茶黃素雙沒食子酸酯的生物活性及其作用機(jī)制

雷時(shí)成 孫大利 王亞潔 周 艷 張清海

(1. 貴州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025；2. 貴州醫(yī)科大學(xué)環(huán)境污染與疾病監(jiān)控教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550025；3. 貴州醫(yī)科大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025)

茶葉是世界上最受歡迎的飲料之一，而紅茶又約占整個(gè)茶飲料行業(yè)消費(fèi)總量的78%[1-2]。茶黃素類化合物是紅茶加工過(guò)程中茶兒茶素和沒食子酸等酚類物質(zhì)經(jīng)多酚氧化酶催化氧化形成的一類二聚體，約占紅茶水提物干重的2%～6%。茶黃素的苯駢卓酚酮結(jié)構(gòu)對(duì)紅茶獨(dú)特口感和品質(zhì)起著重要作用。茶黃素(theaflavin，TF1)、茶黃素-3-沒食子酸酯(theaflavin-3-gallate，TF2A)、茶黃素-3’-沒食子酸酯(theaflavin-3’-gallate，TF2B)和茶黃素-3,3’-雙沒食子酸酯(theaflavin-3,3’-digallate，TFDG)是紅茶最主要的茶黃素類化合物。TFDG(圖1)是茶黃素類物質(zhì)中最有效的抗氧化劑和生物活性化合物[3-4]，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)TFDG進(jìn)行了深入研究，動(dòng)物和體外模型試驗(yàn)[5-7]顯示TFDG具有抗氧化、抗癌、抗炎癥、抗病毒、抗肥胖以及預(yù)防心血管疾病等多種生物活性，但專門針對(duì)TFDG生物活性的研究綜述還未見報(bào)道。文章對(duì)近年來(lái)國(guó)內(nèi)外關(guān)于TFDG的生物活性及其主要作用機(jī)制研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為中國(guó)紅茶資源的深層次研究和健康功能性產(chǎn)品開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 抗氧化作用

TFDG可通過(guò)抑制自由基的產(chǎn)生、直接清除自由基以及激活機(jī)體抗氧化體系等不同途徑和機(jī)制發(fā)揮抗氧化作用。

圖1 茶黃素雙沒食子酸酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)

1.1 抑制自由基產(chǎn)生

Su等[8]比較了茶黃素類化合物在菜籽油中的抗氧化能力，發(fā)現(xiàn)TFDG的抗脂質(zhì)氧化能力最強(qiáng)。酪氨酸酶是生物體合成黑色素的關(guān)鍵氧化還原酶，抑制酪氨酸酶活性是當(dāng)今開發(fā)美白護(hù)膚產(chǎn)品的主要依據(jù)之一[9]。周盈利等[10]比較了5種茶黃素單體和EGCG對(duì)酪氨酸酶的抑制活性，結(jié)果顯示TF1、TF2A、TF2B和TFDG對(duì)酪氨酸酶都有較強(qiáng)的抑制作用，而且發(fā)現(xiàn)茶黃素分子結(jié)構(gòu)C-3’位的沒食子?；〈鷮?duì)提高抑制活性有重要作用。Leung等[11-12]構(gòu)建人體低密度脂蛋白(LDL)氧化模型發(fā)現(xiàn)，茶黃素和兒茶素均具有抑制Cu2+介導(dǎo)的LDL氧化作用。通過(guò)檢測(cè)氧化產(chǎn)物硫巴比妥酸和共軛二烯的生成評(píng)價(jià)抗氧化性強(qiáng)弱順序?yàn)椋篢FDG>ECG>EGCG=TF2B=TF2A>TF1=EC>EGC，表明TFDG具有較強(qiáng)的電子轉(zhuǎn)移能力，將Cu2+還原成Cu+。

1.2 直接清除自由基

Sang等[13-14]應(yīng)用體外模型試驗(yàn)比較了4種主要茶黃素單體和EGCG的抗氧化活性和預(yù)防羥基自由基誘導(dǎo)的DNA損傷效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TFDG在清除H2O2和羥基自由基方面活性最高，而TF2A和TF2B次之，TF1的活性最低，說(shuō)明沒食子酰基在清除H2O2和羥基自由基活性方面具有決定作用，而且根據(jù)反應(yīng)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)推測(cè)A環(huán)可能是H2O2氧化體系中形成反應(yīng)產(chǎn)物的起始位點(diǎn)。

