組合免疫：非洲豬瘟常態(tài)化重構(gòu)豬群的免疫程序

林文耀，劉國(guó)民，黃全勇，尚 策，高日明

（金宇保靈生物藥品有限公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010030）

非洲豬瘟（African Swine fever,ASF）是由非洲豬瘟病毒（African Swine fever virus,ASFV）感染家豬和野豬引起一種急性、出血性、烈性傳染病。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病，該病也是我國(guó)重點(diǎn)防范的一類(lèi)動(dòng)物疫情。其特征是發(fā)病過(guò)程短，最急性和急性感染死亡率高達(dá)100%，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱（達(dá)40～42℃），心跳加快，呼吸困難，部分咳嗽，眼、鼻有漿液性或黏液性膿性分泌物，皮膚發(fā)紺，淋巴結(jié)、腎、胃腸黏膜明顯出血，非洲豬瘟臨床癥狀與豬瘟癥狀相似[1-2]。自2018年8月傳入我國(guó)以來(lái)，截至2019年7月3日全國(guó)共發(fā)生疫情143起，撲殺生豬116萬(wàn)余頭。非洲豬瘟已經(jīng)成為我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的頭號(hào)大敵。在非洲豬瘟1周年之際，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部表示要“堅(jiān)決打好打贏非洲豬瘟防控攻堅(jiān)戰(zhàn)、持久戰(zhàn)”。

口蹄疫和非洲豬瘟雖然都是烈性的病毒類(lèi)傳染病，但傳播方式卻有很大的不同。非洲豬瘟主要是通過(guò)高度接觸感染，而口蹄疫的傳播方式則更加多樣，攜帶病毒的飛沫通過(guò)空氣進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播是口蹄疫的傳播特點(diǎn)之一?？谔阋卟《臼悄壳耙阎膫魅拘宰顝?qiáng)的動(dòng)物病毒，美國(guó)養(yǎng)豬信息中心根據(jù)疾病的傳播能力和感染風(fēng)險(xiǎn)及疾病暴發(fā)后對(duì)經(jīng)濟(jì)貿(mào)易的影響，把口蹄疫列為豬的重大傳染病之首。我國(guó)口蹄疫疫情雖然總體呈穩(wěn)定可控狀態(tài)，但是防控形勢(shì)較為嚴(yán)峻。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公布的數(shù)據(jù)顯示，2018年我國(guó)口蹄疫疫情高達(dá)27起，為近十年來(lái)新高。我國(guó)周邊國(guó)家持續(xù)有口蹄疫疫情報(bào)道，同時(shí)為填補(bǔ)國(guó)內(nèi)豬肉供應(yīng)缺口，我國(guó)準(zhǔn)備擴(kuò)大肉類(lèi)進(jìn)口的來(lái)源范圍，輸入型口蹄疫的疫情暴發(fā)對(duì)該病的防控也帶來(lái)了較大的壓力。豬群感染口蹄疫后，黏膜系統(tǒng)和皮膚的受損更有利于非洲豬瘟病毒的入侵。所以，在重點(diǎn)防控非洲豬瘟的同時(shí)，也要重視防控口蹄疫。

自2011年新流行的豬偽狂犬病（Pseudorabies,PR）變異毒株暴發(fā)以來(lái)，PR給我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，豬場(chǎng)偽狂犬病野毒感染現(xiàn)象較為嚴(yán)重[3]。豬瘟是威脅我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病之一，其特征是：急性呈敗血性變化，實(shí)質(zhì)器官出血，壞死和梗死；慢性呈纖維素性壞死性腸炎，后期常有副傷寒及巴氏桿菌的繼發(fā)感染。豬瘟臨床癥狀與非洲豬瘟癥狀相似，難以區(qū)別[4]。在非洲豬瘟肆虐的背景下，做好口蹄疫、偽狂犬病、豬瘟的免疫防控可以有效提高豬群的健康，提高易感動(dòng)物的抵抗力，筑起抵抗非洲豬瘟的防線。但傳統(tǒng)的免疫程序?qū)@3種疾病是單獨(dú)免疫，需要分別免疫3次。免疫次數(shù)頻繁，通過(guò)針頭傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)加大；人豬接觸頻繁，豬群應(yīng)激較大，不利于疫病的防控；而且免疫時(shí)間過(guò)早，容易受母源抗體干擾導(dǎo)致免疫失敗。有研究表明，相同感染劑量下，液體組和飼料組隨著暴露次數(shù)增加，非洲豬瘟的感染幾率也隨之增加。當(dāng)液體組的暴露次數(shù)達(dá)到10次時(shí)，最低感染劑量（1 TCID50）的感染幾率接近1[5]。由此可見(jiàn)，減少免疫次數(shù)的同時(shí)減少人豬接觸的次數(shù)、降低針頭傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)，可大幅降低非洲豬瘟感染的幾率。面對(duì)非洲豬瘟常態(tài)化的挑戰(zhàn)，本研究比較評(píng)估“口蹄疫+豬瘟+偽狂犬病”組合免疫方式與口蹄疫、偽狂犬病、豬瘟單針免疫的副反應(yīng)比例、抗體陽(yáng)性率。

