異使用95%置信區(qū)間（CI）和優(yōu)勢(shì)比（OR）展示。OR ＞ 1，即正相關(guān)，表示某一基因型（或表型）與測(cè)得的表型（或基因型）同時(shí)出現(xiàn)的可能性高；而OR ＜ 1，即負(fù)相關(guān)，則表示某一基因型（或表型）與測(cè)得的表型（或基因型）同時(shí)出現(xiàn)的可能性低。如果p值低于0.05，則相關(guān)性顯著。

3. 結(jié)果

3.1. 副豬嗜血桿菌的耐藥性表型

56株副豬嗜血桿菌對(duì)25種抗菌藥物的敏感性檢測(cè)結(jié)果見表2。根據(jù)各抗菌藥物的MIC折點(diǎn)，菌株對(duì)除氟喹諾酮類、泰妙菌素（TIA）、強(qiáng)力霉素（DOX）、氟苯尼考（FFC）以外的所有抗菌藥物均表現(xiàn)出高度耐藥。其中，對(duì)甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲惡唑（TXT）的耐藥率最高（94.6%），其次是黏菌素（CL）（91.1%）、氯霉素（CHL）（91.1%）、青霉素（85.7%）、慶大霉素（GEN）（83.9%）、林可霉素（LIN）（82.1%）、阿莫西林（AMX）（78.6%）、頭孢氨芐（CFL）（71.4%）、紅霉素（ERY）（69.6%）、金霉素（CTET）（67.9%）和泰樂菌素（TYL）（66.1%）。所有副豬嗜血桿菌分離株均對(duì)強(qiáng)力霉素（DOX）敏感。另外，所有菌株均為多重耐藥菌株。其中一株分離自屠宰場(chǎng)豬鼻腔拭子的副豬嗜血桿菌菌株，對(duì)18種抗菌素均具有耐藥性（表3）。

表1 耐藥基因擴(kuò)增引物

（續(xù)表）

表2 25種抗菌藥物對(duì)副豬嗜血桿菌（H. parasuis）菌株的最低抑菌濃度（MIC, μg·mL-1）

（續(xù)表）

表3 副豬嗜血桿菌耐藥表型和耐藥基因的數(shù)量統(tǒng)計(jì)

3.2. 耐藥表型之間的相關(guān)性

接下來我們分析了16種耐藥表型之間的相關(guān)性。如表4所示，幾乎每一種耐藥性表型與至少另一種耐藥表型顯著相關(guān)（p＜ 0.05）。相關(guān)性最強(qiáng)的是在泰樂菌素（TYL）和金霉素（CTET）抗性之間（OR = 93.3,p＜ 0.0001），其次是泰樂菌素（TYL）與紅霉素（ERY）抗性之間（OR =65.6,p＜ 0.0001），以及阿莫西林（AMX）與青霉素（PEN）抗性之間（OR= 60.2,p＜ 0.0001）。另外，林可霉素（LIN）與金霉素（CTET）抗性以及頭孢氨芐（CFL）與青霉素（PEN）的抗性之間有較強(qiáng)的相關(guān)性。

3.3. 副豬嗜血桿菌分離株的耐藥基因

表5列出了56株副豬嗜血桿菌菌株中各耐藥基因的存在情況。blaTEM-1基因檢出率最高（94.6%），其次是int（76.8%）、gyrA（58.9%）和rmtD（50.0%）。parE和flor基因的檢出率最低（均為3.6%）。然而，這些菌株中均未檢測(cè)到gyrB、cfr或tetC基因。大多數(shù)菌株（98.2%）攜帶至少一種耐藥基因（表3）。