1.3 激活機(jī)體抗氧化體系

Yang等[15]研究發(fā)現(xiàn)人胚肺成纖維細(xì)胞HPF-1細(xì)胞經(jīng)TFDG預(yù)處理2 h后可顯著提高細(xì)胞對(duì)自由基損傷的抵抗能力。小鼠腹膜巨噬細(xì)胞或人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)TFDG預(yù)處理后，可以有效減少細(xì)胞內(nèi)Ox-LDL的產(chǎn)生，而且TFDG預(yù)處理還可以顯著減少巨噬細(xì)胞超氧化物的產(chǎn)生以及螯合鐵離子[16]。

2 抗癌作用

近年來(lái)，癌癥已成為危害人類生命健康的主要疾病之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，癌癥治療一直是醫(yī)藥研究領(lǐng)域亟待解決的難題[17]。TFDG在直接抑制癌細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡、使癌細(xì)胞發(fā)生周期阻滯、氧化應(yīng)激、抑制血管發(fā)生、聯(lián)合用藥以及代謝產(chǎn)物抗癌等方面，通過(guò)多層次多靶點(diǎn)發(fā)揮抗癌作用。Wang等[18-19]研究發(fā)現(xiàn)TFDG對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞株、肺癌A549細(xì)胞株、食道癌細(xì)胞株KYSE 150和KYSE 510等多種癌細(xì)胞增殖均具有顯著的抑制作用。雄激素是前列腺癌發(fā)生的起始要素，TFDG通過(guò)抑制雄激素受體的表達(dá)，阻止雄激素與其受體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)抑制前列腺癌細(xì)胞系LNCaP生長(zhǎng)[20]。芳香化酶可催化雄烯二酮轉(zhuǎn)化為雌酮，通過(guò)調(diào)控雌激素的可用性促進(jìn)激素依賴性乳腺癌的生長(zhǎng)。TFDG在體外試驗(yàn)[21]中均具有較強(qiáng)的抑制芳香化酶活性，同時(shí)TFDG還可作為一種HER2/neu酪氨酸磷酸酶抑制劑抑制雌激素非依賴性乳腺癌細(xì)胞系MCF-7的增殖。Schuck等[22]應(yīng)用體外細(xì)胞試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，TFDG通過(guò)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激作用促使人口腔鱗癌細(xì)胞系HSC-2細(xì)胞凋亡。TFDG也可通過(guò)抑制血管發(fā)生具有抗癌作用，人皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞株經(jīng)TFDG預(yù)處理后，通過(guò)抑制癌細(xì)胞表皮生長(zhǎng)因子(EGF)受體和血小板衍生因子(PDGF)受體自體磷酸化，阻斷EGF與受體結(jié)合的作用，抑制促有絲分裂信號(hào)的傳導(dǎo)[23]。Gao等[24]也研究發(fā)現(xiàn)，在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞模型和雞胚絨毛尿囊膜模型中TFDG通過(guò)下調(diào)HIF-1α和VEGF因子抑制人卵巢癌細(xì)胞系OVCAR-3誘導(dǎo)的血管生成。抑制DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3a(DNMT3a)是治療癌癥的一種有效方法。體外試驗(yàn)[25]顯示TFDG具有有效的DNMT3a抑制作用并呈現(xiàn)合理的藥代動(dòng)力學(xué)特征可用于防治前列腺癌。對(duì)于結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT-116生長(zhǎng)的抑制作用，TFDG可將癌細(xì)胞周期阻滯在G1期。同時(shí)，TFDG還可以通過(guò)降低癌細(xì)胞促癌蛋白因子Bcl-xL的表達(dá)和增加抑癌蛋白因子Bax的表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡[26]。TFDG還可與其他藥物聯(lián)用增強(qiáng)抗癌效果，對(duì)于人肺癌細(xì)胞系SPC-A-1和食道癌細(xì)胞系Eca-109，VC和TFDG的協(xié)同作用可增強(qiáng)對(duì)兩種癌細(xì)胞的抑制效果，該作用涉及半胱天冬酶-3和-9的活化。TFDG和VC分別激活絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)途徑，并且兩種化合物在不同的癌細(xì)胞中激活不同的MAPK亞族[27]。TFDG和VC的協(xié)同抑制作用使肺癌細(xì)胞SPC-A-1的細(xì)胞周期停滯在G0/G1期[28]。Pan等[29-30]應(yīng)用TFDG和順鉑聯(lián)合作用卵巢癌細(xì)胞，結(jié)果顯示對(duì)A2780/CP70和OVCAR3細(xì)胞株的協(xié)同細(xì)胞毒性，誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡和G1/S期阻滯，下調(diào)癌細(xì)胞中絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶(Akt)磷酸化。經(jīng)TFDG處理可以增加細(xì)胞內(nèi)鉑(Pt)和DNA-Pt加合物的積累以及增強(qiáng)順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞DNA損傷。TFDG通過(guò)降低谷胱甘肽(GSH)水平和上調(diào)銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(CTR1)的蛋白質(zhì)水平來(lái)增加兩種卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。對(duì)于順鉑耐藥的卵巢癌細(xì)胞株A2780/CP70，TFDG通過(guò)內(nèi)外源性凋亡途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，由細(xì)胞周期蛋白B1引起G2細(xì)胞周期停滯。p53蛋白在TFDG誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和G2細(xì)胞周期停滯中發(fā)揮重要作用。TFDG可能通過(guò)Akt/MDM2途徑上調(diào)p53蛋白表達(dá)[31]。也有研究[32]發(fā)現(xiàn)TFDG可通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制卵巢癌細(xì)胞株A2780/CP70和OVCAR-3腫瘤干細(xì)胞的增殖。盡管大量的研究證實(shí)TFDG對(duì)癌細(xì)胞具有抑制增殖和促凋亡的作用。然而，TFDG在一般的培養(yǎng)條件下不穩(wěn)定。Ding等[33]將TFDG經(jīng)不同的前處理后作用于結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116發(fā)現(xiàn)，O-TFDG(TFDG在37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)基中預(yù)處理3 h后再加入96孔板中)比TFDG顯示出更有效的抑制HCT116結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的活性，O-TFDG主要通過(guò)增加p53、p21和活化型半胱天冬酶-3的表達(dá)并將細(xì)胞周期阻滯于G2期，推測(cè)TFDG的降解產(chǎn)物對(duì)抑制癌細(xì)胞增殖起著關(guān)鍵作用。

