羊泰勒蟲病的研究進(jìn)展

郝桂英 (西昌學(xué)院 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,四川 西昌615013)

羊泰勒蟲病(caprine and ovine theileriosis)是由頂復(fù)門(Apicomplexa)、梨形蟲綱(Piroplasmea)、梨 形 蟲 目(Piroplasmida)、泰 勒 科(Theileriidae)、泰勒屬(Theileria)的原蟲寄生于山羊和綿羊巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和紅細(xì)胞內(nèi)所引起的一種重要的由蜱傳播的血液原蟲病[1]。該病常發(fā)生于熱帶、亞熱帶地區(qū),在歐洲、中東、北非、南非、亞洲均有報(bào)道。以高熱、貧血、消瘦、淋巴結(jié)腫大為主要特征,可引起羔羊和外地引進(jìn)羊大量死亡,使慢性發(fā)病的山羊和綿羊發(fā)育遲緩,產(chǎn)肉量和產(chǎn)毛量顯著下降,給養(yǎng)羊業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,嚴(yán)重制約養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展[2]?，F(xiàn)就羊泰勒蟲病的病原種類、流行概況、臨診表現(xiàn)、診斷、防制等方面的研究進(jìn)展加以概述,旨在為有效控制羊泰勒蟲病提供參考依據(jù)。

1 病原形態(tài)和種類

國(guó)內(nèi)外已報(bào)道的可感染山羊和綿羊的泰勒蟲種類有呂氏泰勒蟲、尤氏泰勒蟲、綿羊泰勒蟲、萊氏泰勒蟲、隱藏泰勒蟲、分離泰勒蟲、馬泰勒蟲、環(huán)形泰勒蟲、東方泰勒蟲9個(gè)種和Theileirasp.B15a、Theileriasp.OT1、Theileriasp.OT3 及Theileriasp.MK 等4個(gè)基因型[3-4],但公認(rèn)的羊泰勒蟲僅有前6種。其中呂氏泰勒蟲、尤氏泰勒蟲和萊氏泰勒蟲致病力較強(qiáng),被稱為惡性泰勒蟲；綿羊泰勒蟲、隱藏泰勒蟲、分離泰勒蟲、Theileriasp.OT3、Theileriasp.MK 致病性力弱或無(wú)致病力,被稱為溫和型泰勒蟲[2,5]。在我國(guó)已報(bào)道的羊泰勒蟲有呂氏泰勒蟲、尤氏泰勒蟲、綿羊泰勒蟲和Theileriasp.OT3,其中呂氏泰勒蟲是優(yōu)勢(shì)蟲種[6]。

呂氏泰勒蟲和尤氏泰勒蟲是我國(guó)羊泰勒蟲病的主要病原,兩者形態(tài)非常相似,在紅細(xì)胞中的形態(tài)包括梨籽形、針狀、桿狀、圓形、橢圓形、三葉草形、十字架形等,其中梨籽形和針狀是呂氏泰勒蟲的優(yōu)勢(shì)形態(tài),十字架形是尤氏泰勒蟲的特征性形態(tài)[7]。在我國(guó)西北地區(qū)兩者多呈混合感染[8],但在我國(guó)中部、東南部、西南部?jī)H存在呂氏泰勒蟲[9-10]。有學(xué)者報(bào)道呂氏泰勒蟲可感染山羊、綿羊、黃羊、黃牛、牦牛、狍、梅花鹿、馬鹿、蒙古瞪羚和刺猬等[11],因此,其分布范圍可能更廣。

綿羊泰勒蟲主要分布在非洲、中東、西亞,我國(guó)僅新疆和內(nèi)蒙古有報(bào)道[12],蟲體形態(tài)與萊氏泰勒蟲相似,主要區(qū)別是綿羊泰勒蟲不能觀察到柯赫氏體。

萊氏泰勒蟲主要分布在歐洲東南部、北非、中東等,蟲體小且形態(tài)多樣,寄生于細(xì)胞中央。在外周血液涂片中,能觀察到呈圓形或橢圓形的柯赫氏體,體積較整個(gè)紅細(xì)胞大,含有大量大小不均的核顆粒[13]。

