廣西梧州市豬偽狂犬病凈化模式的示范推廣及初步監(jiān)測

戴光文，謝麗華*，陳莉，韋邦偉，陳雪英，周丕連，莫奇初，吳穎航，梁真，江精華，馬琳，熊毅，李劍靜，何杰明，黃超，肖萍，余麗梅，李媚，劉金表，黃瑞杰，何增文

（1.梧州市動物疫病預(yù)防控制中心廣西梧州 543002；2.梧州市漁業(yè)資源養(yǎng)護中心廣西梧州 543002；3.藤縣動物疫病預(yù)防控制中心廣西梧州 543300；4.廣西壯族自治區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心南寧 450107；5.岑溪市動物疫病預(yù)防控制中心廣西梧州 543200）

豬偽狂犬?。╬seudo rabies，PR）是由皰疹病毒科豬皰疹病毒Ⅰ型偽狂犬病毒引起的以發(fā)熱、奇癢、腦脊髓炎為主要特征的急性傳染病。經(jīng)典的豬偽狂犬病臨床癥狀因不同日齡而異，主要以懷孕母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、弱仔、木乃伊胎和15 日齡內(nèi)新生仔豬大量異常死亡為臨床特征，青年母豬和空懷母豬返情、屢配不孕，公豬睪丸腫脹、性功能下降，其他成年豬一般呈隱性感染。2011 年以來，我國發(fā)生新型豬偽狂犬病，新分離的偽狂犬病毒毒株出現(xiàn)基因變異，與Bartha 株比較，其毒力相關(guān)基因RR 基因第31～36 位出現(xiàn)6個連續(xù)堿基缺失，免疫原gB 基因第224—232 位發(fā)生9 個堿基GCCCCGGCC 缺失，造成母豬、哺乳仔豬、保育豬、小中大豬全部表現(xiàn)為顯性感染，其中中大豬、母豬都會表現(xiàn)為典型的偽狂犬癥狀而死亡[1]。豬偽狂犬病是當前豬場的主要疫病，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。不同風(fēng)險區(qū)域和不同養(yǎng)殖模式的養(yǎng)豬場戶豬偽狂犬病感染和發(fā)生情況不同，建立一套適應(yīng)不同類型豬偽狂犬病控制與凈化模式并示范推廣具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源使用監(jiān)督抽樣方式采集梧州市養(yǎng)豬場戶的豬群樣品，包括2018-2020 年重點種豬場豬血清740 份、精液20份、組織60 份及2019 年1 月—2020 年6 月普通種豬場、商品代規(guī)模豬場和散養(yǎng)戶豬血清916 份。精液5mL/ 份、組織約50g/ 份（腦、淋巴結(jié)、扁桃體、脾臟等），新鮮無腐??；血清約2mL/ 份，清亮無溶血。

1.1.2 免疫疫苗豬群免疫使用的豬偽狂犬病gE 基因缺失活疫苗主要廠家有西班牙海博萊、四川華派、青島易邦、中牧股份等，疫苗毒株主要為Bartha-K61 株、HB-98 株。

1.1.3 主要試劑豬偽狂犬病病毒PCR 試劑盒（北京世紀元亨、廣州維伯鑫等）、豬偽狂犬病病毒gB 抗體ELISA 檢測試劑盒（北京金諾百泰、武漢科前等）、豬偽狂犬病gE 抗體ELISA 檢測試劑盒（西班牙Hip ra、美國IDEXX等）。

1.1.4 儀器設(shè)備酶標儀（TECAN）、梯度PCR 儀、微量可調(diào)移液器等。

1.2 方法

1.2.1 場點選擇獲中國動物疫病預(yù)防控制中心2015—2017年“豬偽狂犬病凈化示范場”的重點種豬場（A 場）1 個；獲廣西動物衛(wèi)生監(jiān)督所“健康種豬場”且2015—2017 年連續(xù)監(jiān)測為豬偽狂犬病陰性的重點種豬場（B 場）1 個；處于豬偽狂犬病風(fēng)險區(qū)域內(nèi)具有一定防疫基礎(chǔ)條件的普通種豬場4 個、商品代規(guī)模養(yǎng)豬場23 個、散養(yǎng)戶3 個。

1.2.2 凈化模式參照地方標準《種豬場主要疫病控制與凈化》（DB45/T186—2004）《廣西壯族自治區(qū)種豬場主要疫病控制與凈化操作規(guī)程》《廣西壯族自治區(qū)健康種豬場量化考核驗收標準》和《重大動物疫病免疫操作技術(shù)規(guī)程》（DB45/T1004—2014）《廣西重點種豬場疫病控制與凈化工作年度考核評分表》《育種評分表》（2015）及2018 年《“廣西動物疫病凈化創(chuàng)建場”“廣西動物疫病凈化場”評審辦法（試行）》《廣西壯族自治區(qū)規(guī)模化養(yǎng)殖場主要動物疫病凈化技術(shù)規(guī)程（種豬場）》，集成應(yīng)用免疫防控、監(jiān)測、診斷、陽性動物篩查和淘汰、生物安全防控等綜合技術(shù)措施，開展豬偽狂犬病病毒核酸、gB抗體和野毒gE 抗體監(jiān)測。結(jié)合梧州市本地不同風(fēng)險區(qū)域?qū)嶋H，建立適用于不同類型養(yǎng)豬場戶的豬偽狂犬病控制與凈化方案。