3 抗炎作用

TFDG可通過(guò)多途徑、多環(huán)節(jié)發(fā)揮抗炎作用，作用機(jī)制包括抗氧化以及對(duì)炎癥因子和炎癥信號(hào)通路的影響，而其獨(dú)特的苯駢卓酚酮結(jié)構(gòu)以及含有的沒食子酰基可能是發(fā)揮抗炎癥作用的必需基團(tuán)[19]。人類慢性疾病如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸道疾病以及過(guò)敏反應(yīng)等多是由慢性炎癥引起[34-35]。脂肪組織中肥厚脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的旁分泌環(huán)路介導(dǎo)與肥胖疾病發(fā)展的慢性炎癥密切相關(guān)。Ko等[36]應(yīng)用小鼠脂肪細(xì)胞3T3-L1和巨噬細(xì)胞Raw264.7 transwell共培養(yǎng)模型發(fā)現(xiàn)，TFDG通過(guò)AMPK依賴性信號(hào)通路阻斷脂肪細(xì)胞的炎癥發(fā)生，并促使炎癥M1型巨噬細(xì)胞向炎癥較輕的M2型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化來(lái)預(yù)防代謝炎癥及肥胖并發(fā)癥的發(fā)生。TFDG具有顯著抑制炎癥巨噬細(xì)胞系RAW264.7中IκB激酶(IKK)活性，并阻止細(xì)胞中IκBα和IκBβ的降解。TFDG對(duì)IKK活性的抑制可通過(guò)直接作用于IKKs或信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中上游事件而發(fā)生。TFDG也可阻斷胞漿部分IκB的磷酸化，抑制NF-κB活性，并抑制誘導(dǎo)型iNOS水平的增加[37-38]。對(duì)于三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生結(jié)腸炎模型，TFDG同樣通過(guò)抑制細(xì)胞中IκBα的降解而下調(diào)NF-κB的活化發(fā)揮抗炎作用[39]。Wu等[40]應(yīng)用體內(nèi)外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，TFDG可抑制脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞c-Jun N端激酶和p38絲裂原活化蛋白激酶的磷酸化，也可抑制佛波醇酯介導(dǎo)的U937和RAW264.7細(xì)胞中TNF-α、IL-1β和IL-6的表達(dá)。同時(shí)，TFDG具有緩解治療脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷的嚴(yán)重程度。周盈等[41]研究發(fā)現(xiàn)IL-1β體外誘導(dǎo)大鼠軟骨細(xì)胞炎性損傷試驗(yàn)中，TFDG預(yù)干擾能明顯改善骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞形態(tài)；上調(diào)軟骨細(xì)胞分子標(biāo)記物Col II mRNA表達(dá)和下調(diào)炎癥因子IL-1β、IL-6 mRNA的表達(dá)；降低炎癥誘導(dǎo)酶環(huán)氧化酶COX-2蛋白表達(dá)量，從而減少炎性介質(zhì)產(chǎn)物的合成，達(dá)到抗炎作用。小鼠體內(nèi)試驗(yàn)[42]也證實(shí)TFDG可通過(guò)抑制NF-κB和MAPK信號(hào)通路的激活緩解類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。