耐多藥結(jié)核患者T細(xì)胞及細(xì)胞因子的變化對(duì)臨床療效的評(píng)估

葉 靜，孫海柏，杜鐘珍，梅早仙 (天津市海河醫(yī)院，天津 300000)

WHO顯示調(diào)查數(shù)據(jù)：在中國(guó)每年死于結(jié)核病的患者數(shù)多達(dá)13萬(wàn)[1]，且耐多藥較多[2]。這一情況嚴(yán)重威脅了患者的生命健康，成為我國(guó)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。耐多藥結(jié)核(Multi drug resistant tuberculosis MDR-TB)是指人體感染的結(jié)核菌經(jīng)檢測(cè)證實(shí)至少對(duì)利福平、異煙肼同時(shí)耐受的一種結(jié)核類型，中國(guó)MDR-TB病患者數(shù)占全世界MDR-TB病患者數(shù)的13%[3]。可分為初始耐藥及獲得性耐藥，總體治愈率較低，初治耐藥患者的治愈率往往顯著高于復(fù)治患者。MDR-TB病情容易反復(fù)，診治時(shí)間長(zhǎng)、臨床治療難度大、治療費(fèi)昂貴、治愈率低、死亡率高。由于治療周期長(zhǎng)，故在治療過(guò)程中能進(jìn)行及時(shí)而準(zhǔn)確的評(píng)估就顯得尤為重要?？菇Y(jié)核治療后若能對(duì)患者病情好轉(zhuǎn)或惡化進(jìn)行及時(shí)評(píng)估，則可及時(shí)決定是否需要調(diào)整治療方案，從而更加精準(zhǔn)的進(jìn)行治療。目前臨床上對(duì)于病情好轉(zhuǎn)或惡化常用的評(píng)價(jià)指標(biāo)有臨床表現(xiàn)、營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)評(píng)估、痰抗酸染色、痰結(jié)核菌培養(yǎng)、胸部X線片CT等，但都有其局限性，臨床表現(xiàn)及營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)評(píng)估往往不能體現(xiàn)結(jié)核菌清除狀況，痰抗酸染色陽(yáng)性率低，痰結(jié)核菌培養(yǎng)所需時(shí)間長(zhǎng)，胸部X線片或CT所示病變均吸收緩慢，以上都可以造成結(jié)論滯后。結(jié)核分枝桿菌侵入人體后，活化的CD4+T細(xì)胞(Th)產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答能有效抵抗結(jié)核菌感染，T細(xì)胞可分化為T(mén) helper (Th)1細(xì)胞、Th2細(xì)胞及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell Treg)亞群，細(xì)胞亞群Th17主要通過(guò)白介素17激活相關(guān)炎性反應(yīng)和其他效應(yīng)性T細(xì)胞結(jié)合發(fā)揮作用。根據(jù)體內(nèi)結(jié)核菌含量的多少?gòu)亩^察CD4+T細(xì)胞變化的規(guī)律，通過(guò)規(guī)律性的觀察可以了解治療效果與體內(nèi)輔助性T細(xì)胞以及相關(guān)細(xì)胞因子之間的變化規(guī)律。本研究通過(guò)分析T細(xì)胞的變化以及其相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)情況，分組分析變化趨勢(shì)，從而推斷診療的成功與否，對(duì)療效評(píng)估、轉(zhuǎn)歸給出快速的判斷和依據(jù)，同時(shí)也為將來(lái)進(jìn)行耐多藥結(jié)核患者的基因多態(tài)性的研究以及該病種進(jìn)行基因免疫制劑治療開(kāi)拓了新的思路和方向。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象：耐多藥結(jié)核組選自從2016年3月～2017年3月我院就診依據(jù)《結(jié)核診斷和治療指南》標(biāo)準(zhǔn)診斷的73例耐多藥結(jié)核患者符合以下要求：臨床癥狀：發(fā)熱、咳嗽、咯痰、咯血、胸痛/悶、盜汗、乏力、納差等。部分患者可無(wú)臨床癥狀、輕者可無(wú)體征。影像學(xué)檢查：提示結(jié)核病影像學(xué)變化特征。痰液檢查：結(jié)核菌液體培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性，耐藥菌檢測(cè)結(jié)果至少對(duì)利福平、異煙肼同時(shí)耐藥，年齡在16～78歲之間，男55例，女18例。將耐多藥結(jié)核組分成：①初治組43例，復(fù)治組30例。②培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組15例，確診耐多藥結(jié)核治療過(guò)程中第6個(gè)月末或療程結(jié)束后，痰結(jié)核菌培養(yǎng)檢查結(jié)果仍然為陽(yáng)性以及痰培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組；培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組58例，療程內(nèi)經(jīng)過(guò)周期性的痰檢，連續(xù)兩次痰培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰的患者。健康對(duì)照組為體檢中心篩查除外結(jié)核病史且體健的人員共計(jì)56人，男34人，女22人，年齡25～55歲。