3.4. 耐藥基因之間的相關(guān)性

我們?cè)谝韵禄驅(qū)χg發(fā)現(xiàn)了顯著的正相關(guān)性（按OR排序）：tetB/tetH(OR = 153,p= 0.001)、tetA/tetB(OR =75, p = 0.001)、tetH /aac(6′)-Ib (OR = 49, p = 0.001)、sulII/aac(6′)-Ib(OR = 23,p= 0.003)和tetB/aadA1(OR =23,p=0.01)（表6）。然而，amtA、blaTEM-1、parE和flor與其他任何基因都無相關(guān)性。耐藥基因之間的關(guān)聯(lián)大部分為正相關(guān)（OR ＞ 1），但4對(duì)耐藥基因[qnrA1/gyrA, qnrB1/int, parC/int,lnu(C)/int]之間為負(fù)相關(guān)（OR ＜ 1）（表6）。

3.5. 耐藥表型與基因型之間的相關(guān)性

耐藥基因可能與遺傳因素有關(guān)，使用一種特定抗菌素不僅可以使細(xì)菌產(chǎn)生對(duì)該藥物的耐藥性，還可能使細(xì)菌產(chǎn)生對(duì)其他抗菌素的耐藥性[30]。細(xì)菌耐藥表型與基因型之間的強(qiáng)相關(guān)性表明抗菌藥物的使用選擇了具有新型耐藥性決定因子的細(xì)菌[31]。我們?cè)谶@些副豬嗜血桿菌中發(fā)現(xiàn)耐藥表型與基因型之間存在顯著的相關(guān)性（表 7）。在47 株對(duì)慶大霉素（GEN）耐藥的菌株中，70.2%的菌株攜帶1～7個(gè)相應(yīng)的耐藥基因，這一表型與rmtD的存在呈顯著正相關(guān)（OR = 10.8, p = 0.02）。在27株卡那霉素（KAN）耐藥菌株中，6株（22.2%）菌中檢出strA，7株（25.9%）菌中檢出strB，16株（59.3%）菌中檢出aadA，1株（3.7%）菌中檢出amtA，10株（37.0%）菌中檢出rmtB，22株（81.5%）菌中檢出rmtD，7株（25.9%）菌中檢出aac-C2[aac(3)-lic]，8株（29.6%）菌中檢出aadA1。然而，值得注意的是，有一株耐藥菌株不攜帶任何耐藥基因（3.7%），但具有卡那霉素抗性?？敲顾兀↘AN）耐藥性與aadA(OR= 19.6,p＜ 0.0001)、rmtD(OR = 16.9,p＜ 0.0001)、aadA1(OR = 11.8, p = 0.01)、strB和aacC2[aac(3)-lic] (OR = 9.8,p= 0.02）、strA(OR = 8.0,p= 0.048)以及rmtB(OR = 7.9,p= 0.01)基因的存在呈顯著正相關(guān)。對(duì)托布拉霉素（TOB）耐藥的菌株中，大部分（17/18, 94.4%）含有相應(yīng)的耐藥基因，包括strB、aadA、rmtB、rmtD和aadA1，其中該耐藥表型與strB (OR = 23.5, p = 0.001)和rmtB (OR = 11.7, p =0.001)基因相關(guān)性較高。在18株壯觀霉素（SPE）耐藥菌株中，6株（13.3%）檢出了strA，8株（17.8%）檢出了strB，17株（37.8%）檢出了aadA，2株（4.4%）檢出了amtA，11株（24.4%）檢出了rmtB，6株（13.3%）檢出了aacC2[aac(3)-Iic]，7株（15.6%）檢出了aadA1。壯觀霉素（SPE）抗性與aadA (OR = 29.8, p ＜ 0.0001)、rmtB (OR= 22.5,p＜ 0.0001)和rmtD(OR = 9.6,p= 0.001)基因有顯著相關(guān)性。有13個(gè)菌株對(duì)頭孢呋辛（CFX）耐藥，這些菌株都攜帶blaTEM-1，而其中有5個(gè)菌株（38.5%）也攜帶blaROB-1。相比之下，40個(gè)（40/53, 75.5%）攜帶blaTEM-1和6個(gè)攜帶blaROB-1的菌株中有1株未表現(xiàn)出對(duì)頭孢呋辛（CFX）耐藥。頭孢呋辛耐藥與blaROB-1呈顯著正相關(guān)（OR= 26.3,p= 0.002）。對(duì)泰樂菌素耐藥菌株中有67.6%（25/37）的菌株含有至少一個(gè)相應(yīng)的泰樂菌素耐藥基因。這些菌株中，有6株（16.2%）攜帶erm(A)，20株（54.1%）攜帶erm(B)，11株（29.7%）攜帶erm(C)，2株（5.4%）攜帶lnu(C)。泰樂菌素耐藥性與erm(B)(OR = 10.0,p= 0.03)、erm(C)(OR = 7.6,p= 0.04)和lnu(C)(OR = 0.1,p= 0.005)呈現(xiàn)相關(guān)性。然而，泰樂菌素耐藥性只與兩個(gè)抗性基因[erm(B)和erm(C)]呈正相關(guān)。對(duì)于氯霉素類藥物，51株菌株對(duì)氯霉素（CHL）耐藥，5株對(duì)氟苯尼考（FFC）耐藥。45株（45/51, 88.2%）對(duì)氯霉素（CHL）耐藥的菌株攜帶至少一個(gè)相應(yīng)的耐藥基因。氯霉素（CHL）耐藥性與int(OR= 18.7,p= 0.01)以及氟苯尼考（FFC）耐藥性與catl(OR =25.1,p= 0.004)、cmlA(OR = 18.7,p= 0.01)呈正相關(guān)。然而，阿莫西林（AMX）、頭孢氨芐（CFL）和青霉素（PEN）的耐藥性與任何耐藥基因均無相關(guān)性。