牙周病是一種慢性感染性疾病，一系列的免疫炎癥反應(yīng)參與了疾病的病理過(guò)程。Hosokawa等[43]應(yīng)用人牙齦成纖維細(xì)胞(HGFs)模型研究發(fā)現(xiàn)，TFDG通過(guò)阻止c-氨基末端激酶(JNK)、蛋白激酶B(Akt)(Ser473)的磷酸化，來(lái)抑制抑瘤素M(OSM)介導(dǎo)HGFs中CXC趨化因子配體10(CXCL10)的產(chǎn)生發(fā)揮抗炎作用。

4 抗病毒作用

近年來(lái)，大量研究[7]表明TFDG具有抗病毒作用，包括單純皰疹病毒、艾滋病病毒、SARS病毒和丙型肝炎病毒。其作用機(jī)制可能為TFDG能夠直接作用于病毒的特定靶點(diǎn)，抑制病毒的復(fù)制和進(jìn)入宿主細(xì)胞。Oliveira等[44]構(gòu)建非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero細(xì)胞)和人肺癌細(xì)胞株A549模型發(fā)現(xiàn)，TFDG通過(guò)阻礙病毒結(jié)合或穿透細(xì)胞具有抗單純皰疹病毒1(HSV-1)感染作用。TFDG在陰道pH條件下具有穩(wěn)定性，表明其可作為針對(duì)抗單純皰疹病毒感染的潛在藥物。然而，病毒一旦侵入到細(xì)胞內(nèi)，TFDG就失去抗病毒作用。Isaacs等[45]研究發(fā)現(xiàn)，TFDG與乳酸的聯(lián)合應(yīng)用在無(wú)細(xì)胞毒的濃度下可以有效抑制HSV病毒的復(fù)制。在女性生殖道pH 4.5～5.7條件下，TFDG與乳酸聯(lián)合應(yīng)用可完全滅活6種HSV-2臨床分離株和2種HSV-1臨床分離株，但作用于另外4種HSV-1臨床分離株需要達(dá)到相同的滅活效果時(shí)，TFDG的濃度則需要提高2～5倍。將TFDG和乳酸混合物在37 ℃條件下存儲(chǔ)1個(gè)月，在pH 4.5～5.7的范圍內(nèi)仍可保持抗病毒活性。艾滋病是一種免疫缺陷病，由人類免疫缺陷病毒(HIV)引起。目前市場(chǎng)上應(yīng)用的抗HIV藥物只有病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后才能發(fā)揮作用。TFDG則可通過(guò)阻斷HIV-1包膜糖蛋白跨膜亞基gp41介導(dǎo)的膜融合阻止HIV-1進(jìn)入靶細(xì)胞。其抗病毒作用機(jī)制為TFDG結(jié)合到病毒跨膜亞基gp41的N-末端高度保守的疏水區(qū)域上阻礙gp41六螺旋束的形成，而且含有沒食子酰基的兒茶素更具有潛在的預(yù)防和治療HIV病毒感染的作用[46-47]。嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)是一種由SARS冠狀病毒引起的急性呼吸道傳染病。3C樣蛋白酶被認(rèn)為是SARS冠狀病毒感染宿主細(xì)胞復(fù)制過(guò)程的關(guān)鍵酶。Chen等[48]研究發(fā)現(xiàn)，在篩選的720種化合物中TFDG對(duì)3C樣蛋白酶的抑制作用最顯著，推測(cè)TFDG分子結(jié)構(gòu)中連接在C-3’位置的沒食子酰基可能是與3C樣蛋白酶活性部位相互作用的重要基團(tuán)。對(duì)于丙型肝炎病毒(HCV)，在感染的早期階段TFDG以劑量依賴性方式抑制HCV感染，其作用機(jī)理是直接作用于病毒顆粒并能抑制細(xì)胞間的擴(kuò)散。而且，TFDG與最廣泛使用的抗HCV藥聯(lián)合應(yīng)用可起到增效劑的作用[49]。

