關(guān)于紅霉素藥物殘留檢測(cè)的研究概況

張曉云，李培鋒*，孫華，毛偉，白玉廷，何秀玲

1. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院（呼和浩特 010018）；2. 農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疾病臨床診療技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（呼和浩特 010018）

紅霉素因其具有較高的抗革蘭氏陽性菌活性作用和低毒性的特點(diǎn)，成為在此類化合物中首個(gè)廣泛應(yīng)用在臨床上的藥物，和其他大環(huán)內(nèi)酯類抗生素相比較有性質(zhì)相似或更強(qiáng)的抗菌活性[1-2]。紅霉素在最開始是作為青霉素的替代品在臨床獸藥應(yīng)用方面應(yīng)用廣泛，目前紅霉素已被廣泛應(yīng)用于畜禽細(xì)菌性和革蘭氏陽性菌感染的化學(xué)治療，特別是在低劑量下紅霉素有良好的促生長(zhǎng)作用，亦成為重要的飼料添加劑來提高飼料轉(zhuǎn)換率。雖然紅霉素有良好的藥理作用，但長(zhǎng)期代謝不良會(huì)淤積一定濃度在身體內(nèi)，藥物殘留問題則對(duì)機(jī)體產(chǎn)生一些副作用，主要危害是引起人體的內(nèi)分泌紊亂、水電解質(zhì)及糖代謝異常、性早熟、致癌、致畸；紅霉素酯化物易發(fā)生，發(fā)生率高達(dá)40%，肝功能不良者禁用。同時(shí)可引起人體的過敏反應(yīng)，導(dǎo)致人體的正常菌群失調(diào)，使致病菌產(chǎn)生耐藥性，誘發(fā)癌癥等。此外它會(huì)影響人體正常的激素水平，并使兒童異性化傾向、腫瘤等，使人出現(xiàn)諸多不適癥狀。

1 紅霉素殘留檢測(cè)情況的研究進(jìn)展

目前國(guó)內(nèi)外主要的檢測(cè)紅霉素的方法和技術(shù)包括：（一）能夠同時(shí)進(jìn)行分離、分析，具有高效分離技術(shù)和高檢測(cè)靈敏度，對(duì)紅霉素殘留情況進(jìn)行定性、定量分析的理化分析法，如（1）高效液相色譜法（HPLC），根據(jù)檢測(cè)器的不同又分為液相色譜-紫外法（LC-UV）、液相色譜-熒光法（LC-FLD）、液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法（LC-ELSD）、液相色譜-電化學(xué)法（HPLC-ECD）、液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法（LC-DAD）、液相色譜-噴霧法（LCCAD）；（2）氣/質(zhì)聯(lián)用法（GC-MS）；（3）液/質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS、LC-MS/MS）；（4）薄層色譜法（TLC）；（5）分子印跡固相萃取-高效液相色譜法（MISPE-HPLC）；（二）免疫分析法，如酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）、熒光微球免疫層析法（FMCA）、膠體金免疫層析法（IGCA）；（三）生物測(cè)定法，主要有微生物檢測(cè)法等[3]。

1.1 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法因其具有分離速度快、檢測(cè)靈敏度高、自動(dòng)化程度高等眾多優(yōu)點(diǎn)，成為至今廣為使用的一種理化檢測(cè)方法，它能做到精確定性及定量檢測(cè)食品中的有毒及有害殘留物。因紅霉素僅在210 nm處呈現(xiàn)一定的紫外線（Ultravioletray，UV）吸收，許多內(nèi)源性雜質(zhì)會(huì)在210 nm處產(chǎn)生強(qiáng)烈干擾，所以通常情況下不采用紫外檢測(cè)器，大量的文獻(xiàn)表明測(cè)定紅霉素殘留大多選用HPLC-ECD（電化學(xué)檢測(cè)器）或柱前衍生化HPLC-FLD（熒光檢測(cè)器）。于慧娟等[4]建立了高效液相色譜-熒光法對(duì)蝦組織中紅霉素殘留量的檢測(cè)，檢出限為150 μg/kg，回收率≥75%?；菔|華等[5]建立了以高效液相色譜法測(cè)定羅非魚中紅霉素殘留量的方法，提出了以乙腈為提取劑，經(jīng)過液-液萃取、固相萃取、反萃取等步驟對(duì)樣品進(jìn)行分離凈化的樣品處理方法，方法檢出限為400 μg/kg。Edder等[6]采用HPLC-FLD測(cè)定肉、魚、肝、腎、蛋和奶中紅霉素的定量分析，采用羅紅霉素為內(nèi)標(biāo)，該方法在5～50 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.2 氣質(zhì)聯(lián)用法（GC-MS）

