分子標(biāo)記技術(shù)在茄子種質(zhì)資源評(píng)價(jià)中的應(yīng)用研究進(jìn)展

廖秋石，雷 剛，陳學(xué)軍，袁欣捷，黃月琴，周坤華，方 榮*

( 1.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蔬菜花卉研究所，江西 南昌 330200; 2.江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，江西 南昌 330045)

茄子(SolanummelongenaL.)為茄科茄屬蔬菜作物，是我國(guó)的主要蔬菜作物之一，年種植面積約80.6萬(wàn)hm2[1]。農(nóng)作物種質(zhì)資源是種質(zhì)創(chuàng)新、性狀優(yōu)化和新品種選育的物質(zhì)基礎(chǔ)[2]。茄子種質(zhì)資源是蔬菜種質(zhì)資源的重要組成部分，我國(guó)是茄子的次生起源地[3]，栽培歷史悠久，茄子種質(zhì)資源十分豐富，國(guó)家種質(zhì)中期庫(kù)已收集茄子種質(zhì)資源1468份[4]。長(zhǎng)期以來(lái)，人們常采用形態(tài)標(biāo)記方法分析、評(píng)價(jià)作物種質(zhì)資源，但形態(tài)標(biāo)記易受環(huán)境的影響，同一性狀在不同環(huán)境條件下，表型往往存在一定差異；而DNA分子標(biāo)記具有數(shù)量多、表現(xiàn)穩(wěn)定，不受環(huán)境條件影響等特點(diǎn)，能對(duì)種質(zhì)資源進(jìn)行更為精準(zhǔn)的評(píng)價(jià)與鑒定，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于農(nóng)作物種質(zhì)資源的遺傳多樣性分析、親緣關(guān)系鑒定、遺傳圖譜構(gòu)建、QTL定位等諸多方面。本文綜述了分子標(biāo)記技術(shù)在茄子種質(zhì)資源評(píng)價(jià)中的應(yīng)用研究進(jìn)展，以期為茄子種質(zhì)資源的高效利用與種質(zhì)創(chuàng)新提供理論參考。

1 分子標(biāo)記的主要類(lèi)型及特點(diǎn)

廣義的分子標(biāo)記是指可遺傳的且可檢測(cè)的DNA序列或蛋白質(zhì)，狹義的分子標(biāo)記是指能反映生物個(gè)體或種群間基因組中某種差異的DNA特異性片段。早在1980年遺傳學(xué)家Botstein等[5]第一次提出了DNA片段多態(tài)性作為遺傳標(biāo)記的想法，此后，研究者開(kāi)始將分子實(shí)驗(yàn)方法應(yīng)用于作物遺傳多樣性的研究。DNA作為染色體組分存在于細(xì)胞核內(nèi)，其一級(jí)結(jié)構(gòu)，即堿基的排列順序儲(chǔ)藏決定了遺傳信息的種類(lèi)和數(shù)量，因此，分析DNA的堿基序列是研究遺傳多樣性最直接的方法。1985年，關(guān)于PCR技術(shù)的文章首次發(fā)表，迄今已經(jīng)發(fā)展了多種基于DNA多態(tài)性的分子標(biāo)記技術(shù)[6]。根據(jù)對(duì)DNA多態(tài)性的檢測(cè)方法，分子標(biāo)記可以分為4類(lèi)[7-9]，一是基于Southern雜交檢測(cè)的RFLP標(biāo)記；二是基于PCR的分子標(biāo)記，如RAPD、SSR和ISSR、SRAP等；三是基于PCR與限制性酶切技術(shù)結(jié)合的分子標(biāo)記，如AFLP、CAPS等；四是InDel、SNP等新型分子標(biāo)記[10，11]。

1.1 RFLP

RFLP(Restriction fragment length polymorphisms)即限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性，是最早應(yīng)用于作物品種鑒別和品系純度檢測(cè)的第一代分子標(biāo)記技術(shù)[12]。該技術(shù)涉及基因組DNA的提取、DNA 片段的克隆、電泳、限制性內(nèi)切酶酶切、southern印跡轉(zhuǎn)移、DNA 探針制備以及分子雜交等一系列步驟[13]。RFLP為共顯性分子標(biāo)記，能區(qū)分純合體和雜合體，且非等位基因間無(wú)互作[14]；其次，該標(biāo)記源于DNA水平上的自然變異，數(shù)目可以是無(wú)限的[15]，并且結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性較好[16]。但RFLP分子標(biāo)記操作步驟較多，周期長(zhǎng)，當(dāng)檢測(cè)少數(shù)探針時(shí)成本略高[17]，且在檢測(cè)中需使用放射性同位素，安全標(biāo)準(zhǔn)較高。

