農(nóng)產(chǎn)品中氰戊菊酯農(nóng)藥殘留免疫檢測(cè)技術(shù)探究

張曉英

【摘? ?要】 本文重點(diǎn)研究的是基于鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略背景下，嶺南鄉(xiāng)村地區(qū)如何抓住政策機(jī)遇實(shí)現(xiàn)創(chuàng)新性旅游開發(fā)，在整合現(xiàn)有鄉(xiāng)村旅游開發(fā)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步推進(jìn)嶺南荔枝文化的旅游開發(fā)，通過(guò)文化娛樂(lè)與旅游開發(fā)、文化整合與規(guī)劃發(fā)展、文化風(fēng)俗與創(chuàng)意發(fā)展路徑，旨在為嶺南荔枝文化的旅游開發(fā)尋找一條新型的特色發(fā)展之路。

【關(guān)鍵詞】 鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略;荔枝文化;旅游開發(fā);路徑

中圖分類號(hào)：S-3? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)識(shí)別碼：A? ? ? ? ? ? ? ?文章編號(hào)：2096-1073（2020）02-0036-37

Investigation On The Immunoassay Technology Of Cyanovalerin Pesticide Residues In Agricultural Products

ZHANG Xiaoying

（Institute Of Agricultural Quality Standards And Testing Technology， Fujian Academy Of Agricultural Sciences? Fuzhou， Fujian? ?350003）

[Abstract] The high residue of fenvalerate in agricultural products has a certain potential threat to the environment， animals and human beings. Therefore， its use must be strictly controlled and tested. In order to detect fenvalerate pesticide residues more effectively， this paper starts from the basic concept， characteristics， mechanism and harm of fenvalerate， and then analyzes and discusses the influence of the haptens linkage sites of fenvalerate on the antibody characteristics.

[Key words] cypermethrin; pesticide residues; immunoassay technique

農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全一直是消費(fèi)者關(guān)注的重點(diǎn)，氰戊菊酯作為一種毒性不大，但是使用極為廣泛化學(xué)試劑農(nóng)藥，有必要對(duì)其殘留進(jìn)行安全監(jiān)測(cè)，消除潛在危害，保障民眾生活安全。

1? 氰戊菊酯概述

1.1? 氰戊菊酯的結(jié)構(gòu)特征及作用機(jī)理

氰戊菊酯最初是由日本化學(xué)株式會(huì)社研發(fā)的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥，化學(xué)名稱為（S）-α-氰基-3-苯氧基芐基（S）-2-（4-氯苯基）-3-甲基丁酸酯[（S）-α-cyano-3-phenoxybenzyl（S）-2-（4-chlorophenyl）-3-methylbutyrate]。作為除蟲效果較為明顯的殺蟲劑之一，氰戊菊酯屬于神經(jīng)毒劑，作用于腦突觸體膜位置上的ATPase，進(jìn)而使乙酰膽堿酯酶在此處大量聚集，實(shí)際抑制腦乙酰膽堿酯酶，而乙酰膽堿酯酶是維持生物神經(jīng)興奮的物質(zhì)，對(duì)于人們的認(rèn)知、生活、學(xué)習(xí)等具有較為重要的作用，如此便會(huì)引起中樞能系統(tǒng)障礙，進(jìn)而使各種基本能力如記憶、學(xué)習(xí)等逐步下降，從而引起學(xué)習(xí)、記憶等功能障礙。

1.2? 氰戊菊酯的危害

首先，由于氰戊菊酯其毒性小、殘留量較小等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛的應(yīng)用于農(nóng)業(yè)產(chǎn)品的生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)中，但是氰戊菊酯作為擬除蟲菊酯類農(nóng)藥仍然是神經(jīng)類型毒劑，同樣對(duì)人類的神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)有著一定的危害。其次，對(duì)于其他生物尤其是水生生物而言，氰戊菊酯則是劇毒性的殺蟲劑，對(duì)其生存有著毀滅性的打擊。

1.3? 氰戊菊酯殘留的研究意義及研究技術(shù)

