龍眼果肉多糖超微粉碎-酶解提取工藝優(yōu)化及其免疫活性

劉慧君 黃 菲 張瑞芬 董麗紅 鄧媛元 劉 磊 魏振承 張名位*

（1 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院 廣州510642 2 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部功能食品重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣東省農(nóng)產(chǎn)品加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 廣州510610）

龍眼俗稱(chēng)“桂圓”，是傳統(tǒng)藥食兩用水果，據(jù)《神農(nóng)本草經(jīng)》、《本草綱目》等古醫(yī)書(shū)記載，其具有養(yǎng)血安神、益智寧心、補(bǔ)益心脾、壯陽(yáng)益氣、延年益壽等功效[1]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，水溶性多糖是其果肉的主要活性成分之一[2-3]，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化和抗炎等多種功能活性[4-6]?；邶堁凵锘钚詸C(jī)制的研究及其開(kāi)展精深加工的需要，開(kāi)展龍眼果肉多糖的提取技術(shù)研究顯得至關(guān)重要。

超微粉碎技術(shù)是近期出現(xiàn)的一種提取技術(shù)，其可以將原料粉碎至1nm～100μm 粒徑的微小顆粒，從而改變?cè)媳砻娼Y(jié)構(gòu)，增加原料與提取劑的接觸面積，實(shí)現(xiàn)高效提取。超微粉碎因具有高效、節(jié)能等特點(diǎn)而逐漸被應(yīng)用于功能性成分的提取制備。有研究表明超微粉碎輔助提取多糖能改變多糖的分子質(zhì)量、化學(xué)組成等，從而影響其生物活性[7-8]，然而，超微粉碎技術(shù)對(duì)龍眼果肉多糖的理化性質(zhì)及其免疫調(diào)節(jié)活性的影響尚鮮見(jiàn)報(bào)道。此外，生物酶解技術(shù)因具有特異性、高效性被應(yīng)用于活性多糖的提取。易陽(yáng)[9]和賀寅[10]等分別優(yōu)化建立了超聲波-酶解、酶法提取龍眼多糖的工藝，而對(duì)生物酶解與物理的超微粉碎相結(jié)合后，兩者對(duì)龍眼多糖的得率、理化性質(zhì)及其免疫活性的影響尚不知曉。本研究比較了熱水浸提法、超微粉碎提取法和超微粉碎-酶法提取技術(shù)對(duì)龍眼果肉多糖的提取率、理化性質(zhì)以及免疫活性的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

龍眼品種“儲(chǔ)良”，由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)研究所提供，于2016年9月采自其實(shí)驗(yàn)果園。新鮮龍眼采用熱風(fēng)干燥得到龍眼干。

葡萄糖醛酸、葡聚糖、葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)品，甲基噻唑基四唑（MTT），纖 維 素 酶（Cellulase from Aspergillus niger，Sigma-22178），脂多糖（LPS）和青鏈霉素，購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司；間羥基聯(lián)苯，購(gòu)自日本TCI 公司；NO 試劑盒、考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒，購(gòu)自南京建成科技有限公司；TNF-α、IL-6 和IL-1β 酶聯(lián)免疫試劑盒，購(gòu)自深圳欣博盛生物科技有限公司；其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7 由中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù)提供，本實(shí)驗(yàn)室繼代培養(yǎng)。

UV-1800 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本島津有限公司；振動(dòng)式細(xì)胞級(jí)超微粉碎機(jī)，濟(jì)南達(dá)微機(jī)械有限公司；冷凍干燥儀，東京理化器械株式會(huì)社；GHRH-20 熱泵干燥機(jī)，廣東省農(nóng)業(yè)機(jī)械研究所；Eyelan-1100 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，東京理化器械株式會(huì)社；Infinite Pro 200 酶標(biāo)儀，瑞士Tecan 公司；氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國(guó)Agilent 公司；AR1500EX 流變儀，美國(guó)TA 公司；Acquity APC超高效聚合物色譜系統(tǒng)，美國(guó)Waters 公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 龍眼果肉多糖的提取 將龍眼干用80%的乙醇浸泡5 次脫去小分子糖后50 ℃烘干72 h，超微粉碎處理后，按料液比1 ∶40（mg/mL）加入蒸餾水，勻漿，調(diào)節(jié)pH 值，添加適量纖維素酶，浸提一定時(shí)間后，升溫至90 ℃滅酶5 min 后過(guò)濾，得到龍眼多糖提取液。