5 防治代謝綜合征

肥胖是代謝綜合征發(fā)生的主要誘因，因此控制體重有助于預(yù)防代謝綜合征的發(fā)生[50-51]。Ko等[52]研究發(fā)現(xiàn)TFDG可通過(guò)激活A(yù)MPK途徑減少脂肪細(xì)胞中三酰甘油的積累。此外，通過(guò)AMPK-FoxO3A-MnSOD途徑TFDG可以減少ROS的產(chǎn)生，并減弱成熟脂肪細(xì)胞中胰島素誘導(dǎo)的肥胖。纖溶酶原激活因子抑制劑-1(PAI-1)的失活能夠緩解動(dòng)脈粥樣硬化和減輕肥胖患者的體重。體外細(xì)胞試驗(yàn)[53-54]研究發(fā)現(xiàn)，TFDG對(duì)PAI-1具有強(qiáng)有力的抑制作用并呈濃度依賴性。胰脂肪酶在脂肪代謝中起著關(guān)鍵作用，也是抗肥胖的有效目標(biāo)。TFDG具有顯著的抑制脂肪酶活性且表現(xiàn)出對(duì)底物濃度的混合抑制作用，能減少三酰甘油的吸收，抑制餐后高三酰甘油血癥。計(jì)算機(jī)輔助分子對(duì)接技術(shù)顯示TFDG與胰脂肪酶中氨基酸殘基Asn263和Asp206結(jié)合，形成與活性位點(diǎn)相鄰的口袋，擾亂關(guān)鍵催化殘基His264的質(zhì)子化[55-56]。