表4 副豬嗜血桿菌耐藥表型之間的相關(guān)性

（續(xù)表）

表5 副豬嗜血桿菌菌株中耐藥基因的分布

（續(xù)表）

表6 副豬嗜血桿菌分離株中耐藥基因兩兩之間的相關(guān)性

（續(xù)表）

表7 副豬嗜血桿菌耐藥性表型和耐藥基因的相關(guān)性

4. 討論

與之前的研究報(bào)道的英國(guó)、德國(guó)和丹麥的豬中分離的副豬嗜血桿菌存在較低的抗生素耐藥性這一結(jié)果相反，本研究顯示越南分離的副豬嗜血桿菌有很高水平的耐藥性[13,15,32]。此外，相較于丹麥豬中副豬嗜血桿菌分離株對(duì)恩諾沙星和環(huán)丙沙星有高水平的耐藥性[14]，以及中國(guó)和西班牙的分離菌株對(duì)三種及以上抗生素（如同時(shí)對(duì)恩諾沙星、磺胺甲惡唑/甲氧芐啶以及環(huán)丙沙星耐藥）高比例的耐藥性[16]，本研究數(shù)據(jù)顯示，越南中部分離的副豬嗜血桿菌對(duì)恩諾沙星和環(huán)丙沙星都有較低的耐藥性，對(duì)以上三種抗生素同時(shí)耐藥的比例也同樣較低。Nedbalcová和Ku?erová的研究結(jié)果表明，捷克的豬中分離的副豬嗜血桿菌對(duì)氟喹諾酮類抗生素有很低的耐藥性[32]，這一報(bào)道與本研究結(jié)果一致。因此，我們的研究結(jié)果說明了氟喹諾酮類、泰妙菌素、氟苯尼考以及強(qiáng)力霉素能有效地治療和防控越南中部地區(qū)的豬格拉瑟氏病。此外，本研究結(jié)果（表 4）對(duì)于抗生素的臨床使用有指導(dǎo)意義。