隱藏泰勒蟲主要分布于歐洲西北部,在紅細(xì)胞中以環(huán)形和桿狀為主[14]；分離泰勒蟲是感染羊的唯一一種具有膜狀結(jié)構(gòu)的泰勒蟲,呈細(xì)桿狀、橢圓形、圓形、十字架形等[15]。

Theileriasp.OT3在我國(guó)陜西[4]、新疆[16]已有報(bào)道,但形態(tài)尚未見有報(bào)道。

2 流行概況

羊泰勒蟲病主要發(fā)生在熱帶、亞熱帶地區(qū),具有明顯的地區(qū)性和季節(jié)性。在我國(guó),3～7月份多發(fā),4～5月份是流行高峰[2],9～10月份也是流行小高峰。該病的傳播和流行與當(dāng)?shù)氐臍夂?、生態(tài)環(huán)境、媒介蜱的種類和分布及羊品種、年齡、管理、寄生蟲病的防控措施等因素密切相關(guān)。一般情況下,綿羊發(fā)病率比山羊高,羔羊發(fā)病率比成年羊高[17]。

不同梨形蟲由不同媒介蜱傳播。在我國(guó),呂氏泰勒蟲和尤氏泰勒蟲的傳播媒介是青海血蜱和長(zhǎng)角血蜱[8]。綿羊泰勒蟲的傳播媒介為囊形扇頭蜱、外翻扇頭蜱、圖蘭扇頭蜱、全溝血蜱、森林革蜱,我國(guó)的傳播媒介為小亞璃眼蜱[12]。Theileriasp.OT3 的傳播媒介為刻點(diǎn)血蜱、殘緣璃眼蜱和血紅扇頭蜱。萊氏泰勒蟲的主要媒介是小亞璃眼蜱,但璃眼蜱屬的其他蜱類和扇頭蜱屬也可以傳播；隱藏泰勒蟲的主要媒介是刻點(diǎn)血蜱,但邊緣革蜱、森林革蜱也可以傳播[14]；分離泰勒蟲的主要傳播媒介是外翻扇頭蜱[15]。另外,有學(xué)者在虱蠅體內(nèi)檢測(cè)到綿羊泰勒蟲和呂氏泰勒蟲,推測(cè)虱蠅可能傳播泰勒蟲,但它是否是泰勒蟲必須的生物媒介還需進(jìn)一步證實(shí)[18]。

羊泰勒蟲病已在我國(guó)新疆、內(nèi)蒙古、遼寧、吉林、甘肅、青海、寧夏、河北、河南、山西、陜西、山東、湖北、浙江、江蘇、廣東、貴州、重慶、四川等19個(gè)省/直轄市有報(bào)道?？偟母腥韭蕿?.1%～100%,但不同地方有差異,如新疆烏魯木齊(4.1%,PCR 檢測(cè))[19]、阿克蘇(58%,PCR 檢測(cè))[20]、南疆(62.79%,PCR 檢測(cè))[21]、阿勒泰(23.3%,PCR 檢測(cè))[22]、巴州(7.63%,PCR 檢 測(cè))[22]、哈 密(5%,PCR 檢 測(cè))[22],內(nèi)蒙古(50%,PCR 檢測(cè))[19],吉林延邊(31.18%,PCR 檢 測(cè))[23]、琿 春(29.23%,PCR 檢 測(cè))[24],甘 肅(72.7%,ELISA 檢測(cè))[25],青 海(49.74%,ELISA 檢測(cè))[26],河北(12.9%,PCR 檢測(cè))[27],河南(21.7%,PCR 檢測(cè))[15],陜西(52.7%[4]～92.6%[28],PCR 檢測(cè)),山東(24.8%[29]～59.0%[19],PCR 檢測(cè)),湖北(100%,PCR 檢測(cè))[9],浙江(28.9%,PCR 檢測(cè))[10],江蘇(67.4%,PCR 檢 測(cè))[19],廣 東(90.9%,PCR 檢測(cè))[30],貴州(46.8%[30]～84.0%[31],PCR 檢測(cè)),重慶(12.7%,PCR 檢測(cè))[30]。