1.2治療方案：按照診療規(guī)范中提出的標(biāo)準(zhǔn)治療方案進(jìn)行治療：包括吡嗪酰胺(Z)、左氧氟沙星(Lfx)、卡那霉素(Km)、對(duì)氨基水楊酸(PAS)、丙硫異煙胺(Pto)五種統(tǒng)一采購(gòu)的進(jìn)口的抗結(jié)核藥物。

1.3儀器：FACSCantoⅡ型流式細(xì)胞儀(FCM)

1.4試劑：①BD公司診斷試劑：標(biāo)記個(gè):MultiTEST CD3-異硫氰酸熒光素(fluorescein Isothiocyanate) FITC/CD8-藻紅蛋白(phycoerythrin，PE) /CD45-多甲藻素葉綠素蛋白(peridinin-chlorophyll-protein PerCP)/CD4-別藻藍(lán)蛋白(allophycocyanin，APC)，F(xiàn)ACS溶血?jiǎng)?，BD FACS七色校準(zhǔn)微球，以及相關(guān)配套質(zhì)控物，標(biāo)準(zhǔn)品。②BD CBA法人Thl、Th2、Th17試劑盒(BD CBA Human Thl、Th2、Thl7 Cytokinc Kit，BD Bioscicnccs，USA)。試劑盒主要包含IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ、IL-17A 捕獲微球各0.8 ml，人Thl、Th2、Th17藻紅蛋白檢測(cè)試劑1 ml，人Thl、Th2、Th17細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉)0.2 ml，熒光素的質(zhì)控液包括：異硫氰酸陽(yáng)性質(zhì)控品0.5 ml，藻紅蛋白的質(zhì)控品4 ml，專用洗液130 ml，試驗(yàn)稀釋液30 ml的CBA Flex Set檢測(cè)試劑盒，均為美國(guó)BD(Becton Dickinson)公司產(chǎn)品。