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)法實(shí)現(xiàn)了高效層析分離和檢測(cè)聯(lián)機(jī)，可用微電腦控制層析條件、程序和數(shù)據(jù)處理，其特異性、靈敏度和重復(fù)性均較好，可以一次性地完成同一物質(zhì)中多類藥物及其代謝物的檢測(cè)。因大環(huán)內(nèi)酯類藥物的特性，如分子量大，且有多數(shù)的極性基團(tuán)，導(dǎo)致其不可直接采用氣相色譜檢測(cè)，通常需要進(jìn)行復(fù)雜的衍生化過程才可以進(jìn)行GC-MS分析。Takatsuki等[7]建立了GC-MS法檢測(cè)組織中紅霉素殘留的方法。前處理過程為：用甲醇提取肌肉樣品，LLE后再經(jīng)硅膠固相萃取柱凈化，其目的是去除干擾性雜質(zhì)，在鉑催化下加氫，后中性糖鏈在HCl的作用下水解脫去，最終水解產(chǎn)物生成醋酸酯，其目的是為了用來提高檢測(cè)的靈敏度。近幾年，國(guó)外考古學(xué)家考古出土的有機(jī)殘留物、有機(jī)膠料、有機(jī)涂層等的分析報(bào)道[8]，這些物質(zhì)的檢測(cè)應(yīng)用最多的當(dāng)屬氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS），該技術(shù)對(duì)文物、有機(jī)物的分析檢測(cè)涉及的也較為全面。目前我國(guó)關(guān)于文物有機(jī)物的分析測(cè)定在氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)方面的報(bào)道很少出現(xiàn)。它可實(shí)現(xiàn)復(fù)雜文物體系中有機(jī)物的定性及定量測(cè)定。分析過程中取樣量極少，檢出限可達(dá)ng級(jí)別，在很大程度上避免了對(duì)文物的損壞，在文物有機(jī)分析中的地位不可撼動(dòng)。氣相色譜-質(zhì)譜雖然優(yōu)點(diǎn)頗多，但相對(duì)于大環(huán)內(nèi)酯類藥物的性質(zhì)而言，對(duì)其樣品前處理以及檢測(cè)過程都尤為繁瑣（包括一系列衍生化過程）。因此，檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性取決于選取怎樣高效的樣品前處理方法及色譜分離條件。對(duì)于分析物的要求：（1）良好的熱穩(wěn)定性和揮發(fā)性，一般在250 ℃下可以氣化；（2）不含無機(jī)鹽、酸等對(duì)色譜固定相產(chǎn)生破壞或影響分析準(zhǔn)確性的無機(jī)物。此外，使用通用型的氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）時(shí)，檢測(cè)器無法辨認(rèn)流出的組分，對(duì)復(fù)雜樣品中的共流出峰缺乏指認(rèn)和定量的手段。

