風(fēng)濕寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

施宏彬，何小利，陸秋靖，岑偉煊，李宏捍

（康美藥業(yè)股份有限公司，廣東 廣州）

0 引言

風(fēng)濕寧膠囊是中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)收載的風(fēng)濕定膠囊處方基礎(chǔ)上，增加乳藥、沒藥、紅花、牛膝、蒼術(shù)等改良而來。在已有標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，我們新增白芷和甘草的TLC項(xiàng)目，并增加了HPLC測(cè)定處方中白芷的有效成份歐前胡素的含量測(cè)定項(xiàng)目，從而提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步有效控制風(fēng)濕寧膠囊質(zhì)量?，F(xiàn)制定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與原標(biāo)準(zhǔn)相比在控制藥品質(zhì)量和有效成分含量方面更為全面有效，且重現(xiàn)性好。

1 主要試劑與儀器

實(shí)驗(yàn)儀器：為日本島津LC-ACP2010高效液相色譜儀，由日本島津公司制造。

藥品與試劑：對(duì)照品和對(duì)照藥材購于中國藥品生物制品檢定所，所用試劑為分析純和色譜純，自制的風(fēng)濕寧膠囊。

2 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 白芷的薄層色譜鑒別

樣品溶液的制備方法：取內(nèi)容物1.5g，置于錐形瓶中，倒入乙醚30mL，浸漬60分鐘，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液自然揮干，其殘?jiān)稳胍宜嵋阴?.5mL溶解，作為樣品溶液。

另取白芷對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。另精密稱定歐前胡素對(duì)照品，滴入乙酸乙酯制備成1mg/mL溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層層析法，吸取樣品溶液12μl、對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液10μl，先后點(diǎn)于同一薄層層析硅膠GF254板上，以石油醚（30-60℃）-乙醚（6：4）為展開劑，在25℃以下展開，拿出，揮干，置紫外光燈（254nm）下檢視。樣品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。如圖1。

圖1 風(fēng)濕寧膠囊中白芷的TLC（熒光）

2.1.2 甘草的薄層色譜鑒別

取內(nèi)容物5g，加鹽酸12mL與三氯甲烷140mL，加熱沸騰，于回流管中回流1.5小時(shí)，放置室溫，過濾，取三氯甲烷溶液，置蒸發(fā)皿，水浴蒸干，殘?jiān)稳爰状?mL溶解，作為樣品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品，滴入甲醇制成1mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層層析法，吸取上述二種溶液各6μl，先后點(diǎn)于同一薄層層析硅膠G板上，以正丁烷-醋酸乙酯-丙酮 （10：1：5）為展開劑，展開，拿出，揮干，噴以 8%磷鉬酸乙醇溶液，在100℃烘箱加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。樣品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。如圖2。

圖2 風(fēng)濕寧膠囊中甘草的TLC（日光）

2.2 白芷中歐前胡素的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Luna 5u C18（2） 100A 4.6mm×250mm；流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸溶液（65∶35）流速：1.00mL/min；色譜柱溫度：室溫；測(cè)試波長(zhǎng)：300nm。在該條件設(shè)定下，歐前胡素色譜峰和樣品中其它成分色譜峰能明顯基線分離，分離度大于1.5；按歐前胡素計(jì)算，其理論塔板數(shù)（N）為3000以上。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取歐前胡素對(duì)照品適量，滴入甲醇制成33μg/mL的溶液，即得。

2.2.3 樣品溶液制備

取內(nèi)容物約5.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，倒入甲醇45mL，加熱回流60分鐘，取出，過濾，濾液至50mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度，搖晃均勻，即得。

分別取供試品、陰性樣品及對(duì)照品溶液各10μl注入液相色譜儀，依法測(cè)定，樣品溶液色譜圖中與對(duì)照品保留時(shí)間一致的色譜峰的紫外吸水光譜與對(duì)照品峰的紫外吸水光譜相同，陰性供試品在歐前胡素色譜峰位置處無相應(yīng)峰出現(xiàn)。見圖3、圖4。

2.2.4 線性關(guān)系的考察

按順序精密吸取歐前胡素對(duì)照品溶液（C=0.028mg·mL-1）2、4、6、8、10、12μl先后進(jìn)樣，收集色譜圖，收集各濃度峰面積，結(jié)果見表1。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），計(jì)算得到線性回歸方程式Y(jié)=1041.84X-251.49，r=0.9997。

以上結(jié)果顯示，在0.056～0.336μg范圍內(nèi)，不同進(jìn)樣量濃度與歐前胡素峰面積積分值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密吸取同一樣品溶液，各10μl，按含量測(cè)定項(xiàng)下依法操作，按0，2，4，6，8h時(shí)間間隔先后注入色譜儀，測(cè)試色譜峰面積，測(cè)得峰面積積分值，歐前胡素峰面積值的RSD＜2%，試驗(yàn)結(jié)果表明，樣品溶液在規(guī)定的8小時(shí)內(nèi)，呈現(xiàn)穩(wěn)定性良好。

表1 峰面積積分值及進(jìn)樣量數(shù)據(jù)

圖3 風(fēng)濕寧膠囊樣品供試品HPLC

2.2.6 精密度試驗(yàn)

取同一樣品溶液，精密吸取各10μl，連續(xù)5次注入色譜儀，測(cè)試色譜峰面積，歐前胡素峰面積值的RSD＜1%，試驗(yàn)結(jié)果顯示，精密度呈現(xiàn)良好結(jié)果。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一樣品五份，按樣品溶液制備方法制備，分別按含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，進(jìn)樣量分別為10μl，測(cè)試峰面積積分值，并計(jì)算含量，RSD＜2%，試驗(yàn)結(jié)果顯示，重復(fù)性呈現(xiàn)良好結(jié)果。

2.2.8 回收率試驗(yàn)

取樣品約2.5g，精密稱定，加甲醇分別為35mL、33mL、31mL使之溶解，分別精密先后滴入歐前胡素對(duì)照品溶液（C=0.033mg/mL）10mL、12mL、14mL，平行做兩份，其它步驟按照樣品溶液制備方法制備，按含量測(cè)定方法操作，進(jìn)樣量為10μl，以下列數(shù)據(jù)計(jì)算回收率，測(cè)試結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率數(shù)據(jù)

試驗(yàn)結(jié)果表明：回收率在97.5%～102.8%之間，加樣回收率呈現(xiàn)良好結(jié)果。

圖4 歐前胡素對(duì)照品HPLC

2.2.9 三批樣品測(cè)定

分別取內(nèi)容物約5.0g，精密稱定，按樣品溶液制備方法制得樣品溶液，按含量測(cè)定方法操作，每次進(jìn)樣量為10μl，測(cè)定結(jié)果見表3。

表3 三批中試樣品數(shù)據(jù)歐前胡素含量（mg/g）

3 討論

分析三批中試樣品測(cè)試數(shù)據(jù)，風(fēng)濕寧膠囊含白芷以歐前胡素計(jì)為0.1562mg/g左右。按此平均含量，調(diào)整下浮20%計(jì)算，風(fēng)濕寧膠囊成品每g含白芷以歐前胡素計(jì)應(yīng)為0.1250mg/g左右，同時(shí)，考慮到藥材的來源，以及生產(chǎn)劑型過程、貯藏等因素影響，故暫定本品每g含白芷以歐前胡素（C10H10O4）計(jì)，不得少于0.12mg，且每粒裝0.3g，即本品每粒含白芷以歐前胡素（C10H10O4）計(jì)，不得少于0.030mg。