提取率的計(jì)算：多糖提取率=（提取液中總糖質(zhì)量-提取液中還原糖質(zhì)量）/龍眼干質(zhì)量×100%?？偺呛坎捎帽椒?硫酸法，還原糖含量采用DNS法。

1.2.2 龍眼果肉多糖提取響應(yīng)面的工藝優(yōu)化試驗(yàn)本試驗(yàn)在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，依據(jù)Box-Benhnken 中心組合原則，分別選取超微時(shí)間、酶添加量和提取時(shí)間3 個(gè)參數(shù)，采用3 因素3 水平的響應(yīng)面分析法，以多糖提取率為響應(yīng)值（Y），以超聲時(shí)間（X1）、酶添加量（X2）和提取時(shí)間（X3）為自變量，具體設(shè)計(jì)見(jiàn)表1，試驗(yàn)方案及結(jié)果見(jiàn)表2。

1.2.3 不同提取方法的對(duì)比試驗(yàn)

1.2.3.1 熱水提取法 將乙醇浸泡后的龍眼干按照文獻(xiàn)[11]進(jìn)行熱水浸提，采用的提取條件為：料液比1∶40（mg/mL），溫度50 ℃，浸提時(shí)間90 min。將獲得的多糖提取液濃縮后用Sevag 法脫蛋白后，超濾（Mw = 3 ku）處理30 min，用95%乙醇醇沉 （乙醇終體積分?jǐn)?shù)為80%），4 ℃冰箱靜置12 h后收集沉淀，將沉淀凍干后得龍眼多糖記為L(zhǎng)P。

表1 響應(yīng)面因素水平表Table 1 Response surface analysis factors and levels

1.2.3.2 超微粉碎輔助提取 將乙醇浸泡后的龍眼干超微粉碎2 min 預(yù)處理后再按照上述進(jìn)行熱水浸提、脫蛋白、超濾、乙醇沉淀、凍干得到龍眼果肉多糖，記為L(zhǎng)P-S。

1.2.3.3 超微-酶解提取 將乙醇浸泡后的龍眼干超微粉碎2 min 預(yù)處理后采用響應(yīng)面優(yōu)化的最佳條件提取龍眼多糖溶液，再將多糖溶液按照上述方法脫蛋白、超濾、乙醇沉淀、凍干得到龍眼果肉多糖，記為L(zhǎng)P-SE。

1.2.4 不同提取工藝制備的龍眼果肉多糖的理化性質(zhì)分析

1.2.4.1 龍眼多糖的得率 多糖得率=提取得到的龍眼果肉多糖凍干粉質(zhì)量/提取所用龍眼干干基質(zhì)量×100%。

1.2.4.2 基本成分 中性糖含量測(cè)定：采用苯酚-硫酸法。還原糖含量測(cè)定：采用DNS 法。糖醛酸含量測(cè)定：采用Blumenkrantz 和Asboe-Hanaen 的方法[12]。蛋白質(zhì)含量測(cè)定：采用考馬斯亮藍(lán)蛋白試劑盒測(cè)定蛋白含量。

單糖組成：?jiǎn)翁菢?biāo)準(zhǔn)品的衍生化：等量稱(chēng)取各類(lèi)單糖標(biāo)準(zhǔn)品共10 mg，加入10 mg 的鹽酸羥胺，再加1 mL 吡啶，混勻后于90 ℃反應(yīng)0.5 h，冷卻后再加1 mL 乙酸酐，于90 ℃繼續(xù)反應(yīng)0.5 h。冷卻至室溫后，加入少量無(wú)水Na2SO4，混勻后過(guò)0.2 μm 濾膜，然后進(jìn)行GC-MS 分析。