氨基糖苷類抗生素耐藥性是由編碼16S RNA甲基轉(zhuǎn)移酶的amtA、rmtB、rmtD基因[33]，編碼磷酸轉(zhuǎn)移酶的strA、strB基因[34,35]以及編碼腺苷轉(zhuǎn)移酶的aadA、addA1基因[36,37]的存在所導(dǎo)致的。本研究結(jié)果表明副豬嗜血桿菌攜帶有strA、strB、aadA和amtA基因。我們的結(jié)果與中國(guó)的一項(xiàng)研究中報(bào)道的從中國(guó)的豬中分離的副豬嗜血桿菌攜帶抗性基因的比例rmtB(11.9%)、rmtD(0.7%)、aacC2[aac(3)-Iic] (4.2%)和aadA1(20.8%)相一致，但是與澳大利亞的相關(guān)研究結(jié)果有差別[25]。94.5%的副豬嗜血桿菌攜帶有blaTEM-1基因，這也解釋了這些分離株對(duì)青霉素（85.7%）、阿莫西林（78.6%）和頭孢氨芐（71.4%）高耐藥率這一表型。由基因blaTEM-1和balRob-1（皆編碼β-內(nèi)酰胺酶）導(dǎo)致相應(yīng)的耐藥表型也在其他研究中有所報(bào)道[38-40]。這一結(jié)果與中國(guó)和其他國(guó)家的副豬嗜血桿菌耐藥性研究結(jié)果相似，均表明了嚴(yán)重的β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥性[17,25,38]。已有研究表明，氟喹諾酮類抗生素耐藥性在細(xì)菌中迅速傳播和增長(zhǎng)，因?yàn)榇蠖鄶?shù)qnr基因位于接合轉(zhuǎn)移質(zhì)粒的類轉(zhuǎn)座子或整合子序列中[26,41]。在本研究中，雖然副豬嗜血桿菌分離株對(duì)氟喹諾酮類抗生素的耐藥率較低，但它們攜帶了qnrA1和qnrB1基因，這一點(diǎn)不容忽視。另外，雖然在其他報(bào)道中顯示副豬嗜血桿菌對(duì)大環(huán)內(nèi)脂類抗生素耐藥基因ermA和ermB的攜帶率較低，但是本研究結(jié)果表明越南分離株中不僅攜帶這兩種耐藥基因，而且還攜帶其他的大環(huán)內(nèi)脂類抗生素耐藥基因，如ermC和lnuC。這些基因通過對(duì)核糖體結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行修飾導(dǎo)致耐藥性，是細(xì)菌中最主要的對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類藥物的耐藥機(jī)制[42]。副豬嗜血桿分離株中出現(xiàn)了氟苯尼考耐藥性，主要是由于攜帶了含有flor基因的新型小質(zhì)粒[17]，這也解釋了為何本研究中副豬嗜血桿菌分離株對(duì)氟苯尼考的耐藥程度較低這一現(xiàn)象。對(duì)磺胺類抗生素的耐藥性與整合子系統(tǒng)和接合質(zhì)粒上所攜帶的sulI和sulII基因（編碼二氫蝶呤合酶）相關(guān)[43]。這與本研究中副豬嗜血桿菌分離株攜帶有sulI和sulII（均占14.8%）基因這一結(jié)果相一致。此外，我們研究發(fā)現(xiàn)副豬嗜血桿菌分離株中攜帶有tetA、tetB和tetH基因，這也解釋了其對(duì)四環(huán)素類抗生素（不包括DOX）的耐藥表型。在澳大利亞的相關(guān)研究也報(bào)道了編碼外排泵的tetB和tetH基因的存在而導(dǎo)致對(duì)四環(huán)素類抗生素的耐藥性[25,44]。四環(huán)素類抗生素對(duì)病原菌失效即是通過tetB和tetH編碼的外排泵將抗生素排除細(xì)胞所導(dǎo)致。

