Xpert MTB/RIF試劑盒檢測(cè)痰標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌和利福平耐藥的應(yīng)用評(píng)價(jià)

安東成 王 杰 張 冬 周 潔 高 陽(yáng)

（大連市結(jié)核病醫(yī)院，遼寧 大連 116037）

全球約有20億人感染了結(jié)核分枝桿菌，每年有200萬(wàn)人因結(jié)核病死亡。結(jié)核分枝桿菌主要存在于肺部，呼吸道感染是主要的傳播途徑，是一種傳染性很強(qiáng)的空氣傳播疾病。傳統(tǒng)檢測(cè)結(jié)核菌方法有涂片抗酸染色法和固體培養(yǎng)法。涂片抗酸染色法用時(shí)較短但陽(yáng)性率較低。固體培養(yǎng)法所需時(shí)間較長(zhǎng)，且在菌量較低時(shí)容易漏檢。Xpert MTB/RIF試劑盒是檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群DNA和利福平耐藥相關(guān)的rpoB基因突變，一種巢式實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的體外診斷試劑，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程只需2.5小時(shí)，并能對(duì)一線抗結(jié)核藥利福平進(jìn)行耐藥分析。

1 資料與方法

1.1 痰標(biāo)本：108份痰標(biāo)本來(lái)自2019年1月至2019年2月大連市結(jié)核病醫(yī)院住院患者，所有患者均經(jīng)臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查、影像學(xué)檢查等手段或經(jīng)抗結(jié)核藥物治療有效而證實(shí)（每份痰標(biāo)本量約為5 mL，其中痰涂片需0.05 mL、Xpert MTB/RIF檢測(cè)需1 mL、羅氏培養(yǎng)需1～2 mL）。

1.2 痰涂片檢測(cè)：痰涂片：挑取痰標(biāo)本中可疑部分約0.05 mL，進(jìn)行痰涂片抗酸染色[1]，

1.3 Xpert MTB/RIF檢測(cè)：無(wú)菌吸管吸取1ml痰標(biāo)本并加入2 mL樣本處理試劑于無(wú)菌離心管中，蓋緊蓋子，在渦旋振蕩20 s，樣本在室溫下靜置15 min，樣本充分液化后，使用無(wú)菌移液管，將液化的樣品吸入，直至彎月面在移液管的最低標(biāo)記之上。打開(kāi)檢測(cè)匣蓋子，將處理后的樣品由檢測(cè)匣的加樣孔緩慢加入，關(guān)閉檢測(cè)匣蓋子。將檢測(cè)匣放入GeneXpert系統(tǒng)儀器中進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果判讀：Xpert檢測(cè)對(duì)MTB檢出的結(jié)果劃分為高（Ct范圍＜16）、中（Ct范圍16～22）、低（Ct范圍22～28）、極低（Ct范圍＞28）。MTB檢出情況下對(duì)利福平耐藥的檢測(cè)結(jié)果分為“利福平耐藥檢出”和“利福平耐藥未檢出”。陰性結(jié)果為未檢出。

1.4 羅氏培養(yǎng)檢測(cè)：羅氏培養(yǎng)：按照《分枝桿菌分離培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序及質(zhì)量保證手冊(cè)》[2]中的相關(guān)要求，嚴(yán)格操作，完成后置于37 ℃培養(yǎng)箱中孵育。6～8周后，對(duì)培養(yǎng)陽(yáng)性菌種進(jìn)行比例法藥敏試驗(yàn)及菌種鑒定（PNB）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：比較Xpert MTB/RIF檢測(cè)與羅氏培養(yǎng)+比例法藥敏鑒定符合率。

2 結(jié)果

2.1 Xpert檢測(cè)與痰涂片結(jié)果比較：108份中涂片陽(yáng)性27份，涂片陰性81份。涂片陽(yáng)性樣本中Xpert檢測(cè)陽(yáng)性26份，1份陰性；涂片陰性樣本中Xpert檢測(cè)陽(yáng)性17份，64份陰性。Xpert檢測(cè)與痰涂片檢測(cè)的符合率為83.3%（79/108），見(jiàn)表1。

表1 Xpert與涂片結(jié)果對(duì)比

2.2 Xpert檢測(cè)與羅氏培養(yǎng)結(jié)果比較：108份中羅氏培養(yǎng)陽(yáng)性43份，羅氏培養(yǎng)陰性65份。羅氏培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本中Xper陽(yáng)性41份，2份陰性，羅氏培養(yǎng)陰性樣本中Xper陽(yáng)性13份，52份陽(yáng)性。Xper檢測(cè)與羅氏培養(yǎng)符合率為86.1%（93/108），見(jiàn)表2。