龍眼果肉多糖的水解：稱(chēng)取多糖樣品10 mg于安培瓶中，加入2 mL 4 mol/L 的三氟乙酸后，酒精噴燈封口。在110 ℃水解6 h 后，50 ℃減壓蒸干。加入適量甲醇復(fù)溶后再蒸干，重復(fù)3 次。然后按照標(biāo)準(zhǔn)品衍生化方法進(jìn)行衍生化，進(jìn)行GC-MS分析。其結(jié)果根據(jù)單糖標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間進(jìn)行分析，并通過(guò)峰面積比計(jì)算各單糖物質(zhì)的量分?jǐn)?shù)。氣質(zhì)色譜條件：HP-1701 毛細(xì)管柱 （30 m × 0.25 m，0.33 μm）；檢測(cè)器溫度：290 ℃；汽化室溫度：260 ℃，柱溫初溫為190 ℃，以2 ℃/min 程序升溫至230 ℃，保持2 min，再以5 ℃/min 程序升溫至240 ℃，保持2 min。載氣為N2，流速是1 mL/min；不分流，進(jìn)樣量是1 μL。

1.2.4.3 分子質(zhì)量分布 將龍眼果肉多糖溶液（5 mg/mL）過(guò)0.45 μm 水相濾膜，經(jīng)超高效聚合物色譜儀（APC）檢測(cè)分子質(zhì)量分布。采用葡聚糖標(biāo)品（5.2，11.6，23.8，48.6，148，273，410，668 ku）建 立標(biāo)準(zhǔn)曲線。色譜條件為：色譜柱選用ACQUITY APCTM AQ 450、ACQUITY APCTM AQ 125 和ACQUITY APCTM AQ 45 三根串聯(lián)，流動(dòng)相為50 mmol/L 硫酸鈉，流速為0.7 mL/min，檢測(cè)器為示差檢測(cè)器，柱溫箱和檢測(cè)器溫度控制在35 ℃，進(jìn)樣量為20 μL。

1.2.4.4 黏度及溶解性 黏度：參考文獻(xiàn)報(bào)道[13]，將龍眼果肉多糖配制成20 mg/mL 的多糖溶液，用流變儀測(cè)定表觀黏度，測(cè)定參數(shù)為：溫度25 ℃，剪切速率0.1/s，保持3 min，測(cè)定采用流體模式，檢測(cè)表觀黏度。測(cè)定重復(fù)3 次。

溶解性：參考文獻(xiàn)[14]報(bào)道，取一定質(zhì)量龍眼果肉多糖，按50 mg/mL 稱(chēng)量加水溶解，常溫渦旋振蕩30 min，10 000 r/min 離心10 min，取上清1 mL，上清與殘?jiān)婵崭稍?，稱(chēng)量干燥后上清質(zhì)量，計(jì)算溶解性，以每mL 中溶解的龍眼果肉多糖質(zhì)量表征其溶解性。測(cè)定重復(fù)3 次。

1.2.5 免疫調(diào)節(jié)作用分析

1.2.5.1 龍眼果肉多糖對(duì)巨噬細(xì)胞毒性分析RAW264.7 巨噬細(xì)胞經(jīng)DMEM 完全培養(yǎng)液 （含10%胎牛血清、1%雙抗）調(diào)整濃度為5×105cells/mL，以100 μL/孔加入96 孔板中，置于培養(yǎng)箱中貼壁培養(yǎng)6 h 后，吸除上清培養(yǎng)液除去未貼壁細(xì)胞。每孔加入含有龍眼果肉多糖的培養(yǎng)液100 μL（多糖終質(zhì)量濃度為0，25，50，100，150，200，300，400 μg/mL，每個(gè)濃度設(shè)6 個(gè)復(fù)孔），另設(shè)完全培養(yǎng)基為空白對(duì)照。培養(yǎng)板于培養(yǎng)箱中孵育24 h 后，按照MTT 試劑盒操作，檢測(cè)每孔OD 值，計(jì)算巨噬細(xì)胞的存活率。