1.2 RAPD

RAPD(Random amplified polymorphic DNA)即隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA標(biāo)記，該標(biāo)記技術(shù)是由美國(guó)杜邦公司的Williams和加利福尼亞生物研究所的Welsh在1990年同時(shí)發(fā)明的，是建立在基于PCR基礎(chǔ)上的一種隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性的DNA分子標(biāo)記技術(shù)[18]。此技術(shù)是以不同個(gè)體基因組DNA為模板，把一條人工合成的隨機(jī)十堿基寡脫氧核苷酸單鏈作為引物，在特定條件下進(jìn)行擴(kuò)增[19]。擴(kuò)增所得產(chǎn)物經(jīng)電泳分離后顯色，分析所得產(chǎn)物基因片段的多態(tài)性，根據(jù)多態(tài)性進(jìn)而推測(cè)生物體內(nèi)DNA多態(tài)性與表型性狀的表現(xiàn)規(guī)律[20]。該技術(shù)對(duì)DNA樣品數(shù)量及質(zhì)量要求不高，無(wú)需事先了解DNA序列；引物通用性高，自動(dòng)化程度高，試驗(yàn)成本低，技術(shù)簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度較快，已廣泛應(yīng)用于作物種質(zhì)遺傳多樣性等方面的研究[19，21]。缺點(diǎn)是存在顯性遺傳問(wèn)題，不能識(shí)別雜合位點(diǎn)，而且穩(wěn)定性不佳，導(dǎo)致重復(fù)性差[22]。

1.3 SSR

SSR(Simple sequence repeat)即簡(jiǎn)單重復(fù)序列，指的是基因組中由1～6個(gè)核苷酸為基本單位，經(jīng)過(guò)重復(fù)串聯(lián)多次構(gòu)成的一段DNA重復(fù)序列[23]。由于其兩端序列保守性較強(qiáng)，因此，可以設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)電泳檢測(cè)分析基因位點(diǎn)的多態(tài)性[24]。SSR分子標(biāo)記具有不受環(huán)境限制，遺傳多態(tài)性豐富，共顯性、穩(wěn)定性好，基因組覆蓋面廣等優(yōu)點(diǎn)[2, 25]，是一種被廣泛使用的分子標(biāo)記技術(shù)。傳統(tǒng)開(kāi)發(fā)的SSR標(biāo)記主要借助于結(jié)構(gòu)基因組學(xué)和比較基因組學(xué)的相關(guān)技術(shù)手段，操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)、資金投入較大等。但隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，以轉(zhuǎn)錄組測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)的新一代高通量測(cè)序技術(shù)為低廉、高效、大規(guī)模發(fā)展SSR標(biāo)記提供了新的有效方法[26]。

1.4 ISSR

ISSR(Inter-simple sequence repeat)即簡(jiǎn)單重復(fù)序列區(qū)間，它是在SSR標(biāo)記的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的、基于PCR的分子標(biāo)記技術(shù)[27, 28]。該分子標(biāo)記的主要特點(diǎn)是無(wú)需知道靶標(biāo)序列背景的情況下，能夠直接擴(kuò)增出2個(gè)方向相反、序列相同的基因片段[29]。與上述分子標(biāo)記技術(shù)相比，ISSR技術(shù)多態(tài)性豐富，穩(wěn)定性強(qiáng)，重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)單，成本相對(duì)較低，產(chǎn)物特異性強(qiáng)[30-32]，已被廣泛應(yīng)用于植物遺傳多樣性分析和種質(zhì)資源鑒定等研究[33-35]。

