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    新型冠狀病毒病(COVID-19)檢測加拿大安大略省公共衛(wèi)生局(PHO)實驗室的指導文件

    2020-04-16 02:32:32劉妍張小燕林愛芬編譯胡迅審校
    中國醫(yī)藥生物技術 2020年2期
    關鍵詞:病毒檢測測序標本

    劉妍,張小燕,林愛芬 編譯,胡迅 審校

    ·新型冠狀病毒專欄·

    新型冠狀病毒病(COVID-19)檢測加拿大安大略省公共衛(wèi)生局(PHO)實驗室的指導文件

    劉妍,張小燕,林愛芬 編譯,胡迅 審校

    100039 北京,解放軍總醫(yī)院第五醫(yī)學中心臨床研究管理中心(劉妍);201210 上海,生物芯片上海國家工程研究中心(張小燕);317000 臺州,浙江省臺州醫(yī)院生物資源中心(林愛芬);610041 成都,四川大學華西醫(yī)院生物樣本庫(胡迅)

    本文提供了 2019 年底中國湖北省武漢市暴發(fā)的呼吸道疾病相關的新型冠狀病毒病 19(COVID-19,以前稱之為2019-nCoV)檢測指南。COVID-19 的病原體是 SARS-CoV-2病毒。為方便交流,PHO 統(tǒng)一使用術語 COVID-19 來指病毒和疾病。

    誰負責檢測:

    PHO 實驗室將接受符合衛(wèi)生部規(guī)定的受檢對象(person under investigation,PUI)或疑似病例的樣本檢測 COVID-19。

    那些臨床表現(xiàn)不符合病例定義,但被臨床醫(yī)生評估為存在 COVID-19 風險的個體也要接受檢測。PHO 目前不建議對無癥狀者進行 COVID-19 的常規(guī)檢查。如果臨床醫(yī)生想進一步討論檢測的作用,可隨時通過 PHO 實驗室的客服中心(416-235-6556/1-877-604-4567)或下班后的緊急值班人員(416-605-3113)電話聯(lián)系 PHO 微生物專家。

    檢測要求必須附帶提供下面 6 條數(shù)據(jù)信息:

    為了加快檢測,自 2020 年 2 月 10 日起,不再需要 PHO 實驗室預先批準對 COVID-19 的檢測,前提是在專門的 PHO COVID-19 檢測申請中包括以下強制性信息:

    1.個人是否符合新冠病毒檢測標準(是/否)

    2.旅行史(國家和日期)

    3.暴露史[接觸了 PUI、病例或疑似病例(是/否),以及任何暴露細節(jié)]

    4.臨床信息(例如發(fā)燒、咳嗽、流鼻涕、肺炎),包括癥狀起病日期

    5.樣本類型

    6.患者安置情況

    標本采集建議:

    A)未入院的患者(包括急診室患者)

    ·可接受單個上呼吸道標本進行COVID-19 檢測。

    上呼吸道標本包括鼻拭子(NPS)或病毒性咽拭子,收集在通用轉運介質(UTM)中。首選 NPS,因為根據(jù)目前可獲得的資料,對于 COVID-19 檢測,NPS 比咽拭子具有更高的靈敏度。

    B)住院患者

    對于住院患者,建議至少從兩個不同的部位采集兩個樣本:

    ·上呼吸道樣本:送檢 UTM 中收集的 NPS 和病毒性咽拭子。

    ·下呼吸道標本:盡可能送檢。

    ·痰液:如果患者咳嗽,請收集痰液。但不要誘導。

    注意:自 2020 年 3 月 2 日起,將不再對申請 COVID-19 檢測的標本進行呼吸道病毒多重 PCR(MRVP)檢測。只有那些符合 PHO 實驗室接受標準的患者才能做 MRVP 檢測(如住院暴發(fā)的流行)。有關更多詳細信息和接受標準,請參考另一份《呼吸道病毒檢測信息表》。

    COVID-19 的血清學檢測目前還無法開展。

    急診檢驗樣本(STAT)檢測要求:

    PHO 的實驗室致力于優(yōu)先檢測原則,以幫助那些醫(yī)療機構在緊急情況下迅速對患者做出醫(yī)護決策(急診檢驗“STAT”)。

    ·STAT 樣本必須與常規(guī)樣本分開,單獨運輸?shù)桨泊舐允《鄠惗嗍?661 University Ave. 的運輸和接收碼頭,并做好樣本交接。

    ·STAT 樣本必須放在帶有明顯標記的“STAT”包裝中,按照加拿大生物安全標準進行處理,并按照《危險品運輸條例》進行運輸。

    ·分開運輸以免因運輸?shù)纫蛩匮诱`檢測,延誤將把本應為急診檢驗的樣本作為常規(guī)樣品進行處理。

    當?shù)毓残l(wèi)生部門通知:

    所有接受 COVID-19 檢測的個人信息都須在當?shù)毓残l(wèi)生部門備案。

    此文件 2020.03.05 印刷日起生效

    樣本采集和處理

    樣本申請

    檢測申請申請內容樣本類型最小體積采集試劑盒 COVID-19COVID-19 病毒檢測申請上呼吸道:NPSNPS 放入至少 1.0 mlUTM 中Virus Respiratory Kit #390082 COVID-19COVID-19 病毒檢測申請上呼吸道:病毒咽拭子(見送檢和采集說明)咽拭子放入至少1.0 mlUTM 中Virus Culture Kit #390081 COVID-19COVID-19 病毒檢測申請下呼吸道(如可能盡量提供):痰、支氣管肺泡灌洗(BAL)、支氣管沖洗液、胸腔積液、肺組織(見送檢和采集說明)1.0 mlTuberculosis Kit #390042

    送檢和采集說明:

    ①呼吸道樣本:

    A)未入院的患者(包括急診室患者):可接受單個上呼吸道標本進行 COVID-19 檢測。

    上呼吸道標本包括 NPS 或病毒性咽拭子,收集在 UTM 中。首選 NPS,因為根據(jù)目前可獲得的資料,對于COVID-19 檢測,NPS 比咽拭子具有更高的靈敏度。

    B)住院患者:對于住院患者,建議至少從兩個不同的部位采集兩個樣本:

    ·上呼吸道樣本:送檢 UTM 中收集的 NPS 和病毒性咽拭子。

    ·下呼吸道標本:盡可能送檢。

    ·痰液:如果患者咳嗽,請收集痰液。但不要誘導。

    ②完成 COVID-19 檢測申請的所有信息

    1.個人是否符合受檢對象的標準(是/否)

    2.旅行史(國家和日期)

    3.暴露史[接觸了 PUI、確診病例或疑似病例(是/否),以及任何暴露細節(jié)]

    4.臨床信息(例如發(fā)燒、咳嗽、流鼻涕、肺炎),包括癥狀起病日期

    5.樣本類型

    6.患者安置情況

    樣本轉運前的準備

    樣本放在生物危害標記的袋子里密封,樣本采集后應儲存在 2 ~ 8 ℃,冰袋轉運到 PHO 實驗室。如果樣本需要72 小時以上才能轉運到檢測實驗室,則應先–80 ℃凍存樣本,然后干冰運輸。

    臨床樣本運送到當?shù)?PHO 實驗室的包裝和轉運,參照《危險品運輸條例》

    特殊說明:

    對于呼吸道樣本,參考 Virus-Respiratory Kit Instruction Sheet 指示說明。

    對痰、BAL、支氣管沖洗液、胸腔積液、肺組織樣本,參見 Tuberculosis Kit N-0042。

    對病毒咽拭子樣本,使用 Virus Culture Kit N0081。

    申請和試劑盒訂購

    檢測申請:需要填寫完成上面概述的用于 COVID-19 檢測的 6 條信息,提交者(醫(yī)師)和患者信息以及檢測要求。具體見 2020.03.02 更新版本申請表格。

    標本容器和用品的申請:請注意,標本容器和用品僅提供給送樣者,用于 PHO 測試的樣本轉運。見 2017.09.28更新版本申請表格。

    檢測頻率和周轉時間(TAT)

    COVID-19 的檢測要在多倫多 PHO 實驗室進行。注意:周轉時間依地理位置和距離 PHO 實驗室的遠近而定。

    COVID-19 的檢測樣本在 PHO 實驗室被確認。如果需要額外檢測,樣本要送到加拿大溫尼伯的國家微生物實驗室(NML)。

    當前在PHO實驗室的 COVID-19 檢測可在 24 小時內完成(從檢測開始計算)。

    結果報告

    來自 PHO 實驗室所有的 COVID-19 最終檢測結果要報告給申請檢測的醫(yī)生。

    作為一種有公共衛(wèi)生意義的疾病,所有陽性結果將被報告給當?shù)毓残l(wèi)生部門。作為臨時策略,我們也將報告所有陰性結果。

    檢測方法

    COVID-19 的檢測流程使用由 PHO 和 NML 實驗室以實時 RT-PCR 方法共同驗證,擴增靶基因包括 RNA依賴的 RNA 聚合酶 RdRp 基因和包膜 E 基因。