細(xì)胞存活率（%）= （試驗(yàn)孔OD-對(duì)照孔OD）/對(duì)照孔OD×100

1.2.5.2 龍眼果肉多糖刺激巨噬細(xì)胞分泌NO 及細(xì)胞因子 在明確龍眼果肉多糖對(duì)巨噬細(xì)胞無(wú)毒性的濃度范圍內(nèi)，分析不同提取方式獲得的龍眼果肉多糖對(duì)巨噬細(xì)胞分泌NO 和細(xì)胞因子的影響。5×105cells/mL 的巨噬細(xì)胞以100 μL/孔加入96 孔培養(yǎng)板中，置于培養(yǎng)箱中貼壁培養(yǎng)6 h 后，吸除上清培養(yǎng)液除去未貼壁細(xì)胞。每孔加入含樣品的培養(yǎng)液100 μL （0，25，50 和100 μg/mL，LPS 終質(zhì)量濃度為1 ng/mL，每個(gè)濃度設(shè)4 個(gè)復(fù)孔）。另加100 μL 培養(yǎng)液的細(xì)胞孔作為空白對(duì)照。培養(yǎng)板于培養(yǎng)箱中孵育24 h 后，取100 μL 上清液，采用小鼠NO 試劑盒和IL-1β、IL-6 或TNF-α 酶聯(lián)免疫吸附試劑盒，按使用說(shuō)明測(cè)定巨噬細(xì)胞分泌NO 及細(xì)胞因子表達(dá)水平。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)分析 采用 SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，并以S-N-K 檢驗(yàn)比較各組間差異，顯著性水平為P＜0.05，以不同小寫(xiě)字母表示。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 超微粉碎纖維素酶輔助提取龍眼果肉多糖工藝優(yōu)化

2.1.1 響應(yīng)面結(jié)果與分析 響應(yīng)面設(shè)計(jì)各因素水平龍眼果肉多糖提取率見(jiàn)表2。通過(guò)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，建立二次響應(yīng)面回歸模型如下：

Y=35.79+2.46X1+5.51X2+3.49X3+1.11X1X2+2.66X1X3+2.41X2X3-6.34X12-4.92X22-5.11X32

對(duì)上述模型進(jìn)行方差分析，結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可以看出，回歸模型P＜0.0001，說(shuō)明回歸模型達(dá)到極顯著水平；失擬項(xiàng)P=0.1369＞0.05，不顯著，說(shuō)明該模型是合適的。模型復(fù)相關(guān)系系數(shù)的平方R2為0.988，說(shuō)明該方程擬合度較高，故該模型可以用于本工藝的實(shí)際推測(cè)。對(duì)各項(xiàng)F 值檢驗(yàn)可知，交互項(xiàng)中因素X1超微時(shí)長(zhǎng)與因素X3提取時(shí)長(zhǎng)以及因素X2酶添加量與因素X3提取時(shí)長(zhǎng)均有顯著性交互作用（P＜0.05）。各因素對(duì)龍眼果肉多糖提取率的影響程度從大到小依次為：酶添加量＞提取時(shí)長(zhǎng)＞超微時(shí)長(zhǎng)。

表2 響應(yīng)面分析方案及結(jié)果Table 2 Response surface analysis and results

表3 試驗(yàn)結(jié)果方差分析表Table 3 Variance analysis of test results

2.1.2 優(yōu)化與驗(yàn)證 軟件模擬計(jì)算得到的最優(yōu)提取方案為：超微時(shí)長(zhǎng)2.39 min，酶添加量137.85 U/g，提取時(shí)長(zhǎng)為92.45 min，在該條件下，提取率預(yù)計(jì)達(dá)到最大值為39.45%。

根據(jù)試驗(yàn)可行性，優(yōu)化各因子，修正提取方案為：超微時(shí)長(zhǎng)2 min，酶添加量140 U/g，提取時(shí)長(zhǎng)為90 min，帶入方程算得提取率預(yù)測(cè)值為38.49%。

驗(yàn)證試驗(yàn)在上述條件下重復(fù)3 次，得到實(shí)際提取率為38.99%±1.17%，與預(yù)測(cè)值之間相對(duì)誤差為1.30%，因此采用此模型優(yōu)化得到的參數(shù)準(zhǔn)確可靠，具有實(shí)用價(jià)值。