1.5 SRAP

SRAP(Sequence-related amplified polymorphism)即相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性，是美國(guó)學(xué)者提出的基于PCR技術(shù)的新型分子標(biāo)記技術(shù)[36]。該技術(shù)通過(guò)一對(duì)引物對(duì)開(kāi)放閱讀框(open reading frames，ORFs)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。而特異性引物利用GC含量豐富的外顯子和AT含量豐富的啟動(dòng)子和內(nèi)含子這一特點(diǎn)進(jìn)行設(shè)計(jì)，由于不同個(gè)體中啟動(dòng)子、內(nèi)含子與間隔序列不同，利用基于外顯子和內(nèi)含子、啟動(dòng)子設(shè)計(jì)的上下游引物配合，就會(huì)在不同的個(gè)體間產(chǎn)生多態(tài)性[37, 38]。SRAP分子標(biāo)記具有以下優(yōu)點(diǎn)：首先該標(biāo)記的正、反向引物可自由組合，大大降低合成引物的費(fèi)用，且提高引物的利用率[39]；其次該標(biāo)記是基于PCR擴(kuò)增的標(biāo)記技術(shù)，較其他類(lèi)型分子標(biāo)記而言對(duì)DNA純度和濃度要求不高，因此可以降低對(duì)儀器設(shè)備的要求，同時(shí)減少操作步驟與實(shí)驗(yàn)復(fù)雜性[40]；再其次，該標(biāo)記由于引物設(shè)計(jì)的特殊性，多數(shù)在基因組中均勻分布，因此比RAPD等標(biāo)記穩(wěn)定且多態(tài)性高[41]；此外，SRAP標(biāo)記適用范圍廣泛、多數(shù)顯性，檢測(cè)位點(diǎn)較多，故可提供較高的樣品信息量，穩(wěn)定、可靠性高[42]。盡管SRAP標(biāo)記具有眾多優(yōu)點(diǎn)，但由于此技術(shù)未利用擴(kuò)增區(qū)域序列的信息，產(chǎn)生的標(biāo)記在染色體上隨機(jī)分布，在篩選與目標(biāo)性狀連鎖的分子標(biāo)記時(shí)，必須與混合分組分析法等一起使用[43]。

1.6 AFLP

AFLP(Amplified fragment length polymorphism)即擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性，是基于PCR的一種選擇性擴(kuò)增限制性DNA片段技術(shù)，同時(shí)也是一種高效能的基因檢測(cè)技術(shù)，可在一次單個(gè)反應(yīng)中檢測(cè)到大量的基因片段[44]。該技術(shù)同時(shí)具有RFLP和RAPD技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，檢測(cè)高效，且不受環(huán)境條件的影響，重復(fù)性好、多態(tài)性豐富、穩(wěn)定性高[45]，已廣泛應(yīng)用于植物親緣關(guān)系鑒定、遺傳多樣性分析、分子標(biāo)記篩選和高密度遺傳圖譜構(gòu)建等研究[46， 47]。缺點(diǎn)是對(duì)供試DNA質(zhì)量要求比較高，步驟繁瑣，操作技術(shù)難度大，為顯性標(biāo)記，易產(chǎn)生假陽(yáng)性，且結(jié)果不可重復(fù)[48]。

1.7 CAPS

CAPS(Cleaved amplified polymorphic sequence)即酶切擴(kuò)增多態(tài)性序列，它實(shí)質(zhì)上是PCR與RFLP技術(shù)結(jié)合的一種方法。其原理是利用已知位點(diǎn)的DNA序列設(shè)計(jì)出特異性PCR引物，再利用這些引物擴(kuò)增該位點(diǎn)上的某一DNA片段，接著用限制性內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，通過(guò)瓊脂糖電泳分離酶切片段以檢測(cè)多態(tài)性[49，50]。CAPS是一種共顯性分子標(biāo)記，優(yōu)點(diǎn)是避免了RFLP分析中膜轉(zhuǎn)印步驟，又能保持RFLP分析的精確度[51]，操作簡(jiǎn)便、結(jié)果穩(wěn)定可靠[52]，所需DNA量比較少，濃度要求不嚴(yán)格[53]，較多限制性內(nèi)切酶可與擴(kuò)增DNA酶切，檢測(cè)到多態(tài)性的機(jī)會(huì)比較大[42]。雖然CAPS標(biāo)記有許多優(yōu)點(diǎn)，但是因?yàn)樗仨毷褂孟拗菩詢?nèi)切酶，因此，篩選合適的酶組合工作量也較大；此外，已發(fā)現(xiàn)的突變酶切位點(diǎn)少，限制了該標(biāo)記的大規(guī)模開(kāi)發(fā)應(yīng)用。