1.5方法：本研究對(duì)耐多藥結(jié)核患者淋巴細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞及細(xì)胞因子的檢測(cè)采用常規(guī)的流式細(xì)胞儀法流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞亞群的相對(duì)計(jì)數(shù)，采用流式微球分析法(Cytometric Bead Array CBA)對(duì)血清中細(xì)胞因子含量進(jìn)行測(cè)定，本質(zhì)是通過(guò)將不同亮度的微球作為載體，將熒光素標(biāo)記的針對(duì)同一待測(cè)抗原的抗體作為探針通過(guò)物理吸附等方法與抗體相結(jié)合特異性識(shí)別待測(cè)抗原，形成免疫復(fù)合物，最后通過(guò)流式細(xì)胞儀的激光對(duì)其進(jìn)行分類檢測(cè)，以獲得被固定的待測(cè)抗原的種類和數(shù)量信息[4]，是液相多重蛋白定量檢測(cè)方法，集微球、熒光、激光、流體學(xué)、數(shù)據(jù)分析一體，通過(guò)微球表面的熒光信號(hào)進(jìn)行定量分析。其技術(shù)原理為：CBA可以同時(shí)檢測(cè)多種蛋白組合，不同的微球?qū)ΨN抗體進(jìn)行化學(xué)編碼，將微球混合在同一系統(tǒng)內(nèi)再進(jìn)行多重復(fù)合測(cè)定。CBA法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 、 Western印跡、實(shí)時(shí)熒光定量PCR ( RT-PCR) 、Luminex液相懸浮芯片技術(shù)都能夠?qū)?xì)胞因子進(jìn)行定量檢測(cè)，但與其他檢測(cè)技術(shù)相比較分析，此類方法具有其獨(dú)有的特點(diǎn)[5]，占據(jù)絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，所用標(biāo)本量較少，且具有較高的靈敏度、較好的密封性，對(duì)于高度傳染性的患者標(biāo)本能有效降低交叉感染的幾率[6]，有很寬的檢測(cè)范圍和更好的重復(fù)性，檢測(cè)的過(guò)程可以做到6～7種細(xì)胞因子的同時(shí)段測(cè)量。

1.5.1標(biāo)本準(zhǔn)備：選取實(shí)驗(yàn)組用藥前以及正常對(duì)照組枸櫞酸鈉充分抗凝抽取的4 ml空腹靜脈血；根據(jù)藥敏試驗(yàn)和指南接受正規(guī)化療，通過(guò)制定表格形式統(tǒng)計(jì)總結(jié)其治療過(guò)程及轉(zhuǎn)歸情況，所有耐多藥結(jié)核患者組都分別在治療前及治療后2個(gè)月、 6個(gè)月取血檢測(cè)各組人群血清中上述細(xì)胞因子水平。樣品制備：各組均采集的空腹靜脈血4 ml，進(jìn)行離心(4 000 r/min)后，提取血清進(jìn)行分裝，置-80 ℃冰箱進(jìn)行備用，待標(biāo)本收集完成統(tǒng)一實(shí)驗(yàn)。

1.5.2檢測(cè)步驟

1.5.2.1流式細(xì)胞儀相對(duì)計(jì)數(shù)T細(xì)胞亞群：①提取100 μl全血加入到流式專用管；②各管移入10 μl熒光抗體試劑，避光30 min；③加入溶血?jiǎng)? ml，避光10 min；④上機(jī)檢測(cè)，為使其分辨率達(dá)到儀器的最佳實(shí)驗(yàn)狀態(tài)使用熒光微球7-colour進(jìn)行儀器光路的校準(zhǔn)；⑤采用Canto軟件獲取與分析數(shù)據(jù)；⑥調(diào)整儀器狀態(tài)，細(xì)胞在圖中合適的位置上；⑦在FSC/SSC上圈出淋巴細(xì)胞群為(RI)；⑧SSC/CD3上圈出CD3+T細(xì)胞群(R2)；⑨形成CD4/CD3，CD8/CD3散點(diǎn)圖并設(shè)置為顯示G3=Rl*R2的細(xì)胞；⑩一共需要獲取10 000個(gè)細(xì)胞，分析Th(CD3+CD4+)和Ts(CD3+CD8+)細(xì)胞的相對(duì)計(jì)數(shù)情況。

