AFP-L3和GP73在原發(fā)性肝癌中的診斷價值

李小月 韓婷婷 夏 天 徐海濤 石良燕

（安慶市第一人民醫(yī)院檢驗科，安徽 安慶 246003）

原發(fā)性肝癌是世界上常見的十大腫瘤之一，每年有60萬～70萬人死于此病[1-2]，同時我國還是乙型肝炎大國，有研究顯示，乙型肝炎病毒的含量與肝硬化，肝癌所致的死亡呈顯著的正相關(guān)[3]。由于肝癌具有發(fā)病隱匿、轉(zhuǎn)移早且病死率高等特點，所以肝癌的早期診斷對提高患者生存率和生活質(zhì)量極為重要[4]。目前AFP是傳統(tǒng)應(yīng)用最廣泛的原發(fā)性肝癌腫瘤標志物，據(jù)報道其敏感性40%～65%，特異性76%～96%[4]。為了更加早期準確的診斷肝癌，本研究擬探討新的腫瘤標志物AFP-L3和GP73的聯(lián)合診斷對原發(fā)性肝癌的診斷價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象：選取2016年1月1日至2016年12月31日在我院就診的肝臟疾病患者80例為研究對象，其中男性47例，女性20例。平均年齡（52.69±14.55）歲。將研究對象分三組分別為肝炎、肝硬化和肝癌組。所有肝癌、肝硬化、慢性乙型肝炎患者的診斷均符合《原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標準》及《慢性乙型肝炎防治指南》[5]。

1.2 儀器和設(shè)備：GP73檢測采用酶聯(lián)免疫定量方法檢測，試劑盒由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供，陽性判定值為≥150 μg/L；AFP-L3（%）測定采用甲胎蛋白異質(zhì)體親和吸附離心管洗脫AFP-L3，試劑盒由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供；洗脫液和血清由Roche Cobas E601 電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑檢測，然后計算AFP-L3占總AFP的比率（%）。

1.3 方法：AFP-L3的測定采用親和吸附離心管法，管中預(yù)裝有親和介質(zhì)，該親和介質(zhì)能特異性結(jié)合AFP-L3。吸取血清400 μL加入600 μL清洗液中，編號，混勻。將親和吸附離心管的上部離心管裝入離心外管中，3000 r/min離心20 s棄液，取稀釋后的血清600 μL加入到上部離心管中，室溫靜置10 min；加入清洗液1.2 mL，3 000 r/min離心20 s，棄上清液。加入600 μL洗脫液，3000 r/min離心20 s，收集離心柱外管中的液體，然后用羅氏Cobas E601檢測總的AFP和AFP-L3 的含量，計算AFP-L3占AFP總量的百分比。GP73的檢測采用酶聯(lián)免疫定量方法，按照試劑盒說明書的操作方法進行：每孔加50 μL稀釋液和20 μL樣品或者校準品，37 ℃溫育60 min。加酶100 μL震蕩混勻后37 ℃溫育30 min。洗板5次后加入顯色液A、B各50 μL震蕩混勻，37 ℃避光顯色15 min。加入終止液50 μL，輕拍混勻。用酶標儀檢測各孔在450 nm處的吸光度（A）值，同時試劑盒中的標準品以5個濃度（0、5、10、20、40、80 ng/mL）為標準點，繪制標準曲線，求得標準曲線公式及相關(guān)系數(shù)，后根據(jù)公式計算待檢者血清樣品的GP73含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析：實驗數(shù)據(jù)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行分析。符合正態(tài)分布的計量資料，用（±s）描述；對于呈偏態(tài)分布的資料，以中位數(shù)（四分位間距）進行描述，組間比較作非參數(shù)Kruskal-Wallis檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗。將血清標志物GP73和AFP-L3進行ROC曲線分析，計算靈敏度、特異度等特征參數(shù)。以P＜0.05 為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 不同組別患者GP73和ALP-L3的檢測結(jié)果比較：三組標本GP73和AFP-L3的檢測結(jié)果見表1。由表1可知，GP73和AFP-L3在三組間有顯著差異（P＜0.05）。且GP73濃度在三組間有依次遞減的趨勢，即肝癌組＞肝硬化組＞肝炎組。

2.2 各組別血清AFP-L3和GP73檢測陽性率比較：各組血清AFP-L3%和GP73的陽性情況見表2。由表2可知，肝癌組中GP73和AFP-L3的陽性率分別為66.67%和58.33%；肝硬化組中GP73和AFP-L3的陽性率分別為56%和28%；肝炎組中GP73和AFP-L3的陽性率分別為3.33%和6.67%。且三組之間陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。由表3可知，肝炎組中GP73和AFP-L3的陽性率分別與肝癌組和肝硬化組有差異，而肝硬化組和肝癌組之間GP73和AFP-L3的陽性率無明顯差異（P＞0.05）。