1.8 InDel

InDel(Insertion-deletion)分子標(biāo)記是基于全基因組測(cè)序而開(kāi)發(fā)的第三代標(biāo)記技術(shù)，是在等位基因位點(diǎn)上由于一定數(shù)量的核苷酸插入或缺失，根據(jù)基因組中插入缺失的位點(diǎn)，設(shè)計(jì)一些擴(kuò)增這些插入缺失位點(diǎn)的PCR引物，從而產(chǎn)生長(zhǎng)度多態(tài)性變異[54]。該分子標(biāo)記具有帶型簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高、變異穩(wěn)定、多態(tài)性豐富、容易檢測(cè)等特點(diǎn)[55]。InDel標(biāo)記屬于一種單位點(diǎn)分子標(biāo)記，可以克服多位點(diǎn)標(biāo)記進(jìn)行遺傳多樣性分析和輔助選擇育種中出現(xiàn)的問(wèn)題[56]，但其攜帶的遺傳信息量有限，遺傳分析效率有待進(jìn)一步提高[10]。

1.9 SNP

SNP(Single nucleotide polymorphism)即單核苷酸多態(tài)性，主要是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性[57]。它只涉及到單個(gè)堿基的變異，這種變異可由單個(gè)堿基的轉(zhuǎn)換或顛換所引起，也可由堿基的插入或缺失所致，但通常所說(shuō)的SNP并不包括后兩種情況[58]。該分子標(biāo)記位點(diǎn)多、分布廣、易實(shí)現(xiàn)分析的自動(dòng)化，具有穩(wěn)定性好、突變頻率低、代表性強(qiáng)等特點(diǎn)[59]，在馬鈴薯[60]、番茄[61]、辣椒[62]等蔬菜作物中均有應(yīng)用。

2 分子標(biāo)記技術(shù)在茄子研究中的應(yīng)用

2.1 遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建

遺傳連鎖圖譜，是指以染色體重組交換為基礎(chǔ)，以染色體重組交換率為相對(duì)長(zhǎng)度單位，采用遺傳學(xué)方法把基因或者其他專一的多態(tài)性標(biāo)記構(gòu)建在染色體上，形成連鎖的圖譜[63]。遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建是遺傳學(xué)基礎(chǔ)研究的一個(gè)重要組成部分，對(duì)基因的定位和克隆具有重要的意義，并可為育種工作提供指導(dǎo)[64]。

謝立峰等[65]以茄子材料09-101-M為母本、10TL102-F4-1為父本構(gòu)建的重組自交系為作圖群體，采用SSR、AFLP分子標(biāo)記，共篩選出多態(tài)性較好且條帶清晰穩(wěn)定的22對(duì)SSR引物和129對(duì)AFLP引物，多態(tài)性比例為24.6%；應(yīng)用這些多態(tài)性引物進(jìn)一步進(jìn)行群體擴(kuò)增，共獲得173個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)；構(gòu)建了總長(zhǎng)度為991.7 cM、共包含157個(gè)位點(diǎn)、平均圖距為6.32 cM的遺傳連鎖圖譜。房超等[66]利用母本巴-3(從巴基斯坦引進(jìn))與父本255-4-4(海南野生茄)雜交產(chǎn)生的118個(gè)F2代單株為作圖群體，使用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建了總長(zhǎng)為381.3 cM、標(biāo)記平均間距為19.1 cM的分子連鎖圖譜。曹必好等[67]利用RAPD技術(shù)在茄子兩個(gè)純合自交系E-31和E-32雜交后產(chǎn)生的119株F2代群體中，進(jìn)行了多態(tài)性位點(diǎn)連鎖分析，發(fā)現(xiàn)77個(gè)標(biāo)記定位于12個(gè)連鎖群上，覆蓋總基因長(zhǎng)度651.19cM，標(biāo)記平均間距8.45 cM。牛玉[68]以自交系05-3-6-14-3為母本、湖南地方品種“湖南小圓茄”為父本構(gòu)建F2代群體，用F2代群體的88個(gè)單株，采用AFLP、SSR、CAPS 3種分子標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建了總長(zhǎng)633.3 cM、標(biāo)記平均間距為3.86 cM的遺傳圖譜。一般而言，用于QTL定位的遺傳圖譜標(biāo)記平均間距要小于10 cM，當(dāng)圖譜總長(zhǎng)越長(zhǎng)、標(biāo)記間距越小時(shí)，尋找到有效目的基因的概率就越高[69]；可見(jiàn)茄子遺傳圖譜的構(gòu)建仍有很大的發(fā)展空間，圖譜的長(zhǎng)度和標(biāo)記密度還有待進(jìn)一步提高[70]。