1.5.2.2CBA法檢測(cè)血清細(xì)胞因子：①準(zhǔn)備檢測(cè)試劑：將試劑盒及緩沖液取出后，置于室溫平衡1 h；②制備標(biāo)準(zhǔn)品：使用專用稀釋液把7種標(biāo)準(zhǔn)品按1∶2、1∶4、1∶8……梯度依次稀釋到1∶256后，充分混勻；③陰性對(duì)照為專用稀釋液；④將微球制成混懸液；⑤用微球稀釋液稀釋混合捕獲微球達(dá)50I/測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)，室溫15 min；⑥制備PE標(biāo)記的信號(hào)試劑；⑦實(shí)驗(yàn)組血清、7種標(biāo)準(zhǔn)品、捕獲微球各50 μl置于流氏管中，室溫避光1 h；⑧各加入50 μl的PE信號(hào)抗體，室溫避光2 h；⑨1 ml洗液置于試管內(nèi)，離心5 min，離心力為200 g，反復(fù)清洗2次，倒去上清液后，加入300ml專用洗液，4個(gè)小時(shí)內(nèi)進(jìn)行完成檢測(cè)。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：利用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件；Excel 2007建立所需數(shù)據(jù)庫(kù)；采用率(%)表示計(jì)數(shù)資料，用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1T細(xì)胞亞群的檢測(cè)結(jié)果：耐多藥結(jié)核患者用藥前T細(xì)胞亞群與正常對(duì)照組進(jìn)行比較分析，總T細(xì)胞及CD4+T細(xì)胞檢測(cè)兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，CD8+T細(xì)胞較對(duì)照組有所增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，CD4+/CD8+發(fā)生變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖1。

2.2Cell Quest軟件獲取點(diǎn)圖：血清中7種細(xì)胞因子(cytokine，CK)的 CBA法檢測(cè)用 Cell Quest軟件獲取每個(gè)樣本的點(diǎn)圖，依次為IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ、IL-17群微球陰性結(jié)果與IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ、IL-17陽(yáng)性結(jié)果的散點(diǎn)圖進(jìn)行比較。見(jiàn)圖2。

圖1 兩組T細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果比較分析

圖2 CBA檢測(cè)法顯示微球獲取的散點(diǎn)圖圖譜

2.3耐多藥結(jié)核組與對(duì)照組中細(xì)胞因子含量對(duì)比分析：耐多藥結(jié)核患者在用藥前檢測(cè)的結(jié)果與健康對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果比較IL-17、IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量存在顯著性差異均較正常對(duì)照組有所升高，IL-2結(jié)果間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，較正常對(duì)照組低。見(jiàn)表1。

細(xì)胞因子耐多藥(n=73)健康對(duì)照(n=56)χ2值P值IL-17344.7±89.00121.00±65.0018.33<0.001IL-6231.2±58.00200.00±54.003.11<0.01IL-2110.00±29.00120.00±23.402.106<0.05IL-102.08±0.681.98±0.730.8010.424IFN-γ2.40±0.670.56±0.673.394<0.001TNF-α7.06±2.015.02±2.0332.36<0.001IL-47.02±0.357.01±2.560.1650.869

2.4耐多藥患者中初治組、復(fù)治組用藥前細(xì)胞因子的變化規(guī)律：IL-17、IFN-γ初治組較復(fù)治組含量高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，IL-2、IL-4、IL-6復(fù)治組較初治組含量高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖3。

圖3 初治組、復(fù)治組細(xì)胞因子表達(dá)：*代表P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

2.5耐多藥患者中培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組用藥前、后細(xì)胞因子的變化規(guī)律：對(duì)于58例培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組IL-6、TNF-α、IL-17、IL-10、IFN-γ用藥周期內(nèi)呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)；IL-2呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，逐漸恢復(fù)到正常水平，IL-4用藥前后無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見(jiàn)圖4。

圖4 培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組中細(xì)胞因子周期性表達(dá)：*代表P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

2.6耐多藥患者中培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組用藥前、后細(xì)胞因子的變化規(guī)律：15例培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組中IL-17、IL-6、TNF-α、IL-4五種細(xì)胞因子在初治患者治療前后隨著療程的進(jìn)展呈現(xiàn)顯著性差異(P<0.05)，IL-2、IL-10、IFN-γ周期性治療過(guò)程中無(wú)顯著性差異(P>0.05)。見(jiàn)圖5。

圖5 培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組細(xì)胞因子周期性表達(dá)：*代表P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