表1 三組患者之間GP73和AFP-L3（%）的檢測結(jié)果

表2 各組血清AFP-L3（%）和GP73檢測陽性率

表3 三組標本之間GP73和AFP-L3%的陽性率比較

2.3 GP73和AFP-L3的ROC曲線分析：將兩種血清學(xué)標志物分別做ROC曲線分析，結(jié)果見圖1。血清GP73診斷原發(fā)性肝癌臨界值為117.66μg/L，曲線下面積0.758，95%置信區(qū)間0.593～0.922，其診斷靈敏度為83.3%，特異度為69.1%；血清AFP-L3診斷原發(fā)性肝癌臨界值為1.09%，曲線下面積0.722，95%置信區(qū)間0.539～0.905，其診斷靈敏度為58.3%，特異度為85.5%，見表4。

表4 兩種標志物對原發(fā)性肝癌診斷效能比較

圖1 GP73和AFP-L3的ROC曲線

3 討 論

原發(fā)性肝癌是l臨床上常見的腫瘤之一，其病死率位和病死率分別占惡性腫瘤的第一位和第二位。傳統(tǒng)的診斷一般依靠血清甲胎蛋白（AFP）檢測結(jié)合超聲影像對高危人群的進行檢測和篩查，達到預(yù)防和診斷早期肝癌的目的，但其靈敏度和特異性差別很大，造成了一些漏診和誤診。隨著研究深入，一些新的標志物和檢測手段的出現(xiàn)，不僅大大提高了原發(fā)性肝癌的早期診斷的概率，而且能把肝臟良性疾病與惡性腫瘤區(qū)分開來。

GP73是一種跨膜蛋白，它可在人類多種組織的上皮細胞中表達。正常情況下，僅在肝臟的膽管上皮細胞中表達，肝細胞基本不表達。但在肝臟發(fā)生疾病的情況下表達量增加，尤其是肝癌時含量較肝硬化時大幅度增加，可作為肝臟疾病的血清學(xué)標志物。有研究顯示，GP73是近年來較好的早期肝癌診斷的標志物之一，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起著一定的作用。不僅敏感性高于傳統(tǒng)的肝癌標志物AFP，而且表達量與腫瘤的癌變階段呈正相關(guān)[6-8]。AFP-L3由肝細胞特異性產(chǎn)生，是AFP的一種糖蛋白。有國外研究表明，AFP-L3是肝癌高度特異性指標，可用于早期肝癌的特異性診斷，我國也推薦將AFP-L3作為原發(fā)性肝癌的特異性指標。其診斷的靈敏度和特異性均高于AFP，而且AFP-L3不僅可以提示腫瘤的大小還可以預(yù)測肝癌細胞的惡性程度，其占總AFP比率越高提示腫瘤的惡性程度越高[9-11]。

本研究中GP73在肝癌和肝硬化和肝炎三組中的陽性率有差異，且呈依次降低的趨勢，分別為肝癌組＞肝硬化組＞肝炎，但是在肝硬化和肝癌組之間的陽性率沒有差異，這提示GP73的含量能更好的區(qū)分肝炎與肝硬化或肝癌，但不能準確區(qū)分肝硬化和肝癌。與此類似，AFP-L3的陽性率也在三組都有統(tǒng)計學(xué)差異，同樣在肝硬化和肝癌組之間沒有差異。本研究結(jié)果顯示GP73的靈敏度高于AFP-L3，但特異性略低于GP73，此結(jié)果與大多數(shù)研究結(jié)果類似[12]。所以有人指出，將兩種標志物聯(lián)合檢測，不僅能有效區(qū)分肝臟良性病變與肝癌而且能更加準確診斷肝癌并且監(jiān)測原發(fā)性肝癌的復(fù)發(fā)。

綜上所述，隨著傳統(tǒng)的血清學(xué)加影像學(xué)檢測漸漸不能滿足臨床對原發(fā)性肝癌的診斷需求，迫使人們尋求新的標志物為提高診斷率，以便更好的節(jié)約醫(yī)療資源和改善患者的生存質(zhì)量。由于標本數(shù)量及檢測條件所限，得出結(jié)論有一定的局限性，GP73和AFP-L3的臨床價值還需進一步研究和探討。在日常工作中除了常規(guī)的血清學(xué)標志物檢測外，可結(jié)合當?shù)貙嶋H情況增加AFP-L3和GP73檢測，以便為原發(fā)性肝癌的早期診斷、鑒別診斷、療效評估以及預(yù)后監(jiān)測等提供有用價值。