采用分子生物學(xué)方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其他國(guó)家羊泰勒蟲的種類和感染率也存在差異。如土耳其東部綿羊和山羊的泰勒蟲感染率為36.08%,其中最高的是綿羊泰勒蟲(34.56%),其次是Theileriasp.MK(1.3%)和Theileriasp.OT3(0.43%)[32]；中部的感染率為35.9%[33]；南部的綿羊泰勒蟲感染率最高(35.4%),存在環(huán)形泰勒蟲(3.9%)和Theileriasp.MK(0.3%)感染[34]。阿曼的綿羊泰勒蟲感染率最高(綿羊33.4%,山羊2.0%),萊氏泰勒蟲的感染率最低(綿羊22.0%,山羊0.5%),同時(shí)還檢測(cè)到環(huán)形泰勒蟲和Theileriasp.OT1[35]。突尼斯綿羊泰勒蟲的感染率為16.3%,且母綿羊陽(yáng)性率高于公綿羊[36]。蘇丹綿羊泰勒蟲的感染率為88.6%[37]。伊朗綿羊的綿羊泰勒蟲感染率為40.2%～70.0%,呂氏泰勒蟲的感染率為5.5%～54.8%[38-39],萊氏泰勒蟲的感染率較低(0.3%)[40]。綿羊泰勒蟲、萊氏泰勒蟲、尤氏泰勒蟲在伊拉克綿羊的感染率分別為14.35%,7.70%,5.60%[41]。綿羊泰勒蟲在埃塞俄比亞綿羊和山羊的感染率分別為92.0%和1.5%,分離泰勒蟲的感染率分別為2.0%和0.4%[42]。綿羊泰勒蟲在巴基斯坦綿羊的感染率為37%[43]。

這些差異可能與蜱的種類和分布、采樣時(shí)間、檢查方法等有關(guān)。

3 臨診表現(xiàn)

臨床癥狀可表現(xiàn)為較急性、急性、亞急性和慢性。急性感染病羊在發(fā)病初期呈稽留熱,體溫可升高至40～42℃,食欲不振,心率加快,虛弱,反芻減弱,腹瀉等。感染后期病羊消瘦、呼吸困難、流涕,肩前淋巴結(jié)和腹股溝淋巴結(jié)腫大。一般在出現(xiàn)癥狀后1～2周內(nèi)死亡,剖檢可見淋巴結(jié)腫大、脾臟腫大、肺水腫等[44]。較急性病例在發(fā)病后1～2 d內(nèi)死亡。有的羊耐過(guò),成為帶蟲羊。萊氏泰勒蟲可引起母羊流產(chǎn)[45]。綿羊泰勒蟲的臨床癥狀不明顯或沒(méi)有,僅表現(xiàn)發(fā)熱、貧血和輕微的淋巴結(jié)腫大[13]。

4 診斷

可以通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查、臨診表現(xiàn)(如高熱、貧血、淋巴結(jié)腫大等)對(duì)羊泰勒蟲病進(jìn)行初步診斷,但有時(shí)需進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查,并應(yīng)注意與有類似癥狀的傳染病鑒別。目前,泰勒蟲病實(shí)驗(yàn)室診斷的方法主要有病原形態(tài)觀察、血清學(xué)檢測(cè)及PCR 檢測(cè)。

4.1 病原形態(tài)觀察血涂片或淋巴結(jié)涂片染色法依然是泰勒蟲病最經(jīng)典的診斷方法。該方法雖然簡(jiǎn)便、價(jià)廉,但其準(zhǔn)確性依賴于檢查人員的寄生蟲形態(tài)學(xué)經(jīng)驗(yàn)(熟悉泰勒蟲、巴貝斯蟲等的形態(tài)),并受涂片厚度、染液種類、染色時(shí)間等的影響,且檢出率相對(duì)較低。當(dāng)染蟲率較低或隱性感染時(shí)常存在漏檢。