3 討論

結(jié)核病的發(fā)病機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜，在免疫功能缺陷或低下人群中發(fā)病率相對(duì)較高[7]，耐多藥結(jié)核患者用藥前T細(xì)胞亞群與健康對(duì)照組進(jìn)行比較分析，總T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+檢測(cè)兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，CD8+T細(xì)胞較對(duì)照組有所增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說(shuō)明患者體內(nèi)免疫系統(tǒng)發(fā)生了變化。結(jié)核分枝桿菌感染人體后，體內(nèi)的免疫系統(tǒng)功能紊亂[8]，CD8+T細(xì)胞數(shù)量升高，可能是因?yàn)榻Y(jié)核菌引起機(jī)體內(nèi)限制性粘附細(xì)胞及抑制性T細(xì)胞出現(xiàn)的緣故，結(jié)核菌細(xì)胞壁內(nèi)物質(zhì)可以導(dǎo)致攜帶抗原的巨噬細(xì)胞與抗原特異性淋巴細(xì)胞相互作用，同時(shí)產(chǎn)生活性物質(zhì)使免疫調(diào)節(jié)機(jī)制中的抑制作用增強(qiáng)，對(duì)機(jī)體內(nèi)的免疫活性細(xì)胞產(chǎn)生直接抑制，從而使患者體內(nèi)的免疫細(xì)胞數(shù)量減少，因此總的T細(xì)胞較正常對(duì)照變化不大。在耐多藥結(jié)核患者發(fā)病后機(jī)體內(nèi)的免疫系統(tǒng)釋放大量的免疫細(xì)胞發(fā)揮免疫活性作用。免疫狀態(tài)發(fā)生變化，致使一部分T細(xì)胞激活同時(shí)釋放出細(xì)胞因子，刺激NK細(xì)胞的固有免疫體系形成，消除感染因子，未消除的部分進(jìn)入體內(nèi)引導(dǎo)產(chǎn)生特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答。體內(nèi)的細(xì)胞免疫及細(xì)胞因子的參與對(duì)耐多藥結(jié)核患者的病情變化及治療效果發(fā)揮著主要作用。

本文研究七種細(xì)胞因子在耐多藥結(jié)核患者體內(nèi)發(fā)生變化：耐多藥結(jié)核患者在用藥前檢測(cè)的結(jié)果與健康對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果比較IL-17、IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，均較正常對(duì)照組有所升高，IL-2結(jié)果間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，較正常對(duì)照組低。顯示機(jī)體感染耐多藥結(jié)核后啟動(dòng)了人體的免疫系統(tǒng)包括細(xì)胞和體液免疫兩種，造成免疫系統(tǒng)的功能紊亂釋放出大量的細(xì)胞因子參與到免疫調(diào)節(jié)，從而殺死結(jié)核菌。43例初治組與30例復(fù)治組治療前細(xì)胞因子的比較IL-17、IFN-γ，初治組較復(fù)治組含量高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，IL-2、IL-4、IL-6復(fù)治組較初治組含量高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。初治患者的主要發(fā)病原因是因?yàn)楹粑涝谌巳褐械膫鞑?，進(jìn)而感染，機(jī)體接觸到結(jié)核菌后激活效應(yīng)細(xì)胞啟動(dòng)免疫機(jī)制，釋放出大量的細(xì)胞因子，IL-17也隨著體內(nèi)致炎作用的逐漸減少，含量也隨之減少。IFN-γ增強(qiáng)輔助T的作用，對(duì)于機(jī)體殺滅病原菌具有一定的作用，對(duì)于初治患者來(lái)講，用藥前機(jī)體會(huì)釋放大量的IFN-γ，隨著診療活動(dòng)的開(kāi)展體內(nèi)的細(xì)菌含量逐漸減少，IFN-γ也逐漸減少。由于大部分患者身體抵抗力較弱所以發(fā)生的免疫反應(yīng)存在個(gè)體差異。對(duì)于30例耐多藥結(jié)核復(fù)治組，由于既往感染過(guò)結(jié)核菌，體內(nèi)記憶型T細(xì)胞迅速被激活釋放出大量與記憶性T細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子包括IL-2、IL-4等所以在用藥前較初治組呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，可能與機(jī)體內(nèi)的免疫防御機(jī)制也有一定關(guān)系。