2.2 不同提取方式所得龍眼果肉多糖的基本特性

2.2.1 提取率及化學(xué)組成 3 種提取方式所得龍眼果肉多糖的提取率及其化學(xué)組成見(jiàn)表4。由表4可見(jiàn)，與傳統(tǒng)熱水浸提相比，超微粉碎處理使龍眼粗多糖得率提高90.74%。超微粉碎技術(shù)可以使龍眼干顆粒變小，增加其與溶劑的接觸面積，從而提高得率。利用纖維素酶輔助浸提，龍眼粗多糖的得率進(jìn)一步提高59.22%。纖維素酶可以破壞龍眼果肉細(xì)胞壁，降解不可溶的果膠和纖維素等成分，使其溶于水，從而增強(qiáng)水溶性多糖的得率。

3 種龍眼多糖的分子質(zhì)量大小為：LP＞LP-S＞LP-SE，超微粉碎可能通過(guò)破壞多糖鏈以及分子間的氫鍵，從而降低多糖的分子質(zhì)量，此結(jié)果與Zhang[8]對(duì)枸菊子多糖的研究結(jié)果一致。酶可以作用于多糖的糖苷鍵，使多糖水解/降解，降低其分子質(zhì)量，所以超微粉碎-酶解處理提取的多糖具有更小的分子質(zhì)量。

3 種多糖均主要由中性糖、糖醛酸組成，含有少量的還原糖和蛋白質(zhì)。其中LP 的中性糖含量最高，LP-S 含量最低；LP-SE 的還原糖含量最高，LP-S 含量最低；LP-S 的糖醛酸含量顯著高于LP和LP-SE（P＜0.05）。3 種多糖的蛋白質(zhì)含量無(wú)顯著差異。

表4 不同提取方式龍眼粗多糖基礎(chǔ)構(gòu)成Table 4 The basic composition of longan polysaccharides of different extraction methods

進(jìn)一步分析3 種多糖的單糖組成，結(jié)果見(jiàn)表5。3 種提取方式制備的龍眼果肉多糖均主要由阿拉伯糖和半乳糖組成，含有少量的鼠李糖、葡萄糖和甘露糖。其中傳統(tǒng)熱水浸提制備的LP 中葡萄糖含量顯著高于LP-S 和LP-SE（P＜0.05），輔助超微粉碎處理的LP-S 中半乳糖顯著高于LP 和LP-SE（P＜0.05），超微粉碎-纖維素酶提取的LP-SE 的阿拉伯糖和鼠李糖含量顯著高于LP 和LP-S （P＜0.05）。

表5 不同提取方式龍眼果肉多糖單糖組成（%）Table 5 Monosaccharide composition of longan polysaccharides of different extraction methods （%）

2.2.2 表觀黏度及溶解性 3 個(gè)樣品的表觀黏度和溶解性見(jiàn)表6，在相同濃度下，3 種龍眼多糖的表觀黏度大小為：LP＞LP-S＞LP-SE，LP 的表觀黏度是LP-SE 的47.7 倍。三者的溶解度大小為：LP＜LP-S＜LP-SE，LP-SE 的溶解度是LP 的2.3 倍。多糖的黏度、溶解度與其分子質(zhì)量、分子鏈等相關(guān)，胡婕倫等[13]發(fā)現(xiàn)車(chē)前子多糖的表觀黏度隨著分子質(zhì)量的降低而降低，Tiwari 等[15]也報(bào)道多糖的表觀黏度的下降與其分子質(zhì)量的降低有關(guān)。

表6 不同提取方式龍眼果肉多糖的表觀黏度和溶解性Table 6 Apparent viscosity and solubility of longan polysaccharides of different extraction methods

2.3 不同提取方式所得龍眼果肉多糖的免疫調(diào)節(jié)活性

2.3.1 毒性分析 分析3 種龍眼果肉多糖對(duì)巨噬細(xì)胞的毒性，發(fā)現(xiàn)3 種多糖在小于400 μg/mL 的濃度范圍內(nèi)，均能使細(xì)胞的存活率高于90%，表明其在此濃度范圍內(nèi)無(wú)細(xì)胞毒性，可用于后續(xù)的細(xì)胞活性評(píng)價(jià)。