    對于實時 PCR 方法只檢測一個靶點或有任何靶點不確定的樣本,都將用 PCR 和 Sanger 法對病毒 RdRp 基因進行進一步的測序檢測。

    在 PHO 實驗室,滿足下面兩個條件可確診為 COVID-19 陽性:

    1.用實時 RT-PCR 方法至少檢測到病毒基因組兩個靶點。

    2.實時 RT-PCR 檢測到一個靶基因,抑或一個乃至兩個靶基因都不確定,但經測序可檢測到 COVID-19 病毒。

    如果符合下面幾種情況,PHO 實驗室的檢測結果通常被認為是不明確。

    1.實時 RT-PCR 只檢測單個靶基因。

    2.一個或兩個靶點的實時 RT-PCR 結果都不確定。

    3.測序檢測不到 COVID-19 病毒。

    如果需要,樣本可送 NML 實驗室進一步檢測。

    關于 PHO 實驗室 COVID-19 檢測的實時 RT-PCR 的更多細節(jié)可參閱“Diagnostic detection of COVID-19 by real-time RT-PCR”。

    關于 RdRp 基因的 PCR 和測序的其他技術信息可參閱“Assays for laboratory confirmation of novel human coronavirus (hCoV-EMC) infections”。

    PHO 實驗室已將該檢測流程修訂為專用于 COVID-19 病毒檢測。

    COVID-19 的血清學檢測目前還無法開展。

    總則

    COVID-19 的 PHO 檢測規(guī)則(截止到 2020.02.07)

    A.COVID-19 的檢測

    ·COVID-19 的檢測采用的是 PHO 實驗室和 NML 實驗室確定的實時 RT-PCR 方法。檢測靶基因包括 RdRp基因和 E 基因。

    ·實時 RT-PCR 方法檢測到兩個靶基因則實驗室報告陽性。

    ·實時 RT-PCR 檢測到一個靶基因,或任何一個靶基因都不確定的樣本,要經 PCR 擴增并用 Sanger 法對COVID-19 的 RdRp 基因進行測序來確證。

    ·如果需要的話,樣本要送到加拿大溫尼伯的 NML做進一步檢測。

    B.其他呼吸道病毒的檢測

    ·如果患者符合 PHO 實驗室對此檢測的接受標準(如住院暴發(fā)的流行),則可以通過 MRVP 檢測其他呼吸道病毒。進一步詳細信息和納入標準,請參考《呼吸道病毒測試信息表》。

    *基于內部實驗室數(shù)據(jù)和可獲得的序列數(shù)據(jù)信息,上述病毒不會發(fā)生與 COVID-19 的交叉反應。

    ·如果患者符合此檢測納入標準,則要申請禽流感病毒檢測。更多詳細信息,請參閱《禽流感檢測信息表》。

    注意:如果需要,必須在實驗室申請書上申請其他呼吸道病毒和禽流感的檢測。

    要考慮的其他檢測----社區(qū)獲得性肺炎病原菌的檢測

    肺炎/肺實質受累的患者也應篩查社區(qū)獲得性肺炎的病原菌。PHO 實驗室推薦做如下檢查:

    I.肺炎支原體/肺炎衣原體雙鏈 PCR

    ·相同的鼻拭子和咽拭子樣本應該送檢 COVID-19。

    II.軍團菌檢測

    ·軍團菌 PCR:同為下呼吸道的樣本(痰、BAL、支氣管沖洗液、氣管吸取物、肺組織)應該送檢 COVID-19。

    ·軍團菌尿抗原檢測:(最少 2 ml 尿量)

    說明:如果受檢對象病情不斷惡化或不見好轉,應該重復檢測 COVID-19,即使前面其他病原檢測結果是陽性。

    胡迅,Email:hxxhu99@163.com

    2020-03-11

    10.3969/j.issn.1673-713X.2020.02.007

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