耐藥性結(jié)核病的診治與人體所含細(xì)菌量的多少，機(jī)體免疫狀態(tài)等因素導(dǎo)致的免疫反應(yīng)強(qiáng)弱，體內(nèi)的免疫保護(hù)功能是否得到發(fā)揮有密切的關(guān)系。本文將實(shí)驗(yàn)組分成培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組和培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組，58例培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組IL-6、TNF-α、IL-17、IL-10、IFN-γ用藥周期內(nèi)呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)；IL-2呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，各項(xiàng)菌逐漸恢復(fù)到正常水平，IL-4用藥前后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。提示在進(jìn)行有效的治療后患者體內(nèi)的免疫細(xì)胞以及細(xì)胞因子免疫功能的恢復(fù)，IFN-γ變化隨結(jié)核菌量復(fù)制成正比，進(jìn)而起到免疫保護(hù)作用[9]。IL-17的逐漸減少說(shuō)明體內(nèi)的免疫監(jiān)視以及免疫調(diào)控作用已經(jīng)初步形成，配合藥物治療將體內(nèi)的結(jié)核菌消滅，最終治療成功。在培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組以及培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組中，細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子表現(xiàn)各不相同，在培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組IFN-γ周期性變化存在差異，免疫保護(hù)功能沒(méi)有完全建立，故含量隨治療周期的變化逐漸減少。TNF-α直接參與巨噬細(xì)胞抵抗結(jié)核分枝桿菌，隨機(jī)體內(nèi)痰液中結(jié)核桿菌的檢出量增加而升高，發(fā)揮免疫保護(hù)作用，但過(guò)度升高會(huì)加重肺結(jié)核，形成免疫損害，TNF-α在培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組中用藥前水平較高，用藥后2個(gè)月時(shí)略有下降，用藥6個(gè)月與用藥前下降幅度較大，可能與耐多藥結(jié)核發(fā)病機(jī)制以及耐多藥患者的用藥機(jī)理有關(guān)。IL-4、IL-6、IL-10主要介導(dǎo)的是體液免疫，協(xié)助B細(xì)胞激活生成抗體，具有清除寄生蟲(chóng)感染的作用[10]。15例培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組中IL-17、IL-6、TNF-α、IL-4在治療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，TNF-α用藥后開(kāi)始升高，IL-17、IL-6、IL-4用藥前較高2個(gè)月后降低，6個(gè)月后呈現(xiàn)升高趨勢(shì)；IL-2、IL-10、IFN-γ周期性治療過(guò)程中無(wú)顯著性差異，用藥后2～6個(gè)月細(xì)胞因子的變化較用藥前是相反趨勢(shì)的現(xiàn)象，提示有可能出現(xiàn)治療失敗，與機(jī)體內(nèi)菌量是否得到控制，機(jī)體免疫功能是否恢復(fù)具有相關(guān)性。從細(xì)胞因子的基本功能的角度理解，更加提醒人們細(xì)胞因子在抗結(jié)核免疫過(guò)程中的復(fù)雜性，體液免疫以及細(xì)胞免疫都有參與結(jié)核病發(fā)生發(fā)展過(guò)程[11]。結(jié)核分枝桿菌可以引起人體細(xì)胞免疫產(chǎn)生IL-17[12-17]促炎因子的作用[18]，大量免疫細(xì)胞因血清中存在大量的IL-17而延遲凋亡，會(huì)對(duì)人體造成非常大的危害，因?yàn)槠渥罱K引發(fā)機(jī)體發(fā)生免疫病理反應(yīng)，炎性反應(yīng)部位召集了大量的效應(yīng)細(xì)胞，進(jìn)而迅速聚集到一起，集中消滅結(jié)核分枝桿菌，但正常情況下是否能殺死體內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌可能還取決于機(jī)體免疫系統(tǒng)的狀態(tài)以及菌量的多少，上述情況均存在個(gè)體差異[19-21]。IL-17在耐多藥結(jié)核培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組與初治組發(fā)展趨勢(shì)較為一致，用藥前以及用藥后2個(gè)月、6個(gè)月數(shù)值持續(xù)下降恢復(fù)正常，治療有效，結(jié)核菌被消滅后逐漸減少。