表2 Xper與羅氏培養(yǎng)結(jié)果對(duì)比

2.3 Xper檢測(cè)與羅氏培養(yǎng)+菌種鑒定結(jié)果比較：羅氏培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本43份，菌種鑒定41份為結(jié)核分枝桿菌，2份為非結(jié)核分枝桿菌。41份菌種鑒定結(jié)核分枝桿菌Xper檢測(cè)41份；2份非結(jié)核分枝桿菌Xper檢測(cè)均為陰性。Xper檢測(cè)與羅氏培養(yǎng)+菌種鑒定符合率為100%（43/43），見(jiàn)表3。

表3 Xper與培養(yǎng)+菌種結(jié)果對(duì)比

2.4 Xpert MTB/RIF檢測(cè)與比例法藥敏利福平耐藥結(jié)果比較：41份結(jié)核分枝桿菌中，Xpert MTB/RIF檢測(cè)利福平敏感36份，耐藥5份。比例法藥敏利福敏感36份，耐藥5份。36份Xpert MTB/RIF檢測(cè)利福平敏感，比例法藥敏利福敏感36份；5份Xpert MTB/RIF檢測(cè)利福平耐藥，比例法藥敏利福耐藥5份。Xpert MTB/RIF檢測(cè)與比例法藥敏利福平耐藥結(jié)果符合率為100%（41/41），見(jiàn)表4。

表4 Xper與比例法藥敏果對(duì)比

3 討論

108份痰標(biāo)本三種方法對(duì)分枝桿菌檢出率分別為：痰涂片檢測(cè)陽(yáng)性率25.0%（27/108）；羅氏培養(yǎng)檢測(cè)陽(yáng)性率39.8%（43/108）；Xper檢測(cè)陽(yáng)性率50.0%（54/108）。剔除2例非結(jié)核分枝桿菌后痰涂片檢測(cè)陽(yáng)性率25.0%（27/108），羅氏培養(yǎng)檢測(cè)陽(yáng)性率37.8%（41/108），Xper檢測(cè)陽(yáng)性率50.0%（54/108）。Xper檢測(cè)陽(yáng)性率比痰涂片高25.0%，比羅氏培養(yǎng)高12.2%，在檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌方面Xper檢測(cè)要高于痰涂片檢測(cè)及羅氏培養(yǎng)檢測(cè)。在痰涂片檢測(cè)中，不同的檢驗(yàn)人員操作可能會(huì)略有差異，經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)人員占優(yōu)，Xper檢測(cè)嚴(yán)格按操作規(guī)范即可。

實(shí)驗(yàn)中Xper檢測(cè)54例陽(yáng)性，羅氏培養(yǎng)檢測(cè)41例陽(yáng)性（已剔除2例NTM），13例不符。對(duì)13例樣本進(jìn)行分析，其中Xper檢測(cè)分級(jí)6例為極低含菌量，5例為低含菌量，2例為中含菌量。5例低含菌量中1例羅氏培養(yǎng)出現(xiàn)污染。10例樣本（6例極低含菌量，4例低含菌量）說(shuō)明隨著菌量的下降，羅氏培養(yǎng)檢出率降低，與相關(guān)報(bào)道相符[3]。2例為中含菌量羅氏培養(yǎng)檢測(cè)為陰性，可能與住院患者用藥后，結(jié)核菌分枝桿菌死亡后排出體外，Xper檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群DNA可以檢測(cè)，而羅氏培養(yǎng)只能檢測(cè)活的結(jié)核分枝桿菌，未檢出。

綜上所述，羅氏培養(yǎng)陽(yáng)性率要高于痰涂片，Xper檢測(cè)陽(yáng)性率要高于羅氏培養(yǎng)，這與相關(guān)報(bào)道一致[4-5]。利福平對(duì)巨噬細(xì)胞內(nèi)外的結(jié)核分枝桿菌均有快速殺菌作用，特別是對(duì)C菌群有獨(dú)特的殺滅菌作用。異煙肼與利福平聯(lián)用可顯著縮短療程。經(jīng)與Xpert MTB/RIF檢測(cè)與比例法藥敏利福平耐藥結(jié)果比較，結(jié)果一致，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)室對(duì)于結(jié)核病診斷及對(duì)利福平耐藥的患者篩查具有一定意義和應(yīng)用前景[6]。Xper檢測(cè)具有較高的成本，對(duì)患者有一定的經(jīng)濟(jì)壓力?？菇Y(jié)核治療需聯(lián)合用藥Xper檢測(cè)目前只能檢測(cè)利福平一種藥耐藥情況也是一種局限。