1 材料與方法

1.1 疫苗

豬口蹄疫O型、A型二價(jià)滅活疫苗（Re-O/MYA98/JSCZ/2013株+Re-A/WH/09，金宇保靈生物藥品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)18392253），豬偽狂犬病活耐熱保護(hù)劑活疫苗（國(guó)內(nèi)最新分離株C株，江蘇揚(yáng)州優(yōu)邦生物藥品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)19225003），豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源，遼寧益康生物股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào) 201841）。

1.2 試驗(yàn)豬場(chǎng)

某母豬存欄1 000頭自繁自養(yǎng)豬場(chǎng)，試驗(yàn)周期：2019年7月20日開(kāi)始，10月20日結(jié)束。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取70日齡健康仔豬200頭，隨機(jī)分為4組，每組50頭，試驗(yàn)分組見(jiàn)表1。具體操作為：口蹄疫滅活疫苗作為稀釋液稀釋豬瘟活疫苗，然后再稀釋豬偽狂犬病活耐熱保護(hù)劑活疫苗。通過(guò)使用方法創(chuàng)新形成口蹄疫-豬瘟-偽狂犬病三聯(lián)苗。首次免疫前、二免前、二免后30天每組隨機(jī)采血15頭，分離血清，-20℃冷凍保存?zhèn)溆?，分別進(jìn)行豬口蹄疫O型抗體、豬偽狂犬病gB抗體、豬瘟抗體的檢測(cè)。

表1 試驗(yàn)分組

1.4 統(tǒng)計(jì)副反應(yīng)豬只數(shù)量

記錄疫苗注射2小時(shí)內(nèi)副反應(yīng)：可視黏膜發(fā)紺，體溫升高，采食量下降，呼吸急促，站立不穩(wěn)，肌肉震顫，倒地，口吐白沫等。

1.5 血清抗體檢測(cè)

血清抗體檢測(cè)均按照相應(yīng)檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)。FMD O型病毒抗體液相阻斷ELISA試劑盒：內(nèi)蒙古金邁詩(shī)生物科技有限公司產(chǎn)品；豬瘟（CSF-Ab）病毒抗體檢測(cè)試劑盒：美國(guó)IDEXX公司產(chǎn)品；豬偽狂犬病病毒gB抗體ELISA試劑盒：荷蘭百測(cè)BioChek公司產(chǎn)品。

FMD O型抗體判斷標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)照臨界值，抗體效價(jià)＜1∶64 時(shí)判為陰性，1∶64 時(shí)判為可疑，≥1∶128 時(shí)判為陽(yáng)性。CSF抗體判定標(biāo)準(zhǔn)：PC＜40%時(shí)判為陰性，≥40%時(shí)判為陽(yáng)性。豬偽狂犬病gB抗體判定標(biāo)準(zhǔn)：效價(jià)范圍≥1 071判為陽(yáng)性。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

利用SPSS Statistics 2.0軟件對(duì)抗體檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析。當(dāng)P＞0.05時(shí)，判為差異不顯著；當(dāng)P≤0.05，判為差異顯著；當(dāng)P＜0.01，判為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 組合免疫與單針免疫的副反應(yīng)比例