耐多藥結(jié)核患者機(jī)體免疫細(xì)胞較紊亂，抑制性T細(xì)胞增加，且T細(xì)胞釋放出大量的細(xì)胞因子參與免疫調(diào)節(jié)及免疫病理反應(yīng)中。初治患者：患者臨床癥狀較重，免疫反應(yīng)性較強(qiáng)，所以隨病情變化的IL-17及IFN-γ含量較高；復(fù)治組：記憶型T細(xì)胞釋放大量細(xì)胞因子，以IL-2、IL-4變化為主含量較高；培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰組：IL-6、TNF-α、IL-17、IL-10、IFN-γ、IL-2各階段呈現(xiàn)規(guī)律性變化，且逐漸恢復(fù)到正常水平，視為治療有效，可持續(xù)原治療方案，說(shuō)明免疫系統(tǒng)逐漸恢復(fù)；培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰組：用藥前、用藥后2個(gè)月、6個(gè)月7種細(xì)胞因子均無(wú)出現(xiàn)規(guī)律性變化，用藥2個(gè)月、6個(gè)月較用藥前呈現(xiàn)相反的變化趨勢(shì)提示可能治療未成功，機(jī)體內(nèi)的結(jié)核菌仍未減少，免疫功能仍未徹底恢復(fù)。耐多藥結(jié)核患者用藥前與用藥后的免疫保護(hù)功能、免疫抑制功能、免疫記憶功能發(fā)生了很大的變化，依據(jù)變化的指標(biāo)對(duì)耐多藥患者的治療效果給予建議性評(píng)估。

綜上所述，結(jié)果提示對(duì)于耐多藥結(jié)核患者體內(nèi)的輔助性T細(xì)胞以及抑制性T細(xì)胞較正常對(duì)照組有所增高并且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)又對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行了重新分組，依據(jù)T細(xì)胞相對(duì)值的變化規(guī)律了解患者體內(nèi)的免疫功能狀況，通過(guò)細(xì)胞因子在不同分組不同周期變化的情況可以初步推斷出患者經(jīng)過(guò)用藥是否有效，而及時(shí)做出治療方案的調(diào)整，同時(shí)使用免疫抑制劑治療耐多藥結(jié)核病提供指導(dǎo)意見(jiàn)。

確診耐多藥結(jié)核病后進(jìn)行抗結(jié)核治療過(guò)程中體內(nèi)發(fā)生的細(xì)胞免疫以及體液免疫依據(jù)T細(xì)胞變化規(guī)律初步推測(cè)患者免疫功能狀態(tài)，及時(shí)做出治療方案的調(diào)整。依據(jù)機(jī)體內(nèi)細(xì)胞因子變化的規(guī)律了解初治、復(fù)治、培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰患者、培養(yǎng)未轉(zhuǎn)陰患者體內(nèi)免疫反應(yīng)的狀況、免疫保護(hù)功能恢復(fù)情況、細(xì)胞因子周期性表達(dá)進(jìn)行評(píng)估，從而協(xié)助臨床醫(yī)生對(duì)臨床用藥是否有效性的預(yù)判及治療效果的評(píng)估參考依據(jù)，以及該病種進(jìn)行基因免疫制劑治療開(kāi)拓了新的思路和方向。