2.2 QTL定位

張環(huán)宇等[71]基于F2代群體和SSR標(biāo)記、AFLP 標(biāo)記，構(gòu)建了包含14個(gè)連鎖群的遺傳圖譜，圖譜覆蓋基因組長(zhǎng)度為1040.3 cM。利用該圖譜鑒定果長(zhǎng)QTL 1個(gè)、果徑QTL 2個(gè)、果形指數(shù)QTL 1個(gè)、花青素積累相關(guān)QTL 1個(gè)，可解釋3.8%～12.8%的表型變異。葛海燕等[72]利用父本綠茄“131”和母本上海本地長(zhǎng)茄“141”為作圖親本，獲得了具有237個(gè)株系的F2代群體，利用SSR標(biāo)記構(gòu)建連鎖圖譜，共定位了單果質(zhì)量、果長(zhǎng)、果徑、果形指數(shù)、果萼大小等果實(shí)相關(guān)性狀的QTLs 9個(gè)，可解釋4.0%～11.9%的表型變異。耿樹(shù)文[73]以圓頂茄子材料283為母本，以尖頂茄子材料284為父本構(gòu)建F2代群體，進(jìn)而利用SLAF-seq高通量測(cè)序技術(shù)獲得親本和F2代單株的SLAF標(biāo)簽，對(duì)SLAF標(biāo)簽進(jìn)行篩選后構(gòu)建了1張包含12個(gè)連鎖群的高密度遺傳連鎖圖譜，該圖譜覆蓋茄子基因組長(zhǎng)度達(dá)2126.6 cM，平均圖距為0.69 cM。在第5和第10連鎖群上獲得3個(gè)果頂形狀QTLs，根據(jù)連鎖群的不同命名為fe5.1、fe10.1和fe10.2，表型貢獻(xiàn)率分別為26.7%、10.0%、11.4%。喬軍[74]以茄子栽培種自交系106為母本，以栽培種自交系113為父本雜交構(gòu)建F2群體，用40對(duì)SSR標(biāo)記和99對(duì)AFLP標(biāo)記，對(duì)F2群體154個(gè)單株進(jìn)行分析，獲得了總長(zhǎng)1007.9 cM、標(biāo)記間平均圖距為9.3 cM的遺傳圖譜，獲得2個(gè)果形指數(shù)QTLs、5個(gè)果長(zhǎng)QTLs、2個(gè)果徑QTLs，表型貢獻(xiàn)率最高的達(dá)到45.0%。

2.3 遺傳多樣性與親緣關(guān)系分析

Evans Mutegi等[75]使用14個(gè)SSR標(biāo)記檢測(cè)印度茄子自然種群和南部3個(gè)栽培種群的遺傳多樣性和種群結(jié)構(gòu)，結(jié)果顯示種群間出現(xiàn)了強(qiáng)烈分化并且具有顯著的遠(yuǎn)緣隔離現(xiàn)象。Ali等[76]使用RAPD和ISSR標(biāo)記分析了143個(gè)中國(guó)栽培茄子、106個(gè)地方品種和37個(gè)雜交品種的遺傳多樣性， RAPD引物在地方品種、雜交品種和所有143個(gè)品種中產(chǎn)生的多態(tài)率分別為13.9%、14.8%和14.7%；而ISSR引物在地方品種、雜種和所有143個(gè)品種中產(chǎn)生的多態(tài)率分別為13.5%、20.7%和15.3%。ISSR比RAPD標(biāo)記能更有效地檢測(cè)遺傳多樣性。韓洪強(qiáng)等[77]利用收集到的包括野生近緣種在內(nèi)的126份茄子材料進(jìn)行SSR分子標(biāo)記和形態(tài)學(xué)標(biāo)記鑒定，以評(píng)價(jià)其種質(zhì)資源的遺傳多樣性和親緣關(guān)系，結(jié)果表明，半栽培種與野生近緣種材料進(jìn)化關(guān)系較近，而與栽培種距離相對(duì)較遠(yuǎn)，這說(shuō)明栽培種在馴化之后的遺傳變異比較大，與其祖先的親緣關(guān)系越來(lái)越遠(yuǎn)。曾華蘭等[78]用篩選出的17對(duì)SRAP引物在32份對(duì)黃萎病具有一定抗性的茄子材料上進(jìn)行了遺傳多樣性與親緣關(guān)系分析，共檢測(cè)出276個(gè)條帶，其中多態(tài)性條帶212個(gè)，多態(tài)性比例為76.81%，32份茄子品種的遺傳距離介于0.0231～0.8391，平均遺傳距離為0.4535，遺傳多樣性較為豐富，有利于茄子雜交育種親本的選擇與利用。