組合免疫與單針免疫組的豬只均無(wú)出現(xiàn)可視黏膜發(fā)紺，體溫升高，采食量下降，呼吸急促，站立不穩(wěn)，肌肉震顫，倒地，口吐白沫等副反應(yīng)現(xiàn)象。

2.2 口蹄疫疫苗單針免疫與組合免疫O型抗體的檢測(cè)結(jié)果

如表2所示，口蹄疫疫苗單針免疫與組合免疫產(chǎn)生的O型抗體在一免后30天、二免后30天差異不顯著（P＞0.05）。

表2 比較不同免疫方式口蹄疫的O型抗體水平

2.3 豬瘟疫苗單針免疫與組合免疫的抗體檢測(cè)結(jié)果

如表3所示，豬瘟疫苗單針免疫與組合免疫產(chǎn)生的抗體在一免后30天、二免后30天差異不顯著（P＞0.05）。

表3 比較不同免疫方式豬瘟的抗體水平

2.4 偽狂犬病疫苗單針免疫與組合免疫的gB抗體檢測(cè)結(jié)果

如表4所示，偽狂犬病疫苗單針免疫與組合免疫產(chǎn)生的抗體在一免后30天、二免后30天差異極顯著（P＜0.01），組合免疫產(chǎn)生的gB抗體極顯著高于單針免疫組。

表4 比較不同免疫方式偽狂犬病gB的抗體水平

3 分析與討論

豬偽狂犬病變異毒株的出現(xiàn)、豬瘟和口蹄疫呈現(xiàn)零星散發(fā)的現(xiàn)狀給動(dòng)物疫病的防控帶來(lái)了嚴(yán)峻的考驗(yàn)。而非洲豬瘟的暴發(fā)，使我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)面臨“老病未除，又添新病”的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。2020年起飼料全面禁止添加抗生素，細(xì)菌病的防控同樣不能忽視。非洲豬瘟常態(tài)化使得疫病越來(lái)越復(fù)雜，為減少免疫次數(shù)導(dǎo)致的免疫應(yīng)激及針頭傳播疫病的風(fēng)險(xiǎn)，傳統(tǒng)的免疫程序已經(jīng)不能適應(yīng)目前的養(yǎng)豬生產(chǎn)，無(wú)針注射和組合免疫將會(huì)是未來(lái)的發(fā)展方向。

本研究通過(guò)對(duì)比豬瘟、口蹄疫、偽狂犬病疫苗單針免疫與組合免疫方式的副反應(yīng)比例、抗體陽(yáng)性率發(fā)現(xiàn)，單針免疫與組合免疫的豬只均無(wú)出現(xiàn)副反應(yīng)，說(shuō)明組合免疫是安全的；在抗體陽(yáng)性率方面，豬瘟和口蹄疫的單針免疫與組合免疫差異不顯著（P＞0.05），組合免疫組產(chǎn)生的偽狂犬病gB抗體極顯著高于單針免疫組（P＜0.01）。推測(cè)可能是該聯(lián)苗共同刺激動(dòng)物的免疫器官后有提高免疫應(yīng)答的作用，口蹄疫疫苗的油佐劑兼具抗原緩慢釋放的同時(shí)有免疫增強(qiáng)的作用。后續(xù)研究將會(huì)從免疫機(jī)理闡述免疫協(xié)同的原因。

通過(guò)本研究證明了組合免疫的安全性與有效性，適用于臨床應(yīng)用。為了適應(yīng)非洲豬瘟常態(tài)化的防疫需求，建議肥育豬參考以下免疫程序：在65～70日齡執(zhí)行口蹄疫（首免）+偽狂犬?。ㄊ状渭∽ⅲ?豬瘟（第2次免疫）；95～100日齡執(zhí)行口蹄疫（第2次免疫）+偽狂犬?。ǖ?次肌注）。組合免疫的推廣使用可以有效減少免疫次數(shù)的同時(shí)減少人豬接觸的次數(shù)，降低針頭和人員傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)，減少工人勞動(dòng)強(qiáng)度，提高養(yǎng)殖效益，實(shí)現(xiàn)減負(fù)增效的目標(biāo)。