耐藥基因之間有關(guān)聯(lián)性已經(jīng)有研究證實(shí)[45,46]。不同耐藥基因關(guān)聯(lián)程度的增加可能是由于其位于同一個(gè)可移動(dòng)元件，如質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子或整合子上[43,47,48]。本研究結(jié)果表明，許多耐藥基因之間有很強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性，這可能就是因?yàn)檫@些耐藥基因存在于相同的可移動(dòng)元件。這一觀點(diǎn)與Rosengren等[31]的研究結(jié)果一致，其發(fā)現(xiàn)qnrB1基因與rmtB、qnrA1、lnu(C)、catl、int、tetA、tetB和tetH等8個(gè)耐藥基因的關(guān)聯(lián)性較高。另外，sulI和lnu(C)相關(guān)聯(lián)以及sulII和tetA基因相關(guān)聯(lián)，它們是整合子的一部分，而且tetB和tetH基因相關(guān)聯(lián)導(dǎo)致了對(duì)金霉素的高耐藥率。這些結(jié)果有力地證明了，耐藥基因與能夠水平傳播的可移動(dòng)原件如質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子上的DNA有關(guān)。在我們的研究中也發(fā)現(xiàn)了抗生素的耐藥表型與耐藥基因有很強(qiáng)的相關(guān)性，如慶大霉素耐藥性與rmtD之間，頭孢呋辛耐藥性與balrob-1之間，以及氯霉素與int之間都有較高的相關(guān)性，這說明了這些耐藥表型可能是由單一的耐藥基因的存在所導(dǎo)致的。這一發(fā)現(xiàn)與之前的研究是一致的[30,31]。但有趣的是，我們發(fā)現(xiàn)有一些菌株有耐藥表型，但不存在對(duì)應(yīng)的耐藥基因，有些菌株存在耐藥基因，但不存在對(duì)應(yīng)的耐藥表型。例如，一些菌株對(duì)阿莫西林有耐藥性，但不攜帶任何相關(guān)的抗性基因。這一結(jié)果與Rosengren等[31]的發(fā)現(xiàn)一致。一種可能的解釋是一些耐藥表型需要在許多不同的遺傳因素刺激存在下才會(huì)表達(dá)，并且每個(gè)因素可能呈現(xiàn)一個(gè)獨(dú)特的流行病學(xué)特征[23,49]。因此，在越南豬副嗜血桿菌分離株中耐藥性的作用機(jī)制值得進(jìn)一步研究。

5. 總結(jié)

本研究首次研究了越南中部地區(qū)豬副嗜血桿菌分離株耐藥性和相關(guān)耐藥基因的流行特征。這些分離株具有廣泛的耐藥性，而且耐藥水平很高，多重耐藥比例也很高。分離株中最常見的耐藥基因有blaTEM-1、int、gyrA和rmtD。本研究發(fā)現(xiàn)多種耐藥基因的存在與分離株的相關(guān)耐藥表型有明顯的相關(guān)性。因此，要限制那些具有高耐藥率的抗菌藥物的使用，但是氟喹諾酮類、泰妙菌素、氟苯尼考以及強(qiáng)力霉素仍可用于越南格拉瑟氏病的防控。另外，本研究中揭示的耐藥性和耐藥基因相關(guān)性網(wǎng)絡(luò)也將為越南制定相關(guān)政策以及臨床上抗生素的使用提供指導(dǎo)。同時(shí)，也說明目前通過減少抗生素的使用來限制耐藥性的傳播可以避免對(duì)耐藥基因的選擇。因此，在遺傳水平上評(píng)估抗生素耐藥性，并分析耐藥表型與耐藥基因之間的相關(guān)性，對(duì)于制定耐藥性防控策略是至關(guān)重要的。

致謝

本研究由國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2017YFD0500201）、武漢市科技前沿項(xiàng)目（2018020401011300）、湖北省自然科學(xué)基金創(chuàng)新群體項(xiàng)目（2016CFA015）和中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金資助項(xiàng)目（2662018QD003）資助。

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