1.3 液質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS、LC-MS/MS）

因組織、水產(chǎn)品等樣品中存在許多干擾性物質(zhì)，高效液相色譜檢測(cè)樣品中紅霉素的含量具有一定的局限性。而采用液質(zhì)聯(lián)用法，可以分析GC-MS所不能分析的強(qiáng)極性、難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定的化合物。其優(yōu)點(diǎn)為：（1）應(yīng)用廣泛，對(duì)大部分的化合物幾乎都適用，在很大程度上解決了分析熱不穩(wěn)定化合物的難題；（2）分離能力強(qiáng)，對(duì)于在色譜上沒有完全分離開的化合物，只要通過MS的特征離子質(zhì)量色譜圖就可以區(qū)分各自的色譜圖來進(jìn)行定性定量；（3）定性分析結(jié)果可靠，可明確每一個(gè)組分的分子量和分子的結(jié)構(gòu)信息；（4）檢測(cè)限低，MS具備高靈敏度，即使在較低濃度的情況下也能夠?qū)悠愤M(jìn)行很好的定性定量確認(rèn)檢測(cè)；（5）分析時(shí)間快，使用的液相色譜柱為窄徑柱，大大減少了檢測(cè)時(shí)間，提高了分離效果；（6）自動(dòng)化程度高，LC-MS/MS具有高度的自動(dòng)化。

因液質(zhì)聯(lián)用法的高靈敏度和高選擇性，對(duì)于大環(huán)內(nèi)酯類這樣的高分子藥物采用LC-MS法確證是較為理想的方法，Masakazu Horie等[9]采用LC-ESI-MS法測(cè)定肉類中的8種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留。Delepine等[10]研究了采用PB/LC/MS方法檢測(cè)牛肌肉中5種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的方法，其中采用梯度洗脫的反相液相色譜-MS檢測(cè)法證明在牛肌肉中有紅霉素、螺旋霉素、泰樂霉素、替米考星和交沙霉素的殘留。

近年來LC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)日趨成熟，該法比LC-MS定性更可靠，定量更靈敏準(zhǔn)確。Dubois等[11]采用LC-MS/MS法測(cè)定動(dòng)物組織、牛奶和雞蛋中的5種大環(huán)內(nèi)酯類殘留，其回收率達(dá)到80%～110%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2%～13%。于慧娟等[12]建立了高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中紅霉素殘留量的方法，以紅霉素同位素標(biāo)記物為內(nèi)標(biāo)，檢出限達(dá)1.0 μg/kg。張曉燕等[13]建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蜂王漿中紅霉素及其代謝物。于慧娟等[14]建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中紅霉素的殘留，包括魚、蝦、蟹、甲魚等水產(chǎn)品。周玲等[15]建立了高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)巢脾中紅霉素的殘留，包括蜜蜂及蜂產(chǎn)品；林維宣等[16]采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)關(guān)于牛乳中多肽類抗生素的殘留量。

1.4 薄層色譜法（TLC）

薄層色譜法主要應(yīng)用于難揮發(fā)或高溫下易變化而不適用于氣相色譜的物質(zhì)。它具有分離速度快、選擇性好、顯色容易的優(yōu)點(diǎn)，不僅適用于微量樣品（0.01 μg）的定性分析，也用于大量樣品（大于500 mg）制備。按涂布薄層固定相的性質(zhì)可分為吸附薄層色譜、表面分配薄層色譜、離子交換薄層色譜和薄層電泳等。對(duì)于紅霉素來說，茴香醛-硫酸試劑遇紅霉素初期顯藍(lán)紫色，反應(yīng)1 h后紅霉素呈現(xiàn)橄欖綠色。韓南銀等[17]建立了薄層色譜法檢測(cè)蜂蜜中紅霉素的殘留，利用固相萃取原理對(duì)蜂蜜中紅霉素進(jìn)行提取，其檢測(cè)限量達(dá)到5 mg/kg。因蜂蜜組成成分復(fù)雜，前處理比較麻煩，故采用薄層色譜法檢測(cè)可以排除許多干擾因素，取得良好的檢測(cè)結(jié)果。但缺點(diǎn)也較明顯：①對(duì)于復(fù)雜化合物的識(shí)別能力不足，分離效果差，不能進(jìn)行準(zhǔn)確定量；②影響因素較多；③每一類藥物都包括幾種或十幾種化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)非常相似的化合物，因藥物含量甚微，對(duì)生物高分子的分離效果不甚理想，不如采用GC/MS和HPLC或LC-MS/MS靈敏；④對(duì)于紅霉素來說達(dá)不到農(nóng)業(yè)部規(guī)定的檢測(cè)要求。