4.2 血清學(xué)檢測(cè)由于涂片染色法具有檢出率較低、假陰性率較高等缺點(diǎn),許多學(xué)者用血清學(xué)方法來(lái)檢測(cè)泰勒蟲。間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)[46]、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)[47-50]、膠體金免疫層析試紙條(ICS)[51]等已用于羊泰勒蟲病的檢測(cè)。國(guó)內(nèi)外已建立了4種ELISA 用于泰勒蟲病的抗體檢測(cè)：第1種是基于裂殖子粗抗原建立的間接ELISA,該方法的缺點(diǎn)是與綿羊巴貝斯蟲存在交叉反應(yīng)[47]；第2種是基于尤氏泰勒蟲重組表達(dá)抗原r TuIP 建立的間接ELISA,采用該方法對(duì)188份泰勒蟲陽(yáng)性血清和陰性血清進(jìn)行尤氏泰勒蟲/呂氏泰勒蟲抗體的檢測(cè),其特異性和靈敏度可達(dá)98.4%。并應(yīng)用該方法對(duì)隨州、貴陽(yáng)的田間血清進(jìn)行檢測(cè),血清陽(yáng)性率分別為17.8%和11.6%,與18S r RNA 基因檢測(cè)的結(jié)果一致[48]；第3 種是基于萊氏泰勒蟲重組表達(dá)抗原r TIHSP70建立的間接ELISA,用該方法對(duì)260份血清樣品進(jìn)行抗體檢測(cè),與用裂殖子粗抗原建立的間接ELISA 相比,靈敏度和特異性分別為94.3%和89.5%[49]；第4種是基于呂氏泰勒蟲重組表達(dá)表面膜蛋白(r TlSP)建立的間接ELISA,特異性和靈敏度分別為97.9%和97.1%,與尤氏泰勒蟲和綿羊泰勒蟲存在交叉反應(yīng),但與巴貝斯蟲無(wú)交叉反應(yīng),并應(yīng)用該方法對(duì)采集自甘肅省的233份血清進(jìn)行檢測(cè),泰勒蟲陽(yáng)性率為63.75%,而血涂片檢查陽(yáng)性率僅為46.67%[50]。ELISA 是我國(guó)羊泰勒蟲病的主要血清學(xué)檢測(cè)方法,但目前還不能將尤氏泰勒蟲、呂氏泰勒蟲和綿羊泰勒蟲區(qū)分。

雖然血清學(xué)方法具有易于操作、可以大量檢測(cè)樣品等優(yōu)點(diǎn),但由于梨形蟲各蟲種間存在交叉抗原和較弱的免疫反應(yīng),因此,血清學(xué)方法易出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性,同時(shí)還存在不能區(qū)分耐過(guò)動(dòng)物、不易區(qū)分相近蟲種的交叉感染、特異性較差等缺點(diǎn)。

4.3 PCR檢測(cè)由于分子生物學(xué)方法具有特異、靈敏、快速等優(yōu)點(diǎn),為泰勒蟲病的診斷提供了更準(zhǔn)確的手段。已經(jīng)建立的常規(guī)PCR[35]、半套式PCR[52]、巢式PCR[53]、巢式PCR-RFLP[38]、多重PCR[54]、二溫式PCR[55]、熒光定量PCR[56]、反向線性印跡(RLB)[6]、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)[57]等可用于臨床、亞臨床、慢性和隱性感染的檢測(cè),但不同方法的陽(yáng)性檢出率有差異。如檢測(cè)羊泰勒蟲18S r RNA 基因的半套式PCR 陽(yáng)性率(45.10%)明顯高于檢測(cè)18S r RNA 基因的常規(guī)PCR(31.37%)和檢測(cè)蟲體表面蛋白基因的常規(guī)PCR(17.64%)[58]?；?8S r RNA 建立的綿羊泰勒蟲巢式PCR 能檢測(cè)含0.000 01% 泰勒蟲寄生的血樣,且能區(qū)分萊氏泰勒蟲和綿羊泰勒蟲[53]?；趨问咸├障x5.8S r RNA、綿羊泰勒蟲5.8S r RNA 和尤氏泰勒蟲18S r RNA建立的多重PCR 能同時(shí)檢測(cè)這3種泰勒蟲,但靈敏度較常規(guī)PCR 稍低[54]?；谘蛱├障x表面蛋白基因(MPSP)建立的二溫式PCR 陽(yáng)性率(40%)高于血涂片染色鏡檢陽(yáng)性率(17.78%)[55]?；谘蛱├障x18S r RNA 建立的熒光定量PCR 的陽(yáng)性率(48%)高于常規(guī)PCR 陽(yáng)性率(38%),且靈敏度高100倍[56]。