對(duì)氰戊菊酯殘留的研究不僅是對(duì)人類健康的負(fù)責(zé)，也是其他生物的負(fù)責(zé)，總的來(lái)說(shuō)，我們應(yīng)該遵循整個(gè)生命系統(tǒng)的合理存在及規(guī)律，盡量減少人為因素的干擾，才能和自然和諧共處、共生共存。目前，儀器檢測(cè)相對(duì)于免疫檢測(cè)則會(huì)更加準(zhǔn)確，靈敏度較高、穩(wěn)定性好，具有較高的認(rèn)可度，但是儀器檢測(cè)客觀上需要的檢測(cè)器具較為昂貴，事前的檢測(cè)處理程序較為復(fù)雜且檢測(cè)耗時(shí)較長(zhǎng)，同時(shí)需要檢測(cè)專業(yè)人員進(jìn)行作業(yè)，因此，該方法在其使用上具有較大的局限性。

2? 氰戊菊酯半抗原連接臂位點(diǎn)對(duì)抗體特性的影響

抗原是氰戊菊酯免疫檢測(cè)的出發(fā)點(diǎn)和基礎(chǔ)，同時(shí)其也是產(chǎn)生抗體的依據(jù)。氰戊菊酯本身沒(méi)有免疫原性，原因在于其分子量不足1萬(wàn)，正因?yàn)槿绱?，要發(fā)生免疫效應(yīng)，必須和某些大分子蛋白進(jìn)行偶聯(lián)才能實(shí)現(xiàn)目的。

氰戊菊酯半抗原暴露對(duì)抗體特性的影響。首先，在靈敏度的比較上，利用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法進(jìn)行測(cè)驗(yàn)，以標(biāo)準(zhǔn)溶液和氰戊菊酯標(biāo)品溶液為基液分別進(jìn)行觀察;其次，進(jìn)行特異性的比較，特異性主要說(shuō)明某種抗體對(duì)類似化學(xué)藥物的交叉反應(yīng)率，同樣采取上述實(shí)驗(yàn)的過(guò)程參考，但是基液選取幾種相近的化學(xué)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)制品進(jìn)行。

3? 量子點(diǎn)熒光標(biāo)記免疫分析法

3.1? 選擇原因

選擇量子點(diǎn)熒光標(biāo)記是基于量子點(diǎn)熒光發(fā)射的波峰是唯一的，并且其呈現(xiàn)狹窄對(duì)稱狀、斯托克斯位移較大，基本不會(huì)出現(xiàn)光譜交疊現(xiàn)象，較易進(jìn)行識(shí)別。另外，量子點(diǎn)的發(fā)射波長(zhǎng)可以進(jìn)行較為準(zhǔn)確的調(diào)節(jié)，而且不發(fā)生組成元素的變化等。

3.2? 主要試驗(yàn)試劑

氯化鎘（CdCl2·2.5H2O，99.0%）;氰戊菊酯;亞碲酸鈉（Na2Te O3）;溴氰菊酯單克隆抗體;硼氫化鈉（NaBH4，96.0%）;卵清白蛋白（OVA）;檸檬酸三納鹽（MPA， 99.0%）;牛血清蛋白（BSA）;氫氧化鈉（Na OH）甲醇;乙醇;兔抗鼠二抗;β-巰基乙醇和谷胱甘肽（GSH）;溴氰菊酯、氰戊菊酯;超純水。

3.3? 試驗(yàn)方法

3.3.1合成CdTe量子點(diǎn)? 準(zhǔn)備20ml濃度為0.01mol/L超純水，將CdCl2·2.5H2O 45.7 mg （2.5×10-4 mol）融入其中，后加入重量為73.8 mg的谷胱甘肽GSH （2.4×10-4 mol）、重量為0.1g檸檬酸三納鹽、重量為38.0 mg的Na2TeO （0.5×10-4 mol）以及重量為8.04 mg的NaBH4 （1.92×10-4 mol）， 用NaOH將PH值調(diào)至10.5，Cd2+、 TeO32、GSH的摩爾比調(diào)為 5：1：6。將溶液放入有回流功能的微波爐中，工作功率調(diào)整為600W，以溶液的顏色變化為淡綠色時(shí)啟動(dòng)回流，根據(jù)反應(yīng)時(shí)間的不同，得到不同標(biāo)記的量子點(diǎn)。對(duì)得到的量子點(diǎn)進(jìn)行篩選：待溶液冷卻至室溫，用乙醇對(duì)溶液進(jìn)行過(guò)濾，進(jìn)行離心操作（時(shí)間定為5分鐘、轉(zhuǎn)速設(shè)為4000rpm），除去清液中的Cd2+， TeO32-等雜質(zhì)，重復(fù)上述操作三遍，待乙醇揮干后，將沉淀重懸于5 mLpH 7.4 的PBS中，對(duì)溶液進(jìn)行紫外和熒光掃描操作。