1.5 微生物檢測(cè)法

微生物效價(jià)法是經(jīng)典的抗生素含量測(cè)定法。王敏等[18]應(yīng)用微生物生長(zhǎng)抑制原理，通過Bacillus stearothermophilus（嗜熱脂肪芽胞桿菌）細(xì)菌的生長(zhǎng)與否，對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留進(jìn)行定性檢測(cè)；Markakis等[19]于1996年利用微生物法定量檢測(cè)了動(dòng)物飼料中紅霉素的含量；一方面根據(jù)微生物自身特點(diǎn)的局限性，另一方面不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)出來的菌種、產(chǎn)品的組成組分也大不相同，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果有明顯的差別，故用該方法很難達(dá)到準(zhǔn)確的定性定量分析的目的。這種方法在分析時(shí)間、分析成本、對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的分離和確認(rèn)能力、方法的定量能力上都有著明顯的不足，特別是在畜產(chǎn)品和食品中藥物的殘留分析領(lǐng)域中發(fā)揮的作用不大，因此主要用于大批樣本中抗微生物藥殘留的快速篩選。隨著抗生素類藥物的發(fā)展和分析方法的進(jìn)步，理化方法逐漸取代了生物學(xué)法。

1.6 酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）

酶聯(lián)免疫分析法是基于抗原和抗體特異性反應(yīng)而建立的，該方法有兩個(gè)特點(diǎn)：一是抗原抗體免疫反應(yīng)在固體表面進(jìn)行，二是用酶作為標(biāo)記物進(jìn)行蛋白質(zhì)測(cè)定。其中酶反應(yīng)的催化效應(yīng)起到放大反應(yīng)效果的作用，從而提高ELISA檢測(cè)技術(shù)的靈敏度。酶聯(lián)免疫分析法已較多地應(yīng)用于動(dòng)物源性食品中各類抗生素殘留的定性和定量測(cè)定，在水產(chǎn)品抗生素殘留檢測(cè)領(lǐng)域也有所應(yīng)用。

崔廷婷等[20]建立了酶聯(lián)免疫分析法測(cè)定豬肉、豬肝、牛肉、魚肉、蝦肉、蜂蜜和牛奶中紅霉素的方法，其檢測(cè)限分別為4.13，8.23，0.78，3.75，7.94，3.09和1.87 μg/L，樣品添加回收率范圍為69.0%～107.5%，批內(nèi)變異系數(shù)為5.7%～11.4%，批間變異系數(shù)為8.7%～14.0%；與硫氰酸紅霉素的交叉反應(yīng)率為114%，與琥乙紅霉素的交叉反應(yīng)率為67.4%，與其他藥物的交叉反應(yīng)率均小于0.1%。Albrecht等[21-22]建立了牛奶中檢測(cè)紅霉素的ELISA方法。該方法中紅霉素的LOD為10 ng/kg。韓青等[23]建立了牛奶中ERY的icELISA，檢測(cè)限為0.3 μg/L。