肖熙鷗等[79]利用22對(duì)SRAP的引物對(duì)36份茄子栽培種進(jìn)行了遺傳多樣性分析，結(jié)果表明36 份茄子品種間遺傳相似系數(shù)在0.568～0.870，平均遺傳相似系數(shù)為0.757，說(shuō)明供試材料遺傳背景相對(duì)狹窄，這些材料雖來(lái)自不同地區(qū)，但不斷交流導(dǎo)致基因滲透，因此，應(yīng)不斷引進(jìn)、創(chuàng)新種質(zhì)資源，拓展茄子的遺傳背景，豐富遺傳多樣性。房超等[80]用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)87份茄子及其近緣野生種進(jìn)行了遺傳多樣性分析，結(jié)果顯示，群體平均雜合度為0.6962，平均多態(tài)信息含量為0.6441，平均相似系數(shù)為0.822，說(shuō)明參試茄子種質(zhì)的遺傳相似性較大，遺傳多樣性不豐富。于曉虎[34]利用ISSR和SSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)76份茄子種質(zhì)進(jìn)行了遺傳多樣性分析，供試茄子品種間的相似系數(shù)介于0.454～1.000之間，平均為0.639，說(shuō)明供試茄子的遺傳多樣性較低。廖毅等[45]利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)來(lái)自國(guó)內(nèi)外的54份茄子栽培種以及4份近緣野生種進(jìn)行了遺傳多樣性分析，栽培種內(nèi)平均觀測(cè)等位基因數(shù)、平均有效等位基因數(shù)、平均Nei’s基因多樣度和平均香農(nóng)指數(shù)分別為1.176、1.084、0.051和0.079，都相對(duì)較低，表明茄子種內(nèi)遺傳基礎(chǔ)相對(duì)狹窄。

2.4 品種鑒定與純度分析

楊旭等[81]以16份茄子雜交組合及其親本為供試材料，通過(guò)共顯性SSR分子標(biāo)記，在雜交后代擴(kuò)增產(chǎn)物中，比較親本與雜種PCR的擴(kuò)增條帶，當(dāng)雜種F1代具有父母本互補(bǔ)型或父本型條帶，則為真雜交種，反之僅有母本型條帶則為假雜交種，結(jié)果顯示有3份F1代為假雜種，其余13份為真雜種，與田間鑒定結(jié)果一致。李倩等[82]利用115對(duì)SSR引物對(duì)早紅茄1號(hào)和早紅茄2號(hào)雙親進(jìn)行多態(tài)性篩選，從中篩選出引物K08和M11，分別對(duì)早紅茄1號(hào)和2號(hào)種子的純度進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明2個(gè)品種的純度分別為95.3%和96.9%，與田間檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著差異(分別為95.8%和97.2%)。王利英等[83]利用236對(duì)SSR引物對(duì)3個(gè)茄子品種進(jìn)行多態(tài)性篩選，篩選出用于茄子純度鑒定的多態(tài)性引物15對(duì)，利用該系列引物進(jìn)行純度鑒定，1-2010、3-2010和9-2010 3個(gè)品種的純度分別為98%、96%和100%，與田間檢測(cè)結(jié)果一致。陳繼兵等[84]通過(guò)多次重復(fù)試驗(yàn)，利用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)，從100對(duì)引物組合中篩選出了2對(duì)引物，可用于閩茄5號(hào)及其近緣新組合間的檢測(cè)，結(jié)果表明有1對(duì)引物(Em2/Me5)擴(kuò)增出閩茄5號(hào)及其父本的多態(tài)性條帶；1對(duì)引物(Em3/Me3)擴(kuò)增出新組合(06-29×06-16)及其父本的多態(tài)性條帶，通過(guò)檢測(cè)F1代中是否出現(xiàn)雙親的特異性條帶，可以對(duì)不同品種進(jìn)行鑒定。吉康娜等[54]從19個(gè)多態(tài)性標(biāo)記中抽取3對(duì)多態(tài)性較好的InDel引物(EP-215、EP-1203和 EP-1067)，利用InDel標(biāo)記對(duì)茄子品種“NFENG-3”進(jìn)行純度鑒定，3對(duì)InDel引物在166株植株中均擴(kuò)增出條帶，其中2對(duì)(EP-215、EP-1203)具有多態(tài)性，并且兩對(duì)引物擴(kuò)增出的條帶中有149株的擴(kuò)增條帶表現(xiàn)一致，17株有不一致的條帶，品種純度為89.8%，與田間檢測(cè)結(jié)果吻合，說(shuō)明InDel標(biāo)記能夠用于茄子雜種一代純度的快速鑒定。上述研究結(jié)果表明，采用分子標(biāo)記檢測(cè)品種純度，可以區(qū)分出形態(tài)學(xué)標(biāo)記難以鑒別的細(xì)微差異，快速、準(zhǔn)確、省時(shí)省力[85，86]。