1.2.3 示范推廣2017 年前已率先在2 個重點種豬場實施豬偽狂犬病控制與凈化工作并取得一定成果，2018—2020 年進行持續(xù)監(jiān)督監(jiān)測以評估凈化維持狀態(tài)。2017—2020 年將凈化經(jīng)驗示范推廣至普通種豬場、商品代規(guī)模豬場和散養(yǎng)戶，各場戶結(jié)合實際調(diào)整方案和具體實施，2019—2020 年以抽樣方式進行監(jiān)督監(jiān)測以初步評估防控效果。

1.2.4 樣品檢測及標準依據(jù)由具備獸醫(yī)實驗室考核合格資質(zhì)的廣西壯族自治區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心、梧州市動物疫病預(yù)防控制中心進行樣品檢測，豬偽狂犬病病毒核酸采用聚合酶鏈式反應(yīng)方法，豬偽狂犬病gB抗體和g E抗體采用ELISA 方法，按照試劑說明書進行。標準涉及GB/T18641 偽狂犬病診斷技術(shù)、NY/T678—2003 豬偽狂犬病酶試驗方法，按現(xiàn)行有效更新檢測依據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 重點種豬場豬偽狂犬病監(jiān)測情況

共檢測豬偽狂犬病PR-gB抗體血清740 份，總體免疫合格率為94.19%，除重點種豬場B 場2019 年合格率為83.46%外，A、B場其他年份的合格率均為100%。檢測PR-gE 抗體血清700 份，均為陰性；檢測PR 病毒核酸80 份，均為陰性，詳見表1。

表1 重點種豬場2018—2020年監(jiān)督檢測情況（單位：份、% ）

2.2 普通種豬場、規(guī)模豬場、散養(yǎng)戶豬偽狂犬病監(jiān)測情況

共檢測豬偽狂犬病PR-gB 抗體血清715 份，總體免疫合格率為91.61%，普通種豬場、規(guī)模豬場、散養(yǎng)戶合格率分別為98.62%、88.63%、100%。檢測PR-gE 抗體血清206 份，均為陰性（詳見附表2）。

表2 普通種豬場、規(guī)模豬場、散養(yǎng)戶2019—2020年抽樣檢測情況（單位：個、份、% ）

3 討論

豬偽狂犬病作為廣西養(yǎng)豬業(yè)的重要豬病，研究人員對該病在廣西的流行狀況做了大量調(diào)查。付薇等[2]對2008 年25 個已使用豬偽狂犬病病毒基因缺失苗豬場的1,455 份送檢血清進行g(shù)E 抗體檢測，陽性率僅為0.76%；但2012—2014 年，鐘舒紅等[3]報道廣西部分地區(qū)181 個豬場中15.47%的豬場為野毒陽性場，在7,739 份豬血清樣本中有7.55%的陽性樣本，其中梧州市檢測24 個場、576份血清，場陽性率為16.67%、樣品陽性率為5.03%；何奇松等[4]對2013 年廣西18 個不同規(guī)模種豬場送檢的2,793 份血清樣品進行偽狂犬病gE 抗體檢測，陽性率為4.94%；譚春萍等[5]對2014—2015 年廣西900 頭母豬gE 抗體檢測，陽性率平均為17.78%，其中毗鄰梧州市的三個地區(qū)母豬血清抗體陽性率在15.56%～18.89%；戴光文等[6]對2015—2016 年梧州市7 個商品代飼養(yǎng)場70 份病死豬組織樣品PRV 核酸檢測，場陽性率和樣品陽性率均為14.3%；趙碩等[7]對2013—2018 年廣西疑似PR 發(fā)病豬靶組織714份樣品進行豬偽狂犬病病毒PCR 檢測，陽性率為24.5%，流行株以變異毒株為主。調(diào)查結(jié)果顯示，自國內(nèi)于2011 年出現(xiàn)新型豬偽狂犬病病毒毒株后，廣西部分豬場豬偽狂犬病流行比較嚴重，梧州市部分豬場也受到豬偽狂犬病侵擾和威脅。因此，對該病實施控制與凈化并示范推廣是非常有必要的。

廣西種豬場疫病凈化工作于2003 年明確方向，豬偽狂犬病作為6 大種類疫病之一被列入凈化病種[8]，梧州市豬偽狂犬病凈化工作從重點種豬場建場時就開始實施。監(jiān)測豬群PR-gB 抗體、PR-gE 抗體、病毒核酸是凈化評估的重要手段，其中PR-gB 抗體水平與免疫效果密切相關(guān)，PR-gE 抗體可評估群體野毒感染狀況，PR 病毒核酸檢測可對豬偽狂犬病確診。本研究由點到面，以重點種豬場為基本單元的豬偽狂犬病凈化成果示范推廣到以不同類型養(yǎng)豬場戶的區(qū)域凈化，結(jié)合各豬場實際情況，采用豬偽狂犬病基因缺失疫苗免疫，抑制偽狂犬病野毒的復(fù)制，減少病毒傳播和潛伏感染機會。通過2018—2020 年持續(xù)監(jiān)測，重點種豬場及示范的普通種豬場、商品代規(guī)模豬場、散養(yǎng)戶gB 抗體合格率分別達到94.19%、98.62%、88.63%、100%，所有場戶抽檢的樣品gE 抗體、病毒核酸均為陰性，結(jié)果表明梧州市豬偽狂犬病的控制與凈化取得了一定初步成果，以廣西與時俱進的凈化方案為基礎(chǔ)并結(jié)合梧州市本地實際情況集成應(yīng)用的凈化措施是有效的。鑒于當前豬偽狂犬病病毒不斷變異，對豬場威脅始終存在的實際情況，將持續(xù)實施凈化措施，進一步加大官方采樣量和監(jiān)管監(jiān)測力度，按照無規(guī)定動物疫病創(chuàng)建場的要求進行嚴格評估，確保凈化工作取得實效。