3.3.2量子點(diǎn)紫外吸收、熒光光譜以及偶聯(lián)物熒光光譜的測(cè)定? 繼續(xù)上述實(shí)驗(yàn)操作后，將掃描合成的量子點(diǎn)的紫外以及光譜確定量子點(diǎn)的濃度以及粒徑，同時(shí)確定熒光激發(fā)波長(zhǎng)。保持偶聯(lián)抗體蛋白以后量子點(diǎn)的熒光發(fā)射波長(zhǎng)不變，以相同的操作對(duì)量子點(diǎn)的熒光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)量。最后，選擇本底值低的、信噪比高的吸收波長(zhǎng)作為最終的激發(fā)波長(zhǎng)。

3.3.3確定包被原以及偶聯(lián)抗體的濃度? 將包被2μg/mL、4 μg/mL、8 μg/mL的抗原在96孔板上100μL孔，在37℃環(huán)境下培育2小時(shí)、洗板三次，每孔封閉 1% OVA 200 μL，后在37℃培育 1小時(shí)，洗板 3 次，再將上述標(biāo)記抗體按 1：1、1：2、1：4、1：8、1：16 比例用 PBST稀釋后與包被抗原在37℃環(huán)境下反應(yīng)1小時(shí)，后洗板 3 次，再加入100μLPBS測(cè)量熒光值。最后，選擇本底值低的、信噪比高的值對(duì)應(yīng)的包被原和抗體濃度作為工作濃度。

3.3.4檢測(cè)前處理及檢測(cè)? 選取一定的蔬菜（實(shí)驗(yàn)用品：白菜、油菜）或者水果（蘋果）樣品切碎，打成均漿后過(guò)濾，在完成的濾液中加入甲醇、PBS配制成比例為1：9的實(shí)驗(yàn)溶液，后加入配制的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)溶液，配制調(diào)為0.08μg/mL、0.24μg/mL、1.5μg/mL、3μg/mL 的檢測(cè)液后即可進(jìn)行相關(guān)免疫檢測(cè)。

3.4? 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

（1）在量子點(diǎn)的熒光外觀上，合成量子點(diǎn)的紫外線照射出現(xiàn)黃色的熒光，不同波長(zhǎng)的測(cè)試下，只是光的強(qiáng)度發(fā)生變化，其他并無(wú)變化;（2）紫外掃描和熒光掃描的結(jié)果：量子點(diǎn)在一定數(shù)值（485nm）左右有紫外吸收峰，一定數(shù)值（550nm）有熒光激發(fā)波峰且唯一，半峰寬在一定范圍內(nèi)（38nm-40nm）。說(shuō)明合成量子點(diǎn)的粒徑分布呈現(xiàn)一定的均一性，在一定的半峰寬（30nm）的量子點(diǎn)粒徑較好，稍有離散，但是不影響熒光的質(zhì)量;（3）量子點(diǎn)熒光標(biāo)記免疫分析法前置程序處理簡(jiǎn)單，無(wú)需大量有機(jī)溶液，檢測(cè)快速、耗時(shí)較短，比較適合蔬菜、水果、茶葉等的快速檢測(cè)。

4? 結(jié)語(yǔ)

目前，氰戊菊酯作為被使用較為廣泛的殺蟲劑，因?yàn)槠浔旧淼暮拘暂^低、殘留度相對(duì)較低等特點(diǎn)深受歡迎。但是，我們也不能因此而忽略氰戊菊酯的濫用危害，尤其是對(duì)某些水生物種的滅絕性傷害。文章中，作者選擇氰戊菊酯半抗原連接臂位點(diǎn)對(duì)抗體特性的影響為研究出發(fā)點(diǎn)，探索出其中的規(guī)律，結(jié)合量子點(diǎn)熒光標(biāo)記免疫方法對(duì)氰戊菊酯的殘留進(jìn)行快速檢測(cè)，對(duì)于實(shí)際應(yīng)用有較大幫助。

參考文獻(xiàn)：

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（編輯：李丹）