在中國(guó)，心血管疾病的發(fā)病人數(shù)呈逐年增加趨勢(shì)，死亡率居各種疾病的首位[57]。Lorenz等[58]構(gòu)建主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞模型評(píng)價(jià)了TFDG對(duì)預(yù)防心血管疾病的作用。結(jié)果表明，TFDG具有顯著的增加內(nèi)皮細(xì)胞NO合酶(eNOS)活性以及促進(jìn)血管舒張能力。新生大鼠心肌細(xì)胞經(jīng)TFDG預(yù)處理1 h后再用H2O2誘導(dǎo)氧化應(yīng)激30 min，通過(guò)檢測(cè)24 h后乳酸脫氫酶的釋放量，表明TFDG能有效保護(hù)心肌細(xì)胞，但TFDG預(yù)處理心肌細(xì)胞時(shí)間越長(zhǎng)保護(hù)效果越差。用二氯熒光素加載心肌細(xì)胞，在誘導(dǎo)氧化應(yīng)激30 min后用TFDG處理，活性氧的細(xì)胞內(nèi)水平顯著降低[59]。高血壓患者與同型半胱氨酸(Hcy)水平升高有關(guān)。Hcy可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。Cheang等[60]構(gòu)建Hcy對(duì)體外培養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞預(yù)先與TFDG孵育，可降低ER應(yīng)激相關(guān)蛋白ATF3，磷酸化的eIF2α(Ser52)和裂解的ATF6的表達(dá)，逆轉(zhuǎn)ROS產(chǎn)生，明顯改善Hcy誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞舒張功能的損害。2型糖尿病是一組以慢性血糖水平增高為特征的代謝性疾病，在長(zhǎng)期高血糖水平下可引起各種并發(fā)癥，所以控制餐后血糖水平是預(yù)防高血糖的有效方法[61-62]。α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶是調(diào)節(jié)食物來(lái)源血糖的關(guān)鍵酶，其抑制劑是一類調(diào)控餐后血糖水平作用獨(dú)特的口服降糖藥物。Matsui等[63]研究發(fā)現(xiàn)TFDG優(yōu)先抑制麥芽糖酶而不是蔗糖酶。Miao等[64]應(yīng)用體外試驗(yàn)和計(jì)算機(jī)輔助分子對(duì)接技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，4種茶黃素單體中TFDG對(duì)α-淀粉酶抑制活性最強(qiáng)。茶黃素的抑制活性取決于其分子結(jié)構(gòu)上的羥基和沒食子?；ㄟ^(guò)氫鍵和π—π鍵與α-淀粉酶的活性中心氨基酸殘基相互作用。與非酯型茶黃素相比，酯型茶黃素與α-淀粉酶具有較強(qiáng)的結(jié)合力。

6 其他活性作用

除具有上述各種生物活性外，TFDG還具有抗菌、抗過(guò)敏、促進(jìn)骨細(xì)胞生長(zhǎng)以及防治阿爾茨海默病等多種活性。在抑制牙周病原細(xì)菌試驗(yàn)[65]中發(fā)現(xiàn)，TFDG可增強(qiáng)甲硝唑和四環(huán)素對(duì)牙齦卟啉單胞菌的抗菌作用，也具有誘導(dǎo)口腔上皮細(xì)胞增加3種抗菌肽hBD-1、hBD-2和hBD-4的分泌作用。產(chǎn)氣莢膜梭菌是一種重要的人獸共患病的病原體，研究[66]發(fā)現(xiàn)高濃度的TFDG對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌具有強(qiáng)效的細(xì)胞損傷作用?？莶菅挎邨U菌形成休眠和抗應(yīng)激孢子，是食品工業(yè)面臨的一個(gè)日益嚴(yán)重的問題。Pandey等[67]研究發(fā)現(xiàn)，TFDG對(duì)枯草芽孢桿菌孢子發(fā)芽和細(xì)胞倍增時(shí)間具有一定的抑制作用。對(duì)于TFDG的抗過(guò)敏作用，Yoshino等[68]研究了TFDG對(duì)惡唑酮誘導(dǎo)的雄性ICR小鼠IV型過(guò)敏的預(yù)防作用。0.2 mg/耳TFDG經(jīng)皮給藥顯示出對(duì)小鼠IV型過(guò)敏癥的顯著預(yù)防作用?？诜FDG劑量為50 mg/kg顯示出對(duì)小鼠IV型過(guò)敏癥的預(yù)防效果，并可防止IV型過(guò)敏小鼠血清和/或耳中IL-12、干擾素-γ和TNF-α等促炎細(xì)胞因子的表達(dá)。而且，口服TFDG可提高具有過(guò)敏癥狀小鼠的血清抗氧化活性。對(duì)于預(yù)防骨質(zhì)疏松癥，Hu等[69]發(fā)現(xiàn)TFDG通過(guò)抑制ERK信號(hào)通路及其下游因子NFATc1和c-FOS，來(lái)抑制破骨細(xì)胞生成和破骨相關(guān)基因的表達(dá)，實(shí)現(xiàn)小鼠顱骨模型鈦顆粒誘導(dǎo)的骨溶解保護(hù)作用。此外，TFDG還可通過(guò)抑制DNA甲基化消除骨質(zhì)疏松癥中骨質(zhì)流失[70]。有研究[71]認(rèn)為腦內(nèi)β-淀粉樣蛋白(Amyloid-β，Aβ)大量積累是造成阿爾茨海默癥的罪魁禍?zhǔn)?。張靜等[72]通過(guò)模擬生理?xiàng)l件體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，TFDG能夠抑制β-淀粉樣蛋白1-42(Aβ42)的聚集纖維化和因Aβ42誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞活力下降及氧化損傷，對(duì)阿爾茨海默病具有一定的防治作用。蛋白質(zhì)老年色素?zé)晒馕镔|(zhì)是一種生物體衰老的標(biāo)志物，隨著年齡的增長(zhǎng)而增加。TFDG不僅可以抑制羰基應(yīng)激產(chǎn)生的蛋白質(zhì)老年色素?zé)晒馕镔|(zhì)，而且能夠抑制蛋白質(zhì)的聚集化產(chǎn)生的β-sheet結(jié)構(gòu)，具有潛在的延緩衰老和預(yù)防阿爾茨海默病等神經(jīng)退行性疾病的作用[73]。糖尿病白內(nèi)障是全球眼病致盲的主要原因。牛麗等[74]構(gòu)建高濃度葡萄糖誘導(dǎo)人晶狀體上皮細(xì)胞(HLECs)損傷模型，經(jīng)TFDG干預(yù)后，細(xì)胞內(nèi)iNOS的活性降低，減少了NO的合成，從而提高模型細(xì)胞的存活率。

