Th17、Treg 與食管癌的關系及臨床意義

王成師，華香，濮娟，祝麗晶

(南京醫(yī)科大學康達學院附屬漣水人民醫(yī)院，江蘇 漣水)

0 引言

食管癌是一種發(fā)生在食管上皮組織的惡性腫瘤，是中國第四大常見惡性腫瘤，多年來一直威脅著人們的健康和生命。我國食管癌的發(fā)病率約占全球的50% ，有逐年升高趨勢，并且食管癌的預后很差，5 年生存率小于5%[1]。尋找有效的方法和手段輔以食管癌的早期識別和診斷，是改善食管癌預后、降低死亡率的重要措施。本研究通過流式細胞術分別檢測食管癌和健康人外周血輔助性T 細胞17(T helper cells 17，Th17)和調節(jié)性T 細胞(regulatory T cells，Treg)，擬從腫瘤免疫的角度探尋食管癌的發(fā)病機制及治療干預靶點，對實現(xiàn)食管癌的早診早治具有深遠的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2018 年1 月至2019 年12 月收治的40 例食管癌患者做為病例組，其中男性24 例，女性16 例，年齡62～80 歲，平均（67.1±5.1）歲，所有患者均經(jīng)病理證實，且在采集標本前尚未進行手術、放化療以及免疫抑制劑等治療，所有患者均不合并高血壓、糖尿病、冠心病、結締組織病等慢性疾病以及急性感染。另選取同期于我院體檢健康者35 例作為對照組，其中男23 例，女12 例，年齡64～76 歲，平均（69.3±4.2）歲。兩組在年齡和性別分布上差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

1.2 標本采集

收集我院初次住院患者入院次日空腹靜脈血，體檢者于體檢當日空腹采集靜脈血，分別采集肝素抗凝靜脈血2mL。

1.3 Treg、Th17 檢測

采集標本后，按照試劑盒說明書進行上機前處理準備。

1.3.1 Th17 的檢測

取肝素鈉抗凝的全血標本100uL，用RPMI 1640 1：1 等體積稀釋，加入2ul 白細胞激活劑后置于37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)3-6小時；加入20uL CD8 PerCP-Cy5.5 和5uL CD3 APC，避光放置15分鐘；加入100μL 固定破膜劑中的試劑 A，避光孵育15 分鐘；加入3mL PBS，1200 rpm 離心5 分鐘，棄除上清；加入100μL 的固定破膜劑中的試劑 B 和20ul IL-17A PE，避光孵育15 分鐘；加入3mL PBS，1200 rpm 離心5 分鐘，棄除上清；0.5mL PBS 重懸細胞，上機檢測。

1.3.2 Treg 的檢測

在流式管內分別加入特異性標記的抗體；加入100μL 的待測樣本后混勻；室溫避光孵育15 分鐘；加入紅細胞裂解液，渦旋混勻，室溫避光15 分鐘；1200rpm 離心5min，棄去上清液；加入2mL 的PBS，渦旋混勻，1200rpm 離心5min，棄去上清液；加入0.5mL PBS混勻，上機檢測。

1.4 流式細胞儀檢測后用kaluza 分析軟件分析Th17、Treg 占CD4+T 淋巴細胞的比例，并計算Th17/Treg。

1.5 統(tǒng)計學分析

采用 SPSS 統(tǒng)計學軟件進行分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 流式細胞術檢測某一食管癌患者的外周血中Th17 和Treg 占CD4+T 淋巴細胞比例，如圖1。

圖1 某食管癌患者外周血中Th17 和Treg 占CD4+T 淋巴細胞比例

2.2 食管癌組外周血Th17、Treg 占CD4+T 淋巴細胞比例及Th17/Treg 分別為2.45±0.88、6.68±1.59、0.36±0.10，顯著高于對照組（1.02±0.55、4.62±1.43、0.25±0.18），統(tǒng)計分析顯示P＜0.05，如表1。

表1 食管癌組與對照組外周血Th17、Treg 占CD4+T 淋巴細胞比例及Th17/Treg 比較

表1 食管癌組與對照組外周血Th17、Treg 占CD4+T 淋巴細胞比例及Th17/Treg 比較

?

3 討論

食管癌是最常見的消化道腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率世界上不同國家間差異很大，全世界每年約有30 萬人死于食管癌[2]。我國是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一，發(fā)病率在各類消化系統(tǒng)腫瘤中位居第2 位，男性多于女性，發(fā)病年齡多在40 歲及以上[3,4]。食管癌典型的癥狀為進行性吞咽困難，先是難咽干的食物，繼而是半流質食物，最后水和唾液也難以下咽，患者確診時基本已處于中晚期，雖采用手術、放療、化療等治療措施，但死亡率仍很高[5]。食管癌的發(fā)生、發(fā)展與機體的免疫功能狀況密切有關。機體抗腫瘤免疫以細胞免疫為主，其中 T 淋巴細胞在機體抗腫瘤免疫中起調控及免疫監(jiān)視作用[6]。因此，本文從腫瘤免疫的角度探尋食管癌的發(fā)病機制。

Treg 是一類具有免疫抑制功能的細胞亞群，在腫瘤的免疫逃逸以及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[7]。Th17 主要分泌白細胞介素-17（IL-17），還分泌IL-22、IL-23，參與機體的炎性反應過程，近年來發(fā)現(xiàn)其與腫瘤有密切關系[8,9]。Treg 和Th17 均由CD4+T 細胞在不同濃度的轉化生長因子-β（TGF-β）作用下分化而來，二者在免疫穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著相互拮抗的平衡作用[10,11]。

本研究通過流式細胞術檢測食管癌組和健康對照組中Th17 和Treg 的相對量，結果提示食管癌患者外周血中Th17、Treg 占CD4+T淋巴細胞比例以及Th17/Treg 均明顯高于健康對照組。近年來的研究顯示，機體內Th17 的增多，其可通過上調趨化因子表達，促進血管內皮細胞的移行進而促進腫瘤的生長[12-14]；Treg 的增多可通過細胞與細胞間的接觸以及細胞因子兩種途徑抑制T 細胞的免疫應答，減弱抗腫瘤效應[15]。另外，Th17/Treg 失衡亦已報道與某些疾病，尤其是惡性腫瘤腫瘤密切相關[16-18]。所以，食管癌患者體內Th17、Treg 占CD4+T 淋巴細胞比例以及Th17/Treg 較健康人明顯升高，細胞免疫紊亂可能在食管癌發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。

如果能夠通過各種干預手段影響食管癌患者體內Th17、Treg，可能為食管癌提供新的治療方案[19]。但目前仍存在許多問題尚待明確[20]，如：Th17、Treg 在食管癌發(fā)生、發(fā)展中的詳細機制以及影響其分化的因素；Th17、Treg 數(shù)量變化是否功能也發(fā)生改變；干預時具體的目標數(shù)量是多少，如何避免引起自身免疫性疾病的發(fā)生等。因此，我們仍需對這兩群細胞進行更深入的研究。