2.5 分子標(biāo)記輔助選擇育種

Mutlu等[87]使用SRAP、RGA、SRAP-RGA和RAPD標(biāo)記檢測(cè)茄子枯萎病抗性基因，用2316個(gè)引物組合篩選F2代和BC1代群體，用于抗枯萎病茄子DNA檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)SRAP標(biāo)記Me8/Em5、SRAP-RGA標(biāo)記Em12/GLPL2與抗性基因緊密連鎖，遺傳距離為1.2 cM；RAPD標(biāo)記H12與抗性基因的遺傳距離為2.6 cM，并將SRAP標(biāo)記轉(zhuǎn)化為實(shí)用的SCAR標(biāo)記。廖毅等[88]采用AFLP技術(shù)對(duì)58份不同果皮顏色茄子種質(zhì)(包括栽培種和野生近緣種)進(jìn)行親緣關(guān)系分析，篩選出與果皮顏色相關(guān)的AFLP標(biāo)記，并轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記，可以應(yīng)用于茄子果色的分子標(biāo)記輔助育種。Chen Mengqiang等[89]使用紫色花“Blacknite”和白花“小圓”雜交的F2代群體，將花青素合成酶精確定位于InDel標(biāo)記Indel8-11和CAPS標(biāo)記Efc8-32之間約165.6 kb范圍的8號(hào)染色體上，在生物信息學(xué)分析的基礎(chǔ)上，把29個(gè)基因定位于花青素合成酶靶區(qū)，其中有兩個(gè)為花青素合成酶候選基因，1個(gè)花青素合成酶基因(Sme2.5_01638.1_g00003.1)在啟動(dòng)子和編碼序列中是保守的，親本間沒(méi)有任何核苷酸變化；另一個(gè)基因(Sme2.5_01638.1_g00005.1)被檢測(cè)有4個(gè)單核苷酸多態(tài)性，而且在38位點(diǎn)的單堿基對(duì)缺失使花青素合成酶過(guò)早終止，導(dǎo)致花青素積累能力喪失，與白花及其他組織相比，花青素合成酶在紫色花中表達(dá)強(qiáng)烈，Sme2.5_01638.1_g00005.1是控制茄子花中花青素合成酶的良好候選基因。

3 展望

近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，人們應(yīng)用分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)茄子種質(zhì)資源進(jìn)行了大量的研究，這些研究克服了傳統(tǒng)遺傳標(biāo)記研究的不足，進(jìn)一步闡明了茄子種間及種內(nèi)的親緣關(guān)系及遺傳多樣性變化特點(diǎn)，構(gòu)建了一批遺傳圖譜，定位了一些重要農(nóng)藝性狀QTLs，為茄子種質(zhì)資源的深化利用奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。但與茄科蔬菜中的番茄、辣椒作物相比，茄子種質(zhì)資源分子生物學(xué)研究還存在較大的差距：一是遺傳圖譜間距較大，不飽和，QTL定位精度差；二是很多重要性狀QTLs或優(yōu)異基因尚沒(méi)有得到發(fā)掘，如抗性相關(guān)基因、品質(zhì)相關(guān)基因等；三是分子標(biāo)記輔助選擇育種還處于試驗(yàn)階段，相關(guān)的基礎(chǔ)研究還十分薄弱。這些都有待今后進(jìn)一步深人探討。隨著茄子高質(zhì)量基因組序列組裝的完成[90]，分子標(biāo)記技術(shù)將在茄子種質(zhì)資源發(fā)掘、創(chuàng)新和遺傳改良方面發(fā)揮更大的作用，相關(guān)研究也必將取得更大進(jìn)展。