7 展望

綜上所述，TFDG具有多種生物學(xué)功能和諸多分子靶點(diǎn)。然而，在人體試驗(yàn)研究中受試者口服高濃度的茶黃素混合物(700 mg)后，人體血液中TF1濃度在2 h后達(dá)到峰值僅為1.0 mg/L，尿液中的TF1濃度在2 h后的峰值也僅為4.2 mg/L，同時(shí)均未檢測(cè)到TF2A、TF2B和TFDG的存在[75]。這些結(jié)果表明茶黃素只有很少部分以原始結(jié)構(gòu)被人體吸收，大多數(shù)茶黃素并未被人體吸收或者在消化環(huán)境中被轉(zhuǎn)換成其他活性成分。人體胃腸道消化環(huán)境復(fù)雜，多酚類天然活性成分進(jìn)入人體胃腸道消化環(huán)境后不可避免的會(huì)發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，尤其在小腸弱堿性的環(huán)境中極易發(fā)生降解反應(yīng)[76-77]。因此，研究TFDG胃腸消化代謝物變化及吸收機(jī)制對(duì)明確其藥理作用具有重要的研究意義。同時(shí)，腸道菌群與機(jī)體健康密切相關(guān)，并且它們具有巨大的代謝潛能，能將膳食多酚轉(zhuǎn)化為微生物代謝產(chǎn)物，多酚也可以影響腸道微生物的菌群結(jié)構(gòu)和代謝通路[78-81]。TFDG通過(guò)腸道菌群作用生成的代謝衍生物，可能是真正在體內(nèi)發(fā)揮生理功能的活性物質(zhì)。研究TFDG進(jìn)入大腸中與腸道微生態(tài)的互作效應(yīng)機(jī)制，對(duì)深入解析TFDG在體內(nèi)發(fā)揮生物活性的作用機(jī)理，也具有重要學(xué)術(shù)意義。此外，針對(duì)TFDG主要在體外試驗(yàn)中顯示出極佳的生物活性，但生物利用度差的缺點(diǎn)。因此，通過(guò)分子結(jié)構(gòu)修飾或者設(shè)計(jì)制備藥物輸送載體來(lái)提高其生物利用度和增強(qiáng)其生物活性[82]，對(duì)于TFDG的實(shí)際應(yīng)用和產(chǎn)品開發(fā)也具有重要研究?jī)r(jià)值。