5 防制

隨著我國(guó)養(yǎng)羊業(yè)的迅速發(fā)展和頻繁的跨境運(yùn)輸,羊泰勒蟲病的發(fā)生也呈上升趨勢(shì)。且在自然病例中常見溫和型或隱性感染,從而增加了該病的防制難度。

目前,泰勒蟲病沒(méi)有特效的治療藥物,較常用的藥物主要有咪唑苯脲、雙咪苯脲、三氮脒(又名貝尼爾)、戊氧苯脒、喹啉脲(又名阿卡普林)、錐黃素(又名黃色素、吖啶黃)、臺(tái)盼藍(lán)、阿奇霉素、阿托伐醌、羥基萘、克林霉素、奎寧及中草藥等。張其才等[59]報(bào)道貝尼爾緩釋劑對(duì)羊泰勒蟲病的有效保護(hù)期為3個(gè)月,適宜在泰勒蟲流行的地區(qū)廣泛使用。

隨著化學(xué)藥物耐藥性的不斷增加,許多學(xué)者認(rèn)為研制出保護(hù)性疫苗十分緊迫。目前萊氏泰勒蟲蘇丹分離株(阿特巴拉株)的活疫苗已經(jīng)在蘇丹用于控制綿羊惡性泰勒蟲病[60]。但由于呂氏泰勒蟲、尤氏泰勒蟲和綿羊泰勒蟲均不能體外培養(yǎng),因此不能制備弱毒細(xì)胞苗。篩選出有效的抗原基因是制備羊泰勒蟲亞單位疫苗的關(guān)鍵環(huán)節(jié),目前尚在抗原基因篩選階段,已有尤氏泰勒蟲乳清磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(OPRT)[61]、呂氏泰勒蟲表面蛋白(TlSP)[62]的報(bào)道。

由于沒(méi)有一種藥物預(yù)防或免疫預(yù)防的方法能普遍應(yīng)用,因此,在泰勒蟲病的傳統(tǒng)防控中,常采用化學(xué)藥物治療和消滅媒介蜱來(lái)控制該病。首先要定期消滅羊體上和環(huán)境中的蜱,許多學(xué)者認(rèn)為只有滅蜱才能從根本上防止羊泰勒蟲病的發(fā)生；第二,加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,增強(qiáng)羊的體質(zhì)及抗病能力,保持圈舍清潔、干燥；第三,用貝尼爾、阿卡普林等對(duì)發(fā)病羊進(jìn)行治療,加強(qiáng)對(duì)病羊的護(hù)理,并針對(duì)出現(xiàn)的臨床癥狀進(jìn)行對(duì)癥治療；第四,在蜱活動(dòng)季節(jié)之前用貝尼爾、阿卡普林等對(duì)羊進(jìn)行預(yù)防性驅(qū)蟲；第五,引進(jìn)或輸出羊時(shí)要加強(qiáng)檢疫,避免將病原帶進(jìn)或帶出。

6 展望

雖然羊泰勒蟲病的研究取得了一定的進(jìn)展,但是,目前泰勒蟲病仍然是危害羊最嚴(yán)重的血液原蟲病,其防控形勢(shì)依然嚴(yán)峻。隨著分子生物學(xué)和新一代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展,將會(huì)獲得更多羊泰勒蟲的基因組和轉(zhuǎn)錄組,進(jìn)而尋找潛在的診斷抗原基因、疫苗候選基因和藥物靶標(biāo),為新的診斷方法的建立、基因工程疫苗的研制和新型藥物的研發(fā)打下基礎(chǔ),這將會(huì)為羊泰勒蟲病的防控提供更為行之有效的方法。