圖1 3 種龍眼果肉多糖對(duì)巨噬細(xì)胞的MTT 毒性Fig.1 The toxicity of longan polysaccharides LP（a），LP-S（b），LP-SE（c）to RAW264.7 macrophages

2.3.2 對(duì)巨噬細(xì)胞分泌NO 及細(xì)胞因子的影響進(jìn)一步分析3 種龍眼果肉多糖刺激巨噬細(xì)胞分泌NO 及其細(xì)胞因子的影響，結(jié)果如圖2所示。由圖2a 和圖2c 可知，與對(duì)照組相比，LP 和LP-S 對(duì)巨噬細(xì)胞分泌NO 和IL-6 無(wú)顯著影響（P＞0.05），而LP-SE 在25～100 μg/mL 范圍內(nèi)均能顯著刺激NO的分泌（圖2a）；LP-SE 在低濃度對(duì)IL-6 無(wú)刺激作用，在50 和100 μg/mL 高濃度下，顯著刺激IL-6分泌（P＜0.05）（圖2c）。3 種多糖在25～100 μg/mL范圍內(nèi)均能顯著刺激巨噬細(xì)胞分泌TNF-α，且呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系，且在相同劑量下，LP-SE的刺激作用顯著強(qiáng)于LP 和LP-S （P＜0.05）（圖2b）。同樣的，3 種多糖均能刺激巨噬細(xì)胞分泌IL-1β，在相同劑量下，LP-SE 的刺激作用顯著強(qiáng)于LP 和LP-S（P＜0.05）（圖2d）。

3 種龍眼多糖對(duì)巨噬細(xì)胞分泌功能的影響差異與其化學(xué)組成及理化性質(zhì)有關(guān)。多糖的免疫調(diào)節(jié)活性與其分子質(zhì)量、溶解性和黏度等密切相關(guān)，Sun 等[16]研究紫球藻多糖不同級(jí)分發(fā)現(xiàn)，分子質(zhì)量最低的級(jí)分對(duì)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的刺激作用最強(qiáng)；竹節(jié)參多糖[17]、茯苓多糖[18]的低黏度、高溶解性的特性有助于其發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)活性。此外，多糖分子鏈的單糖組成、糖基連接方式和支鏈特性等決定其是否能被免疫細(xì)胞受體識(shí)別而引發(fā)免疫應(yīng)答，荔枝果肉多糖中的半乳糖和阿拉伯糖對(duì)其發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用有重要作用[19]，當(dāng)歸多糖的半乳糖-鼠李糖骨架和半乳糖支鏈?zhǔn)瞧浔憩F(xiàn)出免疫調(diào)節(jié)活性的特殊結(jié)構(gòu)[20]。因此，具有低黏度、高溶解性、富含阿拉伯糖和鼠李糖的LP-SE 表現(xiàn)出最好的免疫調(diào)節(jié)活性。

3 結(jié)論

圖2 龍眼果肉多糖對(duì)巨噬細(xì)胞分泌NO、TNF-α、IL-6 和IL-1β 的影響Fig.2 Effect of longan polysaccharides on the production of NO （a），TNF-α （b），IL-6 （c）and IL-1β （d）of RAW264.7 macrophages

1）采用響應(yīng)面分析法優(yōu)化龍眼果肉多糖的超微粉碎酶解提取工藝參數(shù)為：超微時(shí)長(zhǎng)2 min，酶添加量140 U/g，pH 值5，料液比1 ∶40，提取溫度50 ℃，提取時(shí)長(zhǎng)90 min，在該條件下多糖的提取率為38.49%。

2）超微粉碎纖維素酶輔助法提取的龍眼果肉多糖LP-SE 相比熱水浸提和超微粉碎輔助法提取的龍眼果肉多糖（LP 和LP-S），具有得率高，分子質(zhì)量小，糖醛酸含量低，鼠李糖和阿拉伯糖含量高，低黏度和高溶解性的特性，且其對(duì)巨噬細(xì)胞分泌NO、TNF-α、IL-6 和IL-1β 的刺激作用顯著強(qiáng)于LP 和LP-S。