1.7 分子印跡固相萃取-高效液相色譜法（MISPEHPLC）

分子印跡技術(shù)，又稱分子烙印技術(shù)，是將模板分子（印跡分子、目標(biāo)分子）與交聯(lián)劑在聚合物單體溶液中進(jìn)行聚合得到固體介質(zhì)，然后通過物理或化學(xué)方法洗脫除去介質(zhì)中的模板分子，得到“印跡”有目標(biāo)分子空間結(jié)構(gòu)和結(jié)合位點(diǎn)的分子印跡聚合物（MIPS）。它具有三方面的特點(diǎn)：①預(yù)定性，可以根據(jù)不同的目的制備出不同的分子印跡聚合物，以滿足不同的需要；②識(shí)別性，分子印跡聚合物是根據(jù)模板分子定做的，可專一地識(shí)別印跡分子；③實(shí)用性，可以與天然的生物分子識(shí)別系統(tǒng)如酶與底物、抗體與抗原相比擬，但由于它是由化學(xué)合成的方法制備的，因此又有抗惡劣環(huán)境的能力?；谶@些特點(diǎn)，目前該方法已在如下方面得到了應(yīng)用：色譜分析、固相萃取、仿生傳感器和模擬酶催化。宋彬等[24]建立了一種分子印跡固相萃取-高效液相色譜測(cè)定豬肉中紅霉素的方法，其殘留檢出限（S/N=3）為0.2 mg/kg。豬肉樣品中不同添加水平下紅霉素的加標(biāo)回收率為95.2%～104.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于5%。胡琪等[25]采用沉淀聚合法制備紅霉素分子印跡聚合物，考察了不同分散相對(duì)分子印跡聚合物制備及其對(duì)吸附性能的影響，并通過Scatchard模型進(jìn)一步評(píng)價(jià)了聚合物的吸附特性，探究了紅霉素分子印跡聚合物在其結(jié)構(gòu)類似物及實(shí)際食品樣品中常見抗生素的吸附特異性，并對(duì)牛奶和雞蛋樣品進(jìn)行了加標(biāo)回收試驗(yàn)。實(shí)際樣品中的平均回收率為82.99%～98.09%。

1.8 熒光微球免疫層析法（FMCA）

FMCA的原理是基于抗原抗體特異性免疫反應(yīng)的新型膜檢測(cè)技術(shù)。該技術(shù)以固定有檢測(cè)限（包被抗體或包被抗原）和質(zhì)控線（抗抗體）的條狀纖維層析材料為固定相，測(cè)試液為流動(dòng)相，熒光標(biāo)記抗體或抗原固定于連接墊，通過毛細(xì)管作用使待分析物在層析條上移動(dòng)。熒光微球FMs，它是一種新型的載體材料，主要是有機(jī)或無機(jī)聚合物材料，內(nèi)部含有熒光物質(zhì)，外部能量刺激后會(huì)發(fā)出熒光，作為特殊功能微球，形態(tài)穩(wěn)定，粒徑均勻。它作為一種抗體標(biāo)記示蹤物，通過與抗體偶聯(lián)，比較試紙條熒光顯色強(qiáng)度、跑樣背景，微球標(biāo)記抗體釋放情況及檢測(cè)靈敏度，來選擇最佳顏色特征的微球。對(duì)于只具有單一抗原表位的小分子抗原紅霉素來說，待測(cè)小分子抗原與熒光標(biāo)記抗體結(jié)合后，由于空間位阻作用難以再與檢測(cè)線上的包被抗體結(jié)合。所以，紅霉素多采用競(jìng)爭(zhēng)免疫層析法檢測(cè)。Li等[26]報(bào)道了紅霉素的熒光微球免疫層析（FMCA）測(cè)定法，選擇與紅霉素結(jié)構(gòu)相關(guān)的Abs為抗ERY單克隆抗體（mAb），抗原（Ag）為ERY-BSA，采用競(jìng)爭(zhēng)免疫層析法檢測(cè)。結(jié)果表明，紅霉素在原料奶中的檢出限（LOD）為0.13 ng/mL，回收率為91.8%～109.2%，變異系數(shù)（CV）為5.4%；李向梅[27]建立了可同時(shí)檢測(cè)牛奶中紅霉素的多殘留熒光微球定性和定量免疫層析方法。該方法牛奶中紅霉素的cutoff值為2.5 μg/L。牛奶樣本簡(jiǎn)單稀釋，同步檢測(cè)紅霉素的時(shí)間在20 min以內(nèi)。通過熒光信號(hào)讀數(shù)儀分析，該方法對(duì)牛奶中紅霉素的檢測(cè)限為0.13 μg/L。紅霉素在1.25～5 μ g/L的添加水平下回收率為91.8%～109.2%，變異系數(shù)為5.4%～11.3%。但熒光微球合成的技術(shù)難度相對(duì)較大，目前國(guó)內(nèi)制備的熒光微球存在粒徑不均一等現(xiàn)象，主要以進(jìn)口為主，價(jià)格相對(duì)昂貴，熒光微球免疫試紙條在光照射、溫度、碰撞、濕度大等外界條件下容易發(fā)生熒光淬滅現(xiàn)象。且受基質(zhì)干擾影響較大。

1.9 膠體金免疫層析法（GICA）

GICA的原理是結(jié)合了膠體金技術(shù)和免層析技術(shù)發(fā)展而來的，其本質(zhì)是一種固相反應(yīng)的ELISA，并用膠體金來代替底物顯色。是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物，利用抗原抗體在固相載體反應(yīng)的新型免疫標(biāo)記技術(shù)。實(shí)際上是蛋白等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機(jī)理目前還未定論，一般認(rèn)為是金顆粒表面的負(fù)電荷和蛋白質(zhì)的正電荷靜電吸附，從而形成牢固的結(jié)合。其優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)方法簡(jiǎn)單而快速，數(shù)分鐘即可得出結(jié)果；不需要儀器設(shè)備，操作人員不需要特殊訓(xùn)練；試劑穩(wěn)定，適用于單份測(cè)定；無污染；單一試劑，一步操作，小型實(shí)驗(yàn)室即有條件開發(fā)生產(chǎn)，干燥包裝的試劑可在室溫保存一年以上。有研究報(bào)道[27]膠體金試紙條檢測(cè)牛奶中紅霉素的cut-off值為5 μg/L，檢測(cè)在10 min內(nèi)完成。是一種定性或半定量的檢測(cè)方法，用于不需要精確定量檢測(cè)，但需快速得出檢測(cè)結(jié)果的分析。

免疫分析技術(shù)與常規(guī)的理化分析技術(shù)對(duì)比而言最大的優(yōu)點(diǎn)在于易操作、分析速度快、檢測(cè)成本低。以微量滴定板的ELISA例子中看出，免疫測(cè)定法以取樣量小，前處理簡(jiǎn)單，容量大，儀器化程度低，分析效率是HPLC或GC的幾十倍以上。免疫測(cè)定法的缺點(diǎn)在于確定待測(cè)物組成或結(jié)構(gòu)方面的信息太少（僅為吸收度或計(jì)數(shù)），一般不具備多殘留分析能力；因其分析過程繁瑣，試驗(yàn)操作過程中影響結(jié)果的因素太多，將其作為標(biāo)準(zhǔn)化方法難以實(shí)現(xiàn)；且研究試驗(yàn)方法周期長(zhǎng)，某些待測(cè)物的半抗原合成成本過高。故只能作為其重要補(bǔ)充。

1.10 固相微萃取SPME

固相微萃?。⊿olid Phase Micro-extraction，SPME）是一種適用于氣體和液體樣品的新穎的樣品前處理技術(shù)。主要包括兩個(gè)過程：（1）將涂有固定相的萃取頭插入樣品中，待測(cè)物將在固定相涂層與樣品中進(jìn)行分配直至平衡；（2）將萃取頭插入分析儀器的注射口，當(dāng)待測(cè)物脫附以后，可進(jìn)行分離和定量檢測(cè)。巧妙地將待測(cè)物的萃取、脫附、進(jìn)樣結(jié)合在了一起。而頂空固相微萃取是SPME分析方法中最推薦的一種方法，其中固相微萃取的裝置類似于注射器，在萃取頭部分有MCM-41復(fù)合介孔分子篩作為固相微萃取涂層，微萃取涂層是SPME的主要部分，在多相平衡的基礎(chǔ)上，依據(jù)分析物在萃取頭上與試樣之間的分配平衡而實(shí)現(xiàn)待測(cè)物的檢測(cè)。但由于其萃取涂層容易磨損，導(dǎo)致萃取涂層的使用壽命有限。SPME發(fā)展至今，已被廣泛應(yīng)用到環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品檢驗(yàn)等領(lǐng)域。徐娜[28]研究了一種固相微萃取檢測(cè)污水處理廠中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的殘留方法，其中包括紅霉素、阿奇霉素、羅紅霉素、克拉霉素等。其中紅霉素的方法檢出限是0.8～3.2 ng/L，回收率為99.1%～112.4%。

由于紅霉素僅在210 nm呈現(xiàn)紫外吸收，故紫外檢測(cè)器不能滿足殘留檢測(cè)要求，常采用熒光檢測(cè)器對(duì)其進(jìn)行含量檢測(cè)，需經(jīng)過柱前衍生，因FMOC-CL同羥基反應(yīng)生成熒光酯，因而具有熒光性。紅霉素的衍生就是利用分子中的羥基同F(xiàn)MOC-CL反應(yīng)生成熒光衍生物的性質(zhì)來實(shí)現(xiàn)的，目前采用HPLC存在的問題是：①在有樣品基質(zhì)的情況下目標(biāo)峰有干擾峰的出現(xiàn)，衍生產(chǎn)物和副產(chǎn)物分不開，響應(yīng)值整體偏低；②衍生產(chǎn)物存在時(shí)間太短，12 h后就會(huì)分解，樣品基質(zhì)對(duì)衍生的影響較大，目標(biāo)峰峰形較差；樣品前處理一般包括提取、凈化、濃縮、衍生四部分，前處理步驟越復(fù)雜，其干擾因素就越多，衍生產(chǎn)物就越不穩(wěn)定，產(chǎn)生的誤差就越大，導(dǎo)致靈敏度降低，回收率低。

熒光微球免疫層析法和膠體金免疫層析法中熒光微球的合成、膠體金的制備難度較大，紅霉素藥物抗原抗體的制備過程較難，且定量不準(zhǔn)確。

2 結(jié)語

動(dòng)物性組織中藥物殘留問題引發(fā)的嚴(yán)重后果已向人類敲響了警鐘。大規(guī)模發(fā)展生態(tài)農(nóng)業(yè)、生產(chǎn)綠色食品（肉、蛋、奶、魚、蝦）是我國(guó)畜牧業(yè)發(fā)展的最終目標(biāo)。人們之所以對(duì)藥物殘留問題如此關(guān)注，歸根結(jié)底是我國(guó)對(duì)動(dòng)物源性食品藥物常規(guī)檢測(cè)認(rèn)識(shí)的匱乏、許多生產(chǎn)者不重視藥物殘留問題且不了解應(yīng)如何控制藥物殘留。動(dòng)物性食品的安全關(guān)系到獸藥生產(chǎn)者、廣大消費(fèi)者、畜牧部門、畜禽飼養(yǎng)者及農(nóng)業(yè)等，其中獸藥生產(chǎn)者和畜禽飼養(yǎng)者是最重要的，他們只要能從思想根源處認(rèn)識(shí)到獸藥殘留帶來的危害，能夠安全生產(chǎn)動(dòng)物性食品，合理用藥，選用合適的劑量療程，合理的輪換用藥，從根源上拒絕藥物殘留，這樣我們才能吃到最安全的食品，才能有效控制或避免獸藥殘留對(duì)人類健康的影響。隨著經(jīng)濟(jì)飛速發(fā)展、人民生活水平的不斷提高，對(duì)動(dòng)物性食品的需求量也在不斷增加，動(dòng)物性食品獸藥殘留問題也逐漸成為全社會(huì)廣泛認(rèn)同的公共衛(wèi)生問題。獸藥殘留問題的危害不言而喻，對(duì)于人類身體康健、養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展乃至最終步入國(guó)際市場(chǎng)的影響都是及其嚴(yán)重的。故應(yīng)加強(qiáng)獸藥監(jiān)管方面的工作力度，將用藥規(guī)范做到最合理化，將藥物殘留對(duì)人的危害降到最低，避免我國(guó)在國(guó)際市場(chǎng)的競(jìng)